家畜胚胎显微分割技术的研究现状

<正> 自Willadsen(1979)在英国剑桥大学首次分割绵羊胚胎,产生了世界上第一批同卵双生羔以来,各种家畜的胚胎显微分割也相继获得成功。这一方法必将成为家畜胚胎移植技术的一个组成部分,应用于同卵双胎或同卵多胎的常规生产,使每头供体母畜可     

奶牛胚胎分割成功获同卵双胎

家畜胚胎分割是80年代发展起来的一项生物技术。应用这项技术可以把一个胚胎分成两个乃至几个,移植给受体母畜可以得到一卵双胎或多胎,从而有可能成倍地增加胚胎和后代的数目。近年来,随着商业性牛胚胎移植的发展,牛胚胎分割研究进展很快。一些国家分割牛胚胎,羊胚移植的妊娠率已接近未分割的整胚移植的妊娠率,开始在生产上应用分割技术来扩大优质胚胎数和提高产仔率。我国近两年来也开始这方面的研究。山羊、绵羊和兔子等胚胎分割已先后成功获得同卵双胎。但牛胚胎分割还未得到同卵双犊。     

山羊胚胎分割及同卵双生试验

选择山羊晚期桑椹胚、囊胚、孵出囊胚和孵出增大胚泡,用简化分割法二分。将19对裸半胚移植于18只受体羊,结果有12只妊娠,其中两只胚胎消失,两只流产,其余8只足月分娩,共产半胚羔11只。晚期桑椹胚、囊胚、孵出囊胚和孵出增大胚泡各组的半胚发育为羔羊的发育率分别为12.5％(1/8)、20％(2/10)、25％(3/12)和62.5％(5/8)。前三组均未获得同卵双生羔羊。在第四组,将4对裸半胚移植于4只受体,有3只妊娠,足月分娩半胚羔5只,其中两对为同卵双生。本研究证明,对称分割山羊孵出增大胚泡,不仅其半胚在体内仍可继续发育形成正常胎儿,而且不装透明带移植其裸半胚,仍能获得较高的同卵双生率。山羊孵出增大胚泡更适宜用简化分割法分割。     

波尔山羊胚胎数量、质量与受体移植妊娠率的关系

本文就波尔山羊胚胎数量，质量与受体移植妊娠率的关系进行了探讨。结果表明：胚胎质量优劣是直接影响胚胎移植成功率的关键因素。移植胚胎数量因品种不同有差异。移植双胚，奶山羊受体胚胎成羔率53．4％，明显高于成都麻羊胚胎成羔率36．3％，成都麻羊单胚成羔率为66．7％。     

细胞核移植技术在研究太湖猪高繁殖性能核外基因效应中的应用

细胞核移植技术细胞核移植技术 ,根据核供体细胞的不同 ,有胚胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植和体细胞核移植。以核移植为核心技术的动物克隆技术 ,其基本技术环节除基本显微操作外 ,主要包括供核的分离、受体细胞的去核、核卵重组、重组胚的融合、核移植胚的培养与移植或重复克隆。供体核的分离胚胎细胞用 0 2 %链霉蛋白酶预处理胚胎 ,去胚胎的胶膜及透明带 ,离出单个卵裂球。目前在胚细胞核分离技术中有两大重要进展 :①胚胎干细胞系建立──胚胎干细胞在发育阶段上类似于内细胞团细胞 ,胚胎干细胞系是早期胚胎经…     

农畜胚胎移植的近期发展

<正> 近五年来,农畜胚胎移植技术的重点已转移到胚胎的显微操作方面。胚胎切割以产生同卵多胎技术的应用已走同商业化;同种或种间嵌合体动物已经问世;核移植技术导致了纯种或克隆牛及羊胚囊阶段胚胎的产生,分子生物学与胚胎显微注射相结合已产生了基因突变动物。     

