绵羊肌肉生长激素受体基因表达的发育性变化研究

1材料与方法 1．1试验动物选取新疆维吾尔族自治区石河子市紫泥泉种羊场的2、30、60、90和120日龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊各6只（120日龄的只有新疆细毛羊）,共计54只,测体重后屠宰,采取背最长肌,立即置于液氮中速冻,-70℃保存。     

绵羊肌肉生长激素受体基因表达的发育性变化研究

[目的]探讨绵羊肌肉生长激素受体基因(GHR)在生长发育早期的表达。[方法]用real time PCR法对不同日龄雄性哈萨克羊和新疆细毛羊背最长肌GHRmRNA的表达进行定量分析。[结果]绵羊背最长肌GHRmRNA的表达随着日龄的增加先升后降,然后趋于水平,30日龄时最高。哈萨克羊的表达量在2~90日龄期间都极显著低于新疆细毛羊(P<0.01)。[结论]日龄和品种对绵羊肌肉GHR基因表达均有较大影响。     

绵羊肌肉IGF-I.基因表达的发育性变化研究

生长激素（GH）在动物体内主要有两种作用方式：（1）GH与肝脏等靶器官上的GHR结合,产生胰岛素样生长因子（IGF）,随后IGF以内分泌方式进入血液,与胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）结合后到达靶器官,作用于胰岛素样生长因子受体（IGFR）,从而调节动物生长发育。②GH直接作用于靶器官GHR,通过旁分泌或自分泌IGF直接影响细胞的代谢,从而调节机体的生长发育。GH可作用于骨骼肌GHR,产生旁分泌或自分泌的IGF-I调节肌肉的生长发育,或直接影响细胞的代谢。笔者采用实时定量PCR法,以处于生长发育早期的雄性哈萨克羊和雄性新疆细毛羊为研究对象,检测了IGF-I基因在肌肉中表达情况。     

绵羊肝脏生长激素受体基因表达的发育性变化研究

[目的]研究哈萨克羊和新疆细毛羊肝脏生长激素受体(Growth hormone receptor,GHR)基因在发育早期的表达,为绵羊早期生长发育的研究提供资料。[方法]采用实时定量PCR检测2个品种羊在2、30、60、90和120日龄时肝脏GHRmRNA的水平,并用SPSS软件进行统计分析。[结果]绵羊肝脏GHR基因的表达量在2日龄时较高,30日龄时降到最低点,然后持续上升;30日龄后的变化趋势与绵羊的累积生长曲线呈正相关(P<0.05);哈萨克羊的GHR表达量在2~90日龄期间均低于新疆细毛羊,但仅在2和90日龄时差异极显著(P<0.01)。[结论]雄性哈萨克羊和新疆细毛羊肝脏GHRmRNA表达的发育性变化模式基本相似,品种间差异较小;肝脏GHR基因在绵羊生长发育的调控中可能起着重要作用。     

二花脸猪和大白猪睾丸生长激素受体基因表达的发育性变化

随机选取0、3、20、30、90、120和180日龄二花脸公猪和大白公猪各4头，用相对定量RT-PER法研究睾丸组织中生长激素受体（GHR）基因表达的发育性变化。结果表明，二花脸猪与大白猪睾丸GHR mRNA表达的发育模式不同，二花脸猪GHR mRNA相对表达量从0到30日龄逐渐上升，在90和120日龄呈阶段性降低（P〈0．05），之后在180日龄又再次上调；大白猪GHR mRNA相对表达量在出生当日最高，3日龄显著下降（P〈0．05），随后直至180日龄维持在较低水平并相对恒定。总的来说，二花脸猪睾丸GHR mRNA相对表达量显著高于大白猪（P〈0．05）。提示：不同品种猪睾丸GHR mRNA表达具有特定的发育模式，并可能与性成熟的早晚有关。     

二花脸猪与大白猪肝脏生长激素受体基因表达的发育性变化

 选刚出生的雄性纯种二花脸猪和雄性纯种大白猪各 2 8头 ,前者按中国地方猪种饲养标准饲养 ,后者按美国NRC标准饲养。测定不同发育阶段平均日增重 (BWG) ,并分别于 0、3、2 0、30、90、12 0、180日龄宰杀取样 ,用相对定量RT PCR方法 ,以 18SrRNA作内标 ,测肝脏生长激素受体 (GHR)mRNA丰度。结果发现 ,(1)从出生到 180日龄大白猪体重和BWG均显著高于二花脸猪。 (2 )大白猪和二花脸猪肝脏GHR基因表达发育性变化趋势相同 ,肝脏中GHR基因表达在出生时较低 ,随后表达逐渐增加 ,12 0日龄时达峰值 ,随后维持在较高水平 ,其发育性变化与BWG显著相关 (二花脸猪R =0 .6 8,P <0 .0 1,大白猪R =0 .96 ,P <0 .0 1)。双因子分析表明 ,大白猪肝脏GHR的表达极显著高于二花脸猪 (P <0 .0 1) ,其中从初生到 30日龄品种间差异不明显 ,在 90日龄到 180日龄大白猪肝脏GHR表达明显高于二花脸猪。提示 ,肝脏中GHR基因表达具有显著的年龄依赖性和明显的品种特征 ,肝脏中GHR基因表达对动物的生长有重要影响。     

