高速逆流色谱法分离制备南极磷虾虾粉抗氧化肽

采用复合蛋白酶酶解南极磷虾得到虾粉多肽,经超滤分离和高速逆流色谱技术进行分离纯化并检验其体外抗氧化活性。结果表明:经超滤分离后的多肽在分子量范围为5～10 ku时多肽抗氧化活性最好,当浓度为10 mg/m L时,其超氧阴离子自由基清除率达到21. 28%,DPPH自由基清除率为86. 52%,对羟基自由基清除率为53. 49%,Fe~(2+)螯合率为85. 35%。对分子量范围在5～10 ku的多肽进行高速逆流色谱分析,采用体积比为氯仿∶丁醇∶甲醇∶水=4∶0. 75∶3∶2作为两相溶剂体系,下相作固定相,上相作流动相;反转,转速900 r/min,恒温水浴温度为25℃,在流动相的流速1. 5 m L/min,进样浓度20 mg/m L的条件下分离得到5个组分。经测定:当浓度为5 mg/m L时,P3组分清除超氧阴离子自由基的能力和Fe~(2+)螯合能力均显著高于其余4个组分,分别为37. 18%和92. 33%,P2组分的DPPH自由基清除率最高,为90. 33%,P5组分的羟基自由基清除率最高,为70. 11%。与未经HSCCC分离的对照组相比,抗氧化活性均得到明显增强。     

南极磷虾粉的营养成分分析及评价

目的开发以虾粉为原料的优质饲料蛋白源。方法利用嗜热链球菌18748 (Streptococcus thermophilus 18748)发酵南极磷虾粉,分析影响发酵的因素,并通过响应面法优化菌株的发酵条件以提高酶活力。经过体外模拟胃消化后利用DPPH自由基清除率、OH·自由基清除率、总酚含量和总抗氧化能力对抗氧化活性进行分析。结果影响发酵的显著因素为：发酵温度43 ℃,初始pH 6,接种量5%,此时嗜热链球菌18748产蛋白酶活力达到最大(6.82 U/mL)。抗氧化分析结果显示： OH·自由基和DPPH自由基清除能力显著降低(P<0.05),但仍然具有较高的清除水平,总酚和总抗氧化能力显著提高(P<0.05)。结论南极磷虾粉发酵液在模拟消化过程中,胃蛋白酶可能促进抗氧化活性物质的释放,且消化后仍然具有良好的抗氧化活性。本研究可为进一步工业化开发发酵虾粉及抗氧化产品提供借鉴。     

南极磷虾肽制备工艺优化及体外抗氧化研究

本文研究了3种不同的蛋白酶(木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶)分别水解南极磷虾得到多肽的体外抗氧化活性,以清除超氧阴离子、羟自由基和DPPH的能力为指标。结果表明,木瓜蛋白酶水解制备的多肽抗氧化活性比较好,其次是碱性蛋白酶。用响应面法优化木瓜蛋白酶水解南极磷虾制备多肽的工艺参数,经凝胶电泳测定其分子量,显示该多肽有3个明显条带,其分子量大多位于3~7 ku。将上述多肽溶液脱氟后经超滤系统分离,按分子量(molecular weight,MW)大小分为MW≥10 ku,5~10 ku,MW≤5 ku的3种多肽,并比较其抗氧化活性的强度。在本实验体系浓度范围内,3种不同分子量的多肽对超氧阴离子、羟自由基、DPPH的清除能力有所差异,随着多肽浓度的增加,其对清除能力也增大,呈明显的剂量依赖关系。     

南极磷虾虾粉加工干燥技术与设备应用分析

干燥是虾粉加工的关键工序之一,是影响虾粉品质的重要因素,适宜的干燥技术和设备可有效保证南极磷虾虾粉质量,提高南极磷虾虾粉生产效率。综述了几种常用的食品干燥技术和设备的原理、适应物料形式以及优缺点,并根据南极磷虾的物料特性,对这几种干燥技术和设备在南极磷虾虾粉加工中的应用前景和可行性进行了分析,旨在为南极磷虾干燥技术创新和干燥设备研发提供理论依据与技术支撑。     