生产条件下安哥拉山羊胚胎徒手分割研究

生产条件下,徒手二分割安哥拉山羊桑椹胚和囊胚,并将裸半胚手术移植于受体羊子宫角。１９９３年用０．５％链霉蛋白酶处理胚胎１～６ｍｉｎ软化透明带后,在玻璃培养皿中的含１２．５％蔗糖和５％新生犊牛血清（ＮＣＳ）的ＰＢＳ液内分割,将３３枚半胚移植到２１只受体,有２只受体妊娠。１９９４年用０．２５％链霉蛋白酶处理胚胎０．５～１ｍｉｎ软化透明带后或不经处理而直接在磨砂玻璃皿中的含２０％血清的ＰＢＳ液内分割,移植受体３４只,有１０只受体产羔（２９．４％）,共产羔１１只,其中１对为同卵双生,半胚成羔率为２０．０％（１１／５５）。１９９５年,囊胚不经处理直接在磨砂玻璃皿中的含２０％ＮＣＳ的ＰＢＳ液内分割,半胚成对移植于受体羊黄体侧子宫角,产羔受体率为５０．０％（１３／２６）,共产羔１６只,其中３对为同卵双生,半胚成羔率为３０．８％（１６／５２）,胚胎成羔率为６１．５％（１６／２６）。     

供受体羊发情同期化程度对胚胎移植效果的影响

将2008枚鲜胚移植给1146只受体羊,移植单胚和双胚的受体总妊娠率为63.1r3/1146,移植胚胎成羔率为52.861/2008。结果表明供、受体发情同步差在 1～ 0.5d、0d和-0.5～-1d时,移植单胚的受体妊娠率和胚胎成羔率没有明显的差异P>0.05;移植双胚的受体差异显著P<0.05,同步差为0d时的胚胎移植效果最好。移植双胚的受体中,奶山羊受体与供体同步差为-0.5～-1d和0d时,胚胎成羔率显著高于同步差为 1～ 0.5d的受体P<0.05;成都麻羊与供体同步差在 1～ 0.5d、0d和-0.5～-1d时,其胚胎成羔率均有显著差异P<0.05;南江黄羊和大耳羊做受体时,供、受体同步差在 1～ 0.5d、0d和-0.5～-1d时进行胚胎移植,胚胎成羔率无统计学差异。     

家畜卵和胚胎冷冻的现行方法及有待研究的问题

近17年来,采用建立起来的牛非手术采卵及冷冻方法,已能将牛桑葚胚和囊胚冷冻,并获得较高的存活率。现在试验中和商业上牛胚胎冷冻大多数是采取控制降温和解冻的程序。解冻后存活率按形态评定可达90％～100％,非手术移植的妊娠率为60％。绵羊、山羊和马的桑葚胚和囊胚用控制降温和解冻程序也能有效的冷冻。简化的控制降温和解冻程序的一步法用于牛胚胎,妊娠率可达50％。此法免去了解冻后较繁琐的脱除冷冻保护剂和胚胎评定过程。玻璃化法和快速冷冻法是较先进的方法,可大大缩短胚胎冷冻时间,而且无需复杂的冷冻设备。不过,迄今家畜胚胎冷冻的结果还是有待提高的,尽管牛、绵羊、山羊桑葚胚和囊胚用玻璃化法冷冻已经成功,移植后产了仔。另外,卵母细胞、早期胚胎、显微手术(切割、克隆、活组织检查)后的胚胎、猪胚胎冷冻成功率还很低。因此,为使胚胎移植技术能在生产中应用和开展胚胎显微操作、体外受精、克隆和基因转移之类生物技术的试验及应用,很有必要加强研究建立起更为有效的胚胎冷冻解冻方法。     

信息动态

<正> 绵羊胚胎冷冻后切割移植成功 中国农科院畜牧所牛、羊胚胎库课题组,继取得绵羊冷冻胚胎解冻后存活率达66.1％(39/59)、移植成功率达55％(22/40)的国内先进水平之后,与浙江省农科院畜牧所合作,在农村条件下,采用简易胚胎切割器械和方法,开展绵羊冷冻胚胎切割试验。1988年9月将切割后的绵羊胚胎移植给1头受体母羊,已于今年2月产下1公羔——我国首例冷冻胚胎切割后的半胚羊羔。     

