家蚕丝素固定化果胶酶的研究

家蚕茧丝经高浓度氯化钙或碱溶液处理后,可制成不同形状的丝素．将这些丝素分别与果胶酶通过吸附以及与戊二醛交联结合,制备了不同形状固定化酶．对固定化酶性质的研究表明：丝素能有效地固定果胶酶;其最适ｐＨ值为４．０,比游离酶提高了０．５个单位;最适温度为６０℃,比游离酶提高了１０℃,改善了果胶酶的适应范围．同时还发现：在制备固定化酶时,戊二醛的浓度以０．２５％为好;酶浓度以３ｍｇ／Ｌ为宜     

阴离子交换树脂固定化果胶酶及其酶学性质的研究

以阴离子交换树脂为载体，戊二醛为交联剂，对果胶酶进行先吸附后交联的固定化，研究吸附温度、吸附pH值、吸附时间、加酶量、戊二醛浓度、交联温度、交联时间对果胶酶固定化效果的影响，同时对固定化果胶酶的特性进行了研究。研究表明，最佳固定化条件为：温度40℃，pH5．5，固定化6h，加酶量0．75mL／g树脂（浓度为1％酶液），戊二醛交联浓度0．1％，交联温度4℃，交联时间4h。酶学特性研究表明，固定化果胶酶在最适温度60℃，最适pH4．0下具有较好的操作稳定性。     

家蚕丝素固定化α—淀粉酶的制备及基理化特性

脱胶蚕丝用稀碱溶液处理后制成多孔的碱化丝素，经物理吸附方法固定α-淀粉酶，制得碱化丝素固定化酶。每克碱化丝素固定化酶的总活力为439.81U，固定化酶活力回收率为48.33%，活力表现率为74.18%。同样，蚕丝经高浓度氯化钙溶液溶解、脱盐等处理后制成丝素粉末，经吸附后用戊二醛为交联剂固定了α-淀粉酶，制成末状丝素固定化酶。每克粉末状丝素固定化酶的总活力为509.09U。活力回收率为58.33%，活力表现率为83.45%。经对固定化酶性质的研究表明：碱化丝素和丝素粉末均能较好地固定α-淀粉酶；最适温度比游离酶升高了10℃；最适pH降低了0.8-1.0个单位，固定化酶具有较长的操作半衰期（26-38d)、较强的抗蛋白质变性剂（8mol/L尿素溶液中的活力在80%以上）和贮存稳定性（贮存60d后，其活力大于50%）；实验还发现：在制备固定化淀粉酶时，酶的最适浓度为2.8-3.2g/L，戊二醛的最适浓度为0.25%。     

家蚕丝素固定化α-淀粉酶的制备及其理化特性

脱胶蚕丝用稀碱溶液处理后制成多孔的碱化丝素,经物理吸附方法固定α-淀粉酶,制得碱化丝素固定化酶.每克碱化丝素固定化酶的总活力为439.81 U,固定化酶活力回收率为48.33%,活力表现率为74.18%.同样,蚕丝经高浓度氯化钙溶液溶解、脱盐等处理后制成丝素粉末,经吸附后用戊二醛为交联剂固定了α-淀粉酶,制成粉末状丝素固定化酶.每克粉末状丝素固定化酶的总活力为509.09 U,活力回收率为58.33%,活力表现率为83.45%.经对固定化酶性质的研究表明:碱化丝素和丝素粉末均能较好地固定α-淀粉酶;最适温度比游离酶升高了10 ℃;最适pH降低了0.8～1.0个单位,固定化酶具有较长的操作半衰期(26～38 d)、较强的抗蛋白质变性剂(8 mol/L尿素溶液中的活力在80%以上)和贮存稳定性(贮存60 d后,其活力大于50%);实验还发现:在制备固定化淀粉酶时,酶的最适浓度为2.8～3.2 g/L,戊二醛的最适浓度为0.25%.     