南极磷虾羧肽酶的分离纯化及酶学性质

南极磷虾生活在极寒环境,其体内特殊的蛋白酶系统是其维持正常新陈代谢的关键因素。羧肽酶是南极磷虾蛋白酶系统中一类主要且关键的蛋白酶,酶学性质研究对其后续基础研究开展及商业利用都具有指导意义。本研究以南极磷虾为原料,采用缓冲液提取、硫酸铵分级盐析,DEAE-琼脂糖凝胶FF阴离子层析和Sephadex G-100凝胶层析,从南极磷虾匀浆液中分离纯化出一种羧肽酶,SDS-PAGE结果显示其分子量为30 ku。酶学性质研究结果显示:该酶最适温度为30℃;最适pH为8.0。热稳定性较差,即使在4℃下保温超过2 h酶活性会急剧下降。金属离子Ni~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)和Mg~(2+)具有激活作用,且激活作用依次增强;而Ca~(2+)、Fe~(3+)和Cu~(2+)起抑制作用,Cu~(2+)抑制效果最明显。对巯基有修饰作用的抑制剂DTT和β-巯基乙醇对其有抑制作用,推测该酶活性中心存在二硫键;金属蛋白酶抑制剂EDTA和1,10-菲罗啉对该酶活性有明显的抑制作用,说明了其具有金属蛋白酶特性;而丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF对该酶抑制作用并不强烈。以脲酰-L-苯丙氨酸为底物溶液,测得该酶K_m为0.005 9 mg/mL、V_(max)为4.909 1 U/min。     

不同蒸煮方式对南极磷虾粉虾青素含量的影响

[目的]研究有机溶剂法提取南极磷虾粉中虾青素的条件,并以虾青素为评价指标,探讨不同蒸煮方式对南极磷虾粉品质的影响,确定南极磷虾最佳蒸煮方式及工艺参数。[方法]以南极磷虾为原料,通过单因素试验及正交试验分析得到虾青素提取的最佳工艺条件;研究在不同蒸煮温度、时间条件下,直接水煮、隔水蒸煮、100℃水煮-直接水煮和100℃水煮-隔水蒸煮4种方式对虾青素含量的影响。[结果]虾青素的最佳提取条件为:无水乙醇为溶剂,浸提时间6 h、浸提温度50℃、料液比1∶20(g/m L);直接水煮、隔水蒸煮2种单一蒸煮方式在蒸煮温度70℃、蒸煮时间9 min时,所得虾粉的虾青素含量都达到最大值,且直接水煮的效果更好,虾青素含量达到221. 58μg/g;与单一方式蒸煮相比,组合方式蒸煮对虾青素含量的影响更小,南极磷虾的最佳组合方式是100℃水煮-直接水煮,蒸煮参数为第1次100℃直接水煮30 s,第2次50℃直接水煮9 min,最终得到虾粉的虾青素含量为253.16μg/g。[结论]该研究为南极磷虾粉生产中蒸煮加工提供理论依据。     

响应面优化南极磷虾粉肽制备工艺及α-葡萄糖苷酶抑制活性分析

该研究以南极磷虾粉为原料,α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,在确认最佳生物酶的基础上,通过单因素实验和响应面优化酶解工艺条件,并用超滤和G-25进行分离纯化,凝胶色谱法探究酶解液和多肽的分子量及其分布情况。结果表明：复合蛋白酶酶解效果最佳;最佳酶解条件为酶解时间5.9 h、料液比3.75:1、酶添加量0.062 g/g(原料);酶解液的分子量集中分布在3000 u以下,占98.63%;经超滤C4（<3 ku）组分对α-葡萄糖苷酶抑制率IC50为（14.89±2.15） mg/mL;G-25纯化C4-2组分对α-葡萄糖苷酶抑制率IC50为（4.64±0.15） mg/mL。C4-2组分中<1000 u的多肽占97.6%,其中C4-2-1、C4-2-2、C4-2-3的分子量分别为597 u、335 u、246 u。本文第一次研究了南极磷虾粉制备α-葡萄糖苷酶抑制活性肽的方法,为南极磷虾资源的综合利用提供了依据。     