马“半胚”移植成功

自然情况下的同卵双胎马驹尚未见报道。目前,马胚胎是在排卵后6-9天非手术法回收。我们在显微操作中发现,7日龄马胚胎的外层胶状物具有弹性,显微外科难以切割。我们用非手术法从正常发情排卵后5.5或6天的母马回收胚胎。第5.5天未回收到胚胎的母马于第6天再次冲卵。只用直径小于175微米的胚胎。将胚胎置于改进的并加有10%胎犊血清(FCS)的杜氏磷酸盐缓冲液(Dul becco'sPBS)微滴中,用显微操作器,一套显微刀     

移植奶牛胚胎冷冻解冻后分割成的 二分胚生产同卵双生犊牛的实验

对解冻后品质优良的A级囊胚进行分割,并将二分胚移植生产同卵双生犊牛。结果表明,9枚A级囊胚切割成18枚半胚,胚胎分割成功率100%（9/9）。单胚移植受体6头,妊娠2头,妊娠率33.3%;双半胚移植6头,妊娠2头,妊娠率33.3%。     

输卵管冲胚对供体绵羊繁殖性能的影响

对8只良种绵羊进行了超排处理,并利用输卵管冲胚法回收胚胎;6个月后,又对其进行了第2次超数排卵处理及胚胎回收,并在第2次回收胚胎时,观察、记录两侧卵巢及输卵管的完好状态;试图研究、认知输卵管冲胚对供体绵羊超排效果及繁殖性能的影响。试验结果表明,输卵管冲胚易对绵羊输卵管及卵巢造成损伤,对超排效果产生影响;但输卵管冲胚对供体绵羊所造成的繁殖器官损伤,不足以影响其自身的自然繁殖能力;最好在第1次和第2次超排、冲胚期间,让供体绵羊自然怀孕、分娩1次,以便繁殖器官的结构修复和功能恢复。     

影响绵羊冻胚移植妊娠率的因素分析

本研究对胚胎质量、胚胎移植数量、胚胎发育阶段、冷冻方法、移植方法及饲养管理水平等因素对移植产羔率的影响进行研究,以提高绵羊胚胎移植效率。结果表明:采用1.5mol/L乙二醇做冷冻保护剂对胚胎进行常规冷冻,冻前A级胚胎冷冻/解冻后可用胚率、存活率、降级率均高于B级,差异极显著(P<0.01)。移植1枚冷冻解冻后A级、B级或2枚(A+B)胚胎的受体移植产羔率分别为44.48%、46.84%和44.81%。经χ2检验分析,三者之间无显著差异(P>0.05)。移植双胚的受体双羔率为22(%53/241),以胚胎为单位计算,产羔率仅为33.40%。A级囊胚和桑椹胚的产羔率之间无显著差异(P>0.05)。1.5 mol/L乙二醇常规冷冻保存的体内胚胎移植产羔率高于EFS40玻璃化冷冻保存,但经统计学分析,二者无显著差异(P>0.05)。子宫手术移植和腹腔内窥镜法子宫移植之间产羔率不具统计学差异(P>0.05)。在牧场条件下大规模移植的平均产羔率为43.95%,范围在20%￣70%之间,受体饲养管理水平对绵羊移植产羔率有较大影响。     

引入南非杜泊绵羊冷冻胚胎移植的效果

本文就引入南非杜泊绵羊冷冻胚胎移植的效果进行了报道。共引入冷冻胚胎 2 0 0枚 ,分夏、秋两次进行了移植。用孕激素处理受体羊共 172只 ,36h内有 16 4只发情 ,同期发情率 95 .35 % ;平均移植成功率 36 .84 % ,其中夏季较低 ,为 2 5 .0 % ,秋季较高 ,为 4 4 .5 7% ,差异极显著 (P <0 .0 1) ;移植冻胚数 (单双胚 )对移植效果有影响 ,双胚移植成功率为 4 9.0 2 % (2 5 / 5 1) ,单胚为 30 .6 9% (31/ 10 1) ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ;产羔用胚率 ,单胚 30 .6 9% (31/ 10 1) ,双胚 2 9.4 1% (30 / 10 2 ) ,差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,表明移双胚比移单胚可提高移植成功率 ,但不节省胚胎。杜泊羔羊具有典型的肉用体型 ,生长发育快 ,适应性强 ,颇有开发价值。     