球形交联壳聚糖固定化果胶酶的制备及特性研究

研究了球形交联壳聚糖固定化果胶酶的制备及其特性。结果表明:壳聚糖溶液浓度为2.0%,凝结液组成为15%NaOH∶75%乙醇=4∶1(体积比),以5.0%戊二醛交联6 h,可制得交联壳聚糖球载体;1 g载体固定10 mg的果胶酶,载体先与酶液缓慢振荡混合40 min后,在固定化体系(pH 3.4,4℃)中固定反应12 h,该条件下制得的固定化酶强度大,酶活力回收率高达91.45%;固定化果胶酶的最适温度45℃,最适pH 3.4,Kmapp值9.97 mg/mL;固定化酶的酸碱稳定性与温度稳定性均得到提高,连续使用7次后固定化酶活力还剩余53.74%。     

微胶囊法固定平菇半纤维素酶

以微胶囊法固定平菇半纤维素酶,探讨固定化条件与固定化酶的酶学性质。结果表明:当海藻酸钠浓度为3%,戊二醛浓度为1%时,固定化酶有较高的活力回收率;固定化酶的最适温度比游离酶提高了10℃,最适pH值较游离酶向酸性范围移动0.4个单位;游离酶和固定化酶的米氏常数分别为0.906 g/L和0.937 g/L;固定化酶的耐热性较好,在60～80℃下仍能保持较高的酶活力,具有良好的贮存稳定性。常见的大部分金属离子对固定化酶的活力影响较小。     

离子交换树脂固定化果胶酶条件的优化研究

 以离子交换树脂为载体、戊二醛为交联剂,对果胶酶进行固定化。研究了温度、pH值、时间、加酶量、戊二醛浓度、交联温度、交联时间对果胶酶固定化效果的影响。研究表明,最佳固定化条件为：温度40℃,pH 5.5,固定化6 h,加酶量0.75 mL,戊二醛交联浓度0.1%,交联温度4℃,交联时间4 h。在此条件下固定化果胶酶的酶活回收率达到80%以上。     

产脲酶细菌的固定化及转化条件研究

[目的]研究1株高产脲酶的芽孢杆菌菌体的固定化及其固定化细胞的转化条件。[方法]研究不同浓度海藻酸钠溶液、菌体包埋量、戊二醛溶液对固定化细胞脲酶酶活的影响,以及不同pH值、不同温度、几种离子浓度对脲酶活力的影响。[结果]结果表明,固定化细胞转化最适pH值为7.5,最适温度为40℃,最适海藻酸钠溶液浓度为30 g/L,最佳包埋量为40 g/L,最适戊二醛浓度为2%;细胞经过固定化后,细胞脲酶稳定性显著提高,经过戊二醛交联后,稳定性再次提高。固定化细胞的脲酶对Cu2+、Hg2+的抑制作用有一定的抗性。[结论]固定化细胞比游离细胞更适合工业化操作。     

家蚕丝素固定化木瓜蛋白酶的研究

采用质量分数为5％戊二醛在常温下处理脱胶丝素40min,洗净、真空干燥,制备活化丝素,以活化丝素为载体,采用共价交联法制备固定化木瓜蛋白酶。研究结果表明,最佳的固定化条件为：给酶量0．36mg／g(蛋白质质量浓度为0．12mg／mL)、pH7．5、温度4℃左右条件下,固定6h,所得到的固定化酶活力为1786．93U／g,活力回收高达69．54％。     