南极磷虾羧肽酶A的分离纯化及其酶学性质分析

[目的]建立南极磷虾羧肽酶A的分离纯化方法,并研究分析其酶学性质,为南极磷虾羧肽酶A的开发及应用打下基础.[方法]南极磷虾粗酶液经硫酸铵分级沉淀、HiTrap DEAE FF阴离子交换柱层析和SEC 70凝胶过滤柱层析,纯化得到的羧肽酶A,以SDS-PAGE分析其分子量;通过分析酶系反应温度、pH、金属离子、抑制剂对南极磷虾羧肽酶A活力的影响,明确其酶学性质和酶促动力学.[结果]南极磷虾羧肽酶A分子量为75.0 kD,其最适温度30℃,最适pH 8.0.Mg2+、Zn2+、Mn2+和Ni2+对南极磷虾羧肽酶A有显著的激活作用(P<0.05,下同),且金属离子浓度越高,激活效果越明显;Ca2+、Fe3+、Cu2+和Hg2+对南极磷虾羧肽酶A存在不同程度的抑制作用,以Hg2+的抑制作用最强,Fe3+的抑制作用最弱.金属蛋白酶抑制剂乙二胺四乙酸(EDTA)、3-苯基丙酸(3-phenylpropionic acid)和1,10-菲罗啉(1,10-phen-athroline)对南极磷虾羧肽酶A活力有显著的抑制作用,且抑制剂浓度越高,抑制效果越明显.[结论]南极磷虾羧肽酶A具有金属蛋白酶特性,可开发成降解酶制剂在食品工业及医药行业中推广应用.     

大米抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

通过高效凝胶过滤层析和反相高效液相色谱先后对大米渣蛋白酶解后的多肽溶液进行分离纯化,分别得到组分2和组分RF9;再经反相高效液相色谱-质谱联用对组分RF9进行分析鉴定得到抗氧化肽氨基酸序列L-Q-P-Y(Leu-Gln-Pro-Tyr),分子质量为520.277u。合成的抗氧化肽片段L-Q-P-Y质量浓度为1 mg/mL时,对DPPH自由基清除率达到85.84%。     

南极磷虾粉中氟形态及其分析技术

[目的]建立南极磷虾氟形态分析方法,为南极磷虾的开发利用提供技术支持.[方法]采用逐级化学—超声波浸提技术对南极磷虾粉中氟的赋存形态进行分析研究,并对提取条件进行优化.[结果]南极磷虾粉中氟的赋存形态可分为水溶态氟、可交换态氟、氧化态氟、有机束缚态氟和残渣态氟,分别占总氟的15.7%、17.1%、31.7%、21.5%和14.0%,总氟含量为2518.6 mg/kg,各形态氟含量次序为:氧化态氟>有机束缚态氟>可交换态氟>水溶态氟>残渣态氟.[结论]采用逐级化学—超声波浸提技术能有效地定量研究南极磷虾中氟的赋存形态.     

羊乳清蛋白ACE及DPP-IV抑制肽的分离纯化与鉴定

使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶对羊乳清蛋白进行水解,分别在不同时间取样,体外测定其ACE抑制活性和DPP-IV抑制活性。通过中空纤维膜超滤、凝胶过滤层析和反向高效液相色谱（RP-HPLC）的手段对酶解产物进行逐步分离和纯化,评价各级分离产物的生物活性;通过液质联用（LC-MS/MS）的方法鉴定多肽的氨基酸组成,根据质谱结果合成多肽。结果表明：中性蛋白酶水解物具有一定的生物活性,双重活性多肽Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro对ACE和DPP-IV均有抑制作用,其IC₅₀值分别是573.32±4.63和2 065.35±22.30 μmol/L。Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp具有较好的DPP-IV抑制活性,其IC₅₀值为964.14±4.09 μmol/L。羊乳清蛋白水解物可以作为食源性材料用于管理伴有高血压的Ⅱ型糖尿病患者的饮食。     