桑椹胚的四“半胚”嵌合体牛犊出生

我们用非手术法采卵和移植,首次获得了未经体内或体外培养的桑椹胚4“半胚”嵌合体牛犊。试验用西门塔尔、荷斯坦、瑞士褐牛×褐牛青年母牛作供体,于第一次输精后5—6.5天用非手术法采得桑椹期胚胎。按 Brem 等(1983)方法,用显微刀片打开透明带,用细玻璃针、钩取出分裂球团,得到空透明带,然后聚合两种嵌合胚胎:试验1,将两个亲本的二等分“半胚”装进一个空透明带里;试验2,     

青海高原地区应用绵羊胚胎移植技术的效果分析

采用同期发情+超排对12只特克塞尔羊、无角陶赛特羊进行处理;同时采用自然发情+超排对12只德国肉用美利奴母羊进行处理。结果表明:采用同期发情+超排处理,每只特克塞尔母羊平均获卵胚8.7枚,获受精卵数7.1枚;陶赛特母羊平均获卵胚数1.8枚,获受精卵数1.8枚(P<0.01)。德国肉用美利奴供体母羊的平均获胚数13.5枚,可用胚8.7枚,可用胚率67.0%(P<0.01)。对85只受体绵羊进行同期发情处理,结果表明,处理后同期发情率达88.2%。将12枚可用胚胎移入11只受体,其中10只受体移入单胚,1只受体移入双胚,移植成功率达83.3%(P<0.01)。对62只自然发情的受体母羊进行胚胎移植,结果表明,移植2枚胚胎受体母羊的受胎率比移植1枚的要高34.0%(P<0.01)。     

杜泊绵羊冻胚的引进及利用效果观察

利用南非引进黑头杜泊绵羊冷冻胚胎以小尾寒羊作为受体进行冻胚移植,获得纯种杜泊绵羊,在山东省适应性、生长发育、繁殖性能、改良效果等观察。结果表明,南非纯种杜泊绵羊的出生重、平均日增重、繁殖率达到了在原产地南非所表现出的本品种标准。并且在山东省内肉羊业的发展和改良工作中,杜泊绵羊的表现表明其具有很高的推广应用价值,利用该品种作为肥羔生产的父本是非常理想的一个品种。     

聚合嵌合法制作黄牛和水牛种间嵌合胚的初步研究

通过聚合嵌合法初步建立一套黄牛和水牛种间嵌合的程序与方法。聚合嵌合法采用链酶蛋白酶消化透明带或用机械剥离法去除透明带，然后在含有100 μg/ml PHA的培养液中聚合形成嵌合胚。结果发现， 8-细胞黄牛胚胎聚合水牛桑椹胚与黄牛囊胚聚合水牛桑椹胚相比，聚合胚存活率和囊胚发育率均无显著差异（P>0.05）。采用显微手术法分离黄牛和水牛8-细胞胚胎卵裂球进行聚合，聚合率为92.3%，囊胚发育率为58.3%，与用0.25%链酶蛋白酶分离胚胎卵裂球进行胚胎聚合的聚合率（86.7%）和囊胚发育率（46.2%）均无显著差异（P>0.05）。以上结果表明：①水牛和黄牛胚胎通过卵裂球聚合获得的种间嵌合胚胎能继续发育；②胚胎聚合前的发育阶段对其聚合成功率和随后的胚胎发育无明显影响。③胚胎卵裂球的分离方法（显微手术法和酶消化法）对其聚合率和囊胚发育率无明显影响。     

移植奶牛胚胎冷冻后分割成的二分胚生产同卵双生犊牛的实验

对解冻后品质优良的Ａ级囊胚进行分割，并将二分胚移植生产同卵双生犊牛。结果表明：９枚Ａ级囊胚切割成１８枚半胚，胚胎分割成功率１００％。单胚移植受体６头。妊娠２头，妊娠率３３．３％；双半胚移植６头，妊娠２头，妊娠率３３．３％。