聚乙烯醇固定化胆固醇氧化酶的研究

【目的】探讨类芽孢杆菌胆固醇氧化酶（COD）的固定化,为COD的应用研究提供参考依据。【方法】以不同浓度的聚乙烯醇、硼酸为主要材料制备固定化酶,并通过试验确定制备固定化酶的最适浓度、最佳反应温度、最适pH、热稳定性、酸稳定性、米氏常数及操作稳定性。【结果】选用12％聚乙烯醇、5％硼酸制备的固定化酶形状好、强度适中、易操作、固定化率高,其最适反应温度60℃,最适反应pH7．0,热、酸稳定性比游离酶好,且稳定范围较游离酶宽,表观米氏常数Km（2．55×10^-5mol／L）相对游离酶变小,重复使用5次后酶活力仍能保持在67．8％以上,半衰期为8．91次。【结论】聚乙烯醇制备的同定化COD稳定性好,与底物亲和力较强,可重复回收利用,具有良好的应用前景。     

阳离子交换树脂D151固定化乳糖酶研究

以吸附率最高的阳离子交换树脂D151为载体,戊二醛为交联剂,用吸附交联法对黑曲霉乳糖酶进行固定化研究,优化固定化条件,以期改善乳糖酶性质,使黑曲霉乳糖酶适于低乳糖乳的生产。结果表明:固定化酶的最适温度为60℃,比游离酶低10℃;最适pH较游离酶稍向碱性方向移动;固定化酶比游离酶热稳定性降低;固定化酶与游离酶的酸碱稳定性有较大差异。在最适温度条件下,固定化酶较游离酶而言,在牛奶天然pH条件下使用更为适宜。在pH 6.5、50℃条件下,游离酶的半衰期仅为9 d;而固定化酶在此条件下反复使用20 d,仍具有59%的残余活力。该研究为工业化利用固定化酶生产低乳糖乳提供了技术依据。     

枯草杆菌脂肪酶固定化与酶学特性的初步研究

以枯草杆菌突变菌株所分泌的脂肪酶为研究对象,以人造沸石为载体,以戊二醛为交联剂,采用交联-吸附法固定脂肪酶,对固定条件和酶学特性进行了分析.结果表明:固定过程中交联剂最适浓度为3%,固定化酶最适反应温度为40℃,比游离酶高5℃,游离酶和固定化酶最适pH值均为8.0.固定化酶在最适温度下保温100 min后几乎没有酶活损失,重复反应5个批次后,酶活仍保留70%,说明采用该方法固定的脂肪酶具有较好的热稳定性和操作稳定性.     

海藻酸钠与MOFs复合材料固定化果胶酶的研究

主要制备海藻酸钠与MOFs复合材料(Alg-HKUST-1)微球进行果胶酶的固定化,将海藻酸钠以注射的方式加入到含有Cu²⁺的溶液中,通过金属离子诱导自组装,制备了海藻酸钠与MOFs复合材料,其中MOFs颗粒分布均匀,嵌入在复合材料的表面上。复合材料的形状是通过控制相应的水凝胶形状来控制的。通过利用扫描电镜、FT-IR等技术分别对微球的表观及性质进行了分析。果胶酶的固定化试验主要考察了底物浓度、pH、温度、时间等对果胶酶的影响。将游离果胶酶和固定化果胶酶酶学性质进行比较,主要结论是酶的最佳催化条件为自由酶pH=3.0,固定化酶pH=3.5;自由酶的反应温度为40℃,固定化酶的反应温度为50℃;最佳反应时间为60 min。酶经过载体固定化后,其储存稳定性有所提高。     

微胶囊法固定化糖化酶的研究

酶或细胞固定化技术是微生物发酵的主要手段之一,它可使生产速率和效率获得显著提高。为确定微胶囊法固定糖化酶的最佳条件,以壳聚糖和海藻酸钠为载体,采用微胶囊法固定糖化酶。试验结果表明,最佳固定化条件为:壳聚糖脱乙酰度为85%、海藻酸钠浓度为3%、戊二醛浓度为1.5%、氯化钙浓度为0.2 mol.L-1。固定化酶的最适作用温度为75℃,比游离酶提高了20℃,最适pH为4.5,比游离酶下降0.5个单位。固定化酶的活力最高达2 013.42 U.g-1干胶,相对活力为89.3%,米氏常数Km为1.28%,半衰期为223 h。采用壳聚糖和海藻酸钠为载体微胶囊法固定糖化酶的方法是可行的。     