影响酶法回收南极磷虾壳中蛋白质及虾青素的因素研究

[目的]研究影响酶法回收南极磷虾加工下脚料中的蛋白质及虾青素的因素,以期在提取虾壳中蛋白质的同时又能将虾青素回收,增强蛋白质的应用价值.[方法]以南极磷虾加工下脚料为原料,采用酶解法提取虾青素与蛋白质,考察在碱性蛋白酶作用下不同加热温度、酶底比、加热时间、pH对蛋白质和虾青素回收的影响.[结果]经试验确定,以Alcalase碱性蛋白酶为提取剂,酶解时间2h,酶底比为3 750 U/g,pH 8.5,酶解温度为50℃时,蛋白质的提取率最高;酶解时间为2h,酶底比3 750 U/g,pH 8.5,酶解温度为55℃时,虾青素的提取率最高.[结论]研究可为南极磷虾加工下脚料的综合开发利用提供参考依据.     

具有抗氧化活性的猪血浆蛋白酶解产物的制备及理化特性

为系统考察酶解时间、酶种类和酶加入的顺序对猪血浆蛋白酶解产物抗氧化性的影响,采用风味蛋白酶、碱性蛋白酶及双酶(风味蛋白酶,碱性蛋白酶不同的加入顺序)在各自最适条件下对猪血浆蛋白进行酶解,并研究酶解产物的功能特性。结果表明:0~120min内,随着酶解时间的延长,水解度升高,各酶解产物的抗氧化性均有所增强;60~180min内,双酶酶解产物的清除DPPH自由基的能力、亚铁离子螯合能力和还原力显著高于单酶酶解产物(P0.05);90~150min内,先加碱性蛋白酶后加入风味蛋白酶酶解的酶解产物的水解度、清除DPPH自由基能力和还原力显著高于先加风味蛋白酶酶解后加入碱性蛋白酶酶解的酶解产物(P0.05);具有较高抗氧化性的酶解产物在不同pH条件下均有较好的溶解性和热稳定性;溶解性均在90%以上。     

泥鳅蛋白抗氧化肽的Plastein反应修饰研究

采用中性蛋白酶水解泥鳅蛋白制备抗氧化肽,以DPPH自由基清除能力为指标,用木瓜白酶对泥鳅蛋白抗氧化肽进行Plastein反应修饰研究。通过单因素试验研究了外源氨基酸种类、pH值、时间、E/S、温度和外源氨基酸的添加量对泥鳅蛋白抗氧化肽Plastein反应修饰的影响,在此基础上采用响应面法对泥鳅蛋白抗氧化肽Plastein反应修饰工艺进行了优化。结果表明,泥鳅蛋白抗氧化肽Plastein反应修饰的最佳条件为:底物浓度40%、组氨酸添加量为0.5 mmol·g^-1、E/S为1 782.49 U·g^-1 、pH值9.0、温度35 ℃、时间3 h,此条件下制备的Plastein反应修饰产物的抗氧化活性是修饰前的1.99倍,其对DPPH自由基的清除率为(77.98±0.08)%。     

包装材料对黑蒜粉的抗氧化活性及货架期的影响

研究了聚乙烯铝箔(ALP)和复合塑料(PE/PA)包装对黑蒜粉抗氧化活性、溶解性、色泽及其货架期的影响。结果表明,随着贮藏时间的增加,黑蒜粉总酚含量和DPPH自由基清除率逐渐降低,而溶解性和色差逐渐增加;贮藏30 d后,黑蒜粉的总酚损失和DPPH自由基清除率在ALP包装中比PE/PA中分别低15.5%和10%,但在PE/PA中黑蒜粉溶解性和总色差是在ALP中的1.16倍左右;在20℃和50%相对湿度(RH)条件下,黑蒜粉在ALP和PE/PA包装中的预测货架期分别为290和174 d。这表明ALP比PE/PA更适用于包装喷雾干燥的黑蒜粉末。     