绵羊肌肉IGF-IR基因表达的发育性变化研究

[目的]为绵羊的生长发育研究提供基础资料。[方法]以2、30、60、90、120日龄雄性哈萨克羊和2、30、60、90日龄新疆细毛羊为试验动物,对其肌肉IGF-IR基因进行PCR扩增,并对扩增产物进行电泳检测和序列分析。[结果]绵羊肌肉IGF-IR基因PCR扩增产物在琼脂糖凝胶上出现了287和379 bp2条带,该基因与牛IGF-IR基因序列的同源性为98.59%;在整个研究过程中,哈萨克羊IGF-IRmRNA表达量较低、较稳定,仅在30日龄时略有上升;新疆细毛羊IGF-IRmRNA表达量在2日龄时较高,30日龄时略有下降,60日龄时达到最高峰,90日龄时降到最低水平,且各日龄表达量差异显著;哈萨克羊mRNA表达量在2~60日龄时显著低于新疆细毛羊,而90日龄时显著高于新疆细毛羊。[结论]绵羊肌肉IGF-IR基因表达存在较大的品种间差异。     

绵羊肌肉IGF-I基因表达的发育性变化研究

[目的]研究哈萨克羊和新疆细毛羊肌肉中胰岛素样生长因子Ⅰ(Insulin-like growth factorⅠ,IGF-I)基因在发育早期的表达,为绵羊早期生长发育的研究提供资料。[方法]采用实时定量PCR检测2个品种羊在2、30、60、90和120日龄时肌肉中IGF-ImRNA的水平,并用SPSS软件进行统计分析。[结果]绵羊肌肉IGF-ImRNA的表达量随着日龄的增加呈现出先升后降的趋势,哈萨克羊肌肉IGF-ImRNA的峰值出现于30日龄,新疆细毛羊出现于60日龄;哈萨克羊的表达量在2日龄和90日龄时与新疆细毛羊差异不显著(P>0.05),在30~60日龄期间极显著低于新疆细毛羊(P<0.01)。[结论]雄性哈萨克羊和新疆细毛羊肌肉IGF-I mRNA表达具有相似发育性变化模式,但是表达量存在品种间差异。     

放牧与舍饲条件下山羊肌肉发育和抗氧化能力变化研究

【目的】探究在放牧、舍饲条件下幼龄山羊肌肉品质及抗氧化能力的发育性变化。【方法】选择体况良好、体重相近的经产湘东黑山羊母羊25头,进行同期发情处理,怀孕后产羔,获得36头羔羊,不记公母。出生后20 d内所有羔羊均仅喂以母乳。在0、7、14 d,每个时间点分别随机选取4头屠宰;21 d时,将剩余的24头羔羊随机分为放牧组和舍饲组,每组12头,除母乳外,放牧组以牧草为食,舍饲组补给精料及与放牧组相同的牧草,40 d断奶;在42、56、70 d时,两组每个时间点分别随机选取4头进行屠宰。称量宰前活重、胴体重,采集背最长肌,测定肌肉中粗蛋白（CP）、肌内脂肪（IMF）、氨基酸（AA）、脂肪酸（FA）的组成和含量及主要抗氧化酶活性,包括过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、还原型谷胱甘肽（GSH）和总抗氧化能力（T-AOC）。【结果】（1）羔羊宰前活重、胴体重随日龄显著增加（P＜0.05）,相较于舍饲羊,放牧羊宰前活重较低（P＞0.05）,但胴体重较高（P＞0.05）。（2）无论是放牧还是舍饲,肌肉干物质中CP水平随日龄呈线性增加趋势（P＜0.05）,IMF含量呈升高趋势（P＞0.05）;相较于舍饲羊,放牧羊CP水平较低（P＞0.05）,IMF含量明显较高（P＜0.05）。（3）肌肉中氨基酸总量（TAA）、成人必需氨基酸（AEAA）、婴儿必需氨基酸（BEAA）在不同日龄间没有显著差异（P＞0.05）,但TAA随日龄有升高趋势（P＞0.05）,鲜味氨基酸（FAA）随日龄呈显著增加趋势（P＜0.05）;相较于舍饲羊,放牧羊TAA、AEAA、FAA含量较低,BEAA则较高,但均差异不显著（P＞0.05）。（4）肌肉中饱和脂肪酸（SFA）在放牧条件下随日龄变化不显著（P＞0.05）,舍饲时呈二次曲线变化（P＜0.05）,单不饱和脂肪酸（MUFA）显著降低（P＜0.05）,多不饱和脂肪酸（PUFA）、必需脂肪酸（EFA）显著升高（P＜0.05）;与舍饲羊相比,放牧羊SFA、PUFA、EFA比例较低（P＞0.05）,MUFA较高（P＜0.05）。（5）随着年龄的增长,CAT、SOD活力在0-14 d呈升高趋势,14-42 d有所降低,之后继续呈增加趋势,整体变化不显著（P＞0.05）,GSH-Px活力呈显著性二次曲线变化（P＜0.05）,T-AOC呈升高趋势（P＜0.05）,GSH含量在放牧组呈线性降低趋势（P＜0.05）,在舍饲组变化不显著（P＞0.05）;相较于舍饲羊,放牧羊SOD、GSH-Px、T-AOC活力较高（P＞0.05）,CAT活力较低（P＞0.05）,GSH含量则显著较低（P＜0.05）。【结论】随着年龄的增长,山羊宰前活重、胴体重显著增加,但饲养方式（放牧、舍饲）对其影响不显著,而肌肉中CP水平逐渐增加,IMF沉积呈升高趋势,氨基酸、脂肪酸的组成一致,含量有差异,相应指标是舍饲羊优于放牧羊。整体来看,舍饲羊肉质稍优于放牧羊。但山羊肌肉抗氧化能力随日龄逐渐增强,且放牧羊高于补饲羊。因此,根据当地和养殖场的条件,以及幼龄山羊肉质阶段性发育规律,合理选择放牧、舍饲等饲养方式,如可以将二者结合或轮换等,以获得更好的肉质和更大的经济效益。     