几丁质固定化菊粉酶的研究

以自制的几丁质作载体，戊二醛作交联剂，用吸附交联法对菊粉酶进行了固定化研究。优化了固定化反应条件，在最适条件下，菊粉酶活力最大收率为３２％。固定化菊粉酶的最适温度为６０－６５℃，比游离酶提高５℃。最适ｐＨ保持不变。固定化酶的热稳定性和对酸碱稳定性都有较明显的改善，将固定化酶装柱进行菊芋汁连续水解试验，操作半衰期达２２ｄ。     

壳聚糖固定化氨基酰化酶的研究

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,用吸附交联法对氨基酰化酶进行了固定化研究.结果表明,在pH值为6.0,温度30℃的条件下,0.1g壳聚糖微球与5mL 1%戊二醛交联后,固定0.8mg氨基酰化酶的固定化效果最佳.固定化酶的最适温度和pH值分别为50℃和7.0,而游离酶的最适温度为40℃,最适pH值为7.5,固定化酶在50～70℃都保持了较高的酶活力,热稳定性远高于游离酶,固定化酶的Km值为11.796×10-2mol/L,较游离酶有所升高,该固定化酶具有良好的操作稳定性.     

两种改性壳聚糖载体对香菇纤维素酶固定化的研究

制备聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)载体与戊二醛改性壳聚糖载体,并以这两种载体对香菇纤维素酶进行固定化。探讨了载体制备过程中的主要影响因素与最适固定化酶条件,并对两种载体固定化纤维素酶的性能进行对比研究。结果表明,聚乙二醇改性壳聚糖与戊二醛改性壳聚糖固定纤维素酶的Km值分别为1.205、0.626g/L,游离酶的Km值为0.759g/L,两种载体固定纤维素酶的最适温度均比原酶有所提高,且前者的最适温度范围明显变宽;与游离酶相比,固定化酶有良好的操作和贮存稳定性。     

丝素固定化木瓜蛋白酶的特性研究

以活化丝素为载体,采用共价交联法固定木瓜蛋白酶,研究了丝素固定化木瓜蛋白酶的酶学性质．结果表明：固定化酶的表观米氏常数Km^app[酪蛋白]为0．092％,是溶液酶的米氏常数km的0．46倍;最适pH为7．5;pH稳定性在6．5—8．0;在4—55℃范围内酶活力稳定;溶液酶的操作半衰期为38d,固定化酶为54d．固定化酶的操作半衰期较溶液酶长．     

海藻酸钠交联包埋法固定化纤维素酶研究

以海藻酸钠为载体,采用交联包埋法固定化纤维素酶.考察各因素对固定化酶相对酶活力的影响,并通过正交试验确定纤维素酶最佳固定化条件为:以1％戊二醛为交联剂,给酶量为64.52 μg/mL,纤维素酶与海藻酸钠溶液在65℃条件下固定化2h,滴入2％ CaCl2溶液中制备固定化纤维素酶.固定化酶酶活力较游离酶高约80％,其最适pH值向碱性方向偏移,最适反应温度不变,且固定化酶的酸碱稳定性和热稳定性均优于游离酶.     

以离子交换树脂为载体的果胶酶固定化研究

通过对广泛应用于工业上的10种吸附树脂和离子交换树脂进行果胶酶固定化载体的筛选,确定D311大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂为固定化果胶酶的最佳载体,并对果胶酶进行固定化研究.在固定化温度为36℃、加酶量为0.8 mL/g树脂、固定化时间为5h、固定化pH值为5、戊二醛交联浓度为0.10％、戊二醛交联温度为8℃、戊二醛交联时间为6h的试验条件下,固定化酶活回收率达到了91.2％.