穿心莲超微粉对三黄鸡抗氧化功能和免疫功能的影响

将180羽三黄鸡公雏随机分成4组,分别为空白对照组(基础日粮)、抗生素组(在基础日粮中添加30 mg·kg-1杆菌肽锌和6 mg·kg-1硫酸抗敌素)、超微粉组(在基础日粮中添加1.0%穿心莲超微粉)和普通粉组(在基础日粮中添加1.0%穿心莲普通粉),每组3个重复,每个重复15羽.通过检测28和70 d三黄鸡的抗氧化指标、免疫器官指数、血清溶菌酶活性、白介素-2(IL-2)含量、干扰素-γ(IFN-γ)含量和外周血淋巴细胞转化率,研究穿心莲超微粉对三黄鸡抗氧化功能和免疫功能的影响.结果显示:28 d,与空白对照组相比,超微粉组和普通粉组三黄鸡的总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性提高(P0.05),丙二醛(MDA)含量降低(P0.05);70 d,两个试验组的SOD活性提高(P0.01).28 d,与空白对照组相比,超微粉组的脾脏指数、胸腺指数和血清溶菌酶活性提高(P0.05),法氏囊指数、IL-2含量、IFN-γ含量和外周血淋巴细胞转化率提高(P0.05);70 d,超微粉组的脾脏指数、IL-2含量和血清溶菌酶活性提高(P0.05),胸腺指数、法氏囊指数、IFN-γ含量和外周血淋巴细胞转化率提高(P0.05).上述结果表明,穿心莲超微粉能够增强三黄鸡的抗氧化功能和免疫功能.     

三种酶制备牡蛎蛋白水解物的抗氧化活性和功能特性分析

目的：比较分析木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶三种不同酶水解牡蛎获得的蛋白产物抗氧化活性和功能特性。方法：采用木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶三种不同酶水解牡蛎蛋白获得水解物,并分别测定它们的在不同pH下的溶解度、乳化性以及不同浓度水解物的还原能力、DPPH自由基清除率和Fe^{2 +}螯合能力。结果：表明三种酶水解物都有较高的溶解度(p＜0.01),胰蛋白酶产生的水解物溶解高度达94.8％(p＜0.05);水解物溶解度和乳化活性指数在pH4显著降低(p＜0.05)。牡蛎蛋白质水解产物的还原能力、DPPH自由基清除能力和金属螯合活性随浓度的增加而增强,其中胰蛋白酶和胃蛋白酶抗氧化能力较强(p＜0.01)。结论：三种蛋白酶水解牡蛎蛋白可获得抗氧化活性强、溶解度高的水解物,并受浓度和pH的影响,它们的水解物可作为一种潜在的抗氧化功能多肽利用。     

射频加热对辣椒粉挥发性成分及抗氧化活性的影响

辣椒粉在加工、运输、储存等过程中极易受到食源性致病菌污染,大量研究表明新型射频加热技术对辣椒粉等低水分食品具有良好的杀菌效果。本研究在前期已探索射频加热对不同初始水分活度辣椒粉杀菌效果及相关品质(颜色、维生素C、辣度和辣椒素类物质)变化的基础上,继续深入研究射频加热对辣椒粉中挥发性成分及其抗氧化活性的影响。辣椒粉中主要挥发性物质是醛酮类、酯类、醇类、烷烯类、呋喃,还有少量的酸类和醚类,经射频处理后(70～90℃,5 min),2-甲基丁醛、3-甲基丁醛、3-羟基-2-丁酮、羟基丙酮和(2R,3R)-(-)-2,3-丁二醇的含量随温度升高而明显增加,而部分酯类、醚类及烯醇类物质含量明显下降。射频加热(50～70℃)对辣椒粉DPPH·自由基清除能力没有显著影响,但是会降低ABTS自由基清除能力以及增强铁离子和铜离子还原能力,而在实验研究温度范围内,不同保温时间(0～180 s)对抗氧化活性的影响相对较小。