绵羊肌肉LPL基因表达的发育性变化及其对肌内脂肪含量的影响

 【目的】研究绵羊肌肉中脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）基因mRNA的发育性变化规律及其对肌内脂肪沉积的影响。【方法】选取2、30、60、90和120日龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊各6只（120日龄只有新疆细毛羊），屠宰后取背最长肌检测肌内脂肪含量，用荧光实时定量PCR法检测肌肉LPL基因mRNA表达水平，分析在不同时期的变化及其与肌内脂肪含量的关系。【结果】随着日龄的增加，雄性哈萨克羊的IMF（Intramuscular Fat）含量持续上升，各生长时期差异显著（P＜0.05），而新疆细毛羊的IMF含量在各生长时期无显著差异（P＞0.05），雄性哈萨克羊的IMF含量30～90 d期间极显著高于新疆细毛羊（P＜0.01）；雄性哈萨克羊肌肉LPL基因的表达量在2日龄时最高，60日龄时降到最低，然后逐渐上升，2日龄时LPL表达量极显著高于其它日龄（P＜0.01）。新疆细毛羊的表达量在2日龄时较低，30日龄时升到最高，随后下降，到90日龄时降到最低，然后又逐渐上升；30日龄表达量与2、90、120日龄差异极显著（P＜0.01），与60日龄差异显著（P＜0.05）；60日龄表达量与2、90、120日龄差异显著（P＜0.05）；哈萨克羊LPL基因2～60日龄的表达量与IMF含量呈负相关，相关系数为-0.625（P＜0.05）；新疆细毛羊IMF含量与LPL基因表达量无显著相关性。【结论】新疆细毛羊和哈萨克羊背最长肌肌内脂肪沉积的发育性变化不同，在生长发育早期，哈萨克羊随日龄的增加其IMF上升，新疆细毛羊在各时期保持一个稳定的水平；LPL基因在哈萨克羊生长早期对其肌内脂肪的沉积可能有负调控作用，而对新疆细毛羊无明显作用。     

赖氨酸对绵羊GHR基因表达的影响

1材料与方法 1．1试验材料 1．1．1试验动物及分组。选用年龄约1岁,体重约40kg,身体健康的母羊15只。设3个处理组：A对照组（基础日粮）、B赖氨酸低剂量组（基础日粮＋4g赖氨酸盐）和C赖氨酸高剂量组（基础日粮＋10g赖氨酸盐）,每组5个重复。试验预试期7d,正试期28d,共计35d。     

赖氨酸对绵羊GHR基因表达的影响

[目的]研究赖氨酸对绵羊生长的影响及其机理。[方法]选用1岁左右的绵羊15只,均分为A、B、C 3组,分别在基础日粮中添加0、4、10 g赖氨酸盐。饲喂28 d后,全部屠宰,取样。提取组织总RNA,反转录后扩增GHR和GAPDH基因,分析不同处理背最长肌中GHR mRNA的表达丰度。[结果]绵羊GHR基因在B组背最长肌组织中的表达量显著高于对照A组（P〈0.01）,极显著高于C组（P〈0.01）;C组与A组间差异不显著（P〉0.05）。[结论]在日粮中添加赖氨酸能够提高绵羊GHR基因在背最长肌中的表达量,但不存在剂量依赖性。     

生长激素受体(GHR)mRNA在绵羊皮肤组织切片定位

以地高辛标记的GHR cDNA为探针,利用原位杂交的方法对GHR mRNA在绵羊皮肤组织切片进行定位。结果显示绵羊毛囊中存在生长激素受体基因。因此,可以确定GH对羊毛生长的作用是通过直接作用其位于毛囊上的受体而实现的。     

GM-CSF与生长抑素融合表达质粒对小鼠肌肉组织GHR和IGF-I mRNA表达的影响

选择70只小白鼠,随机分为7组,每组10只,雌雄各半。其中第1组为对照组,第2-4组分别肌肉注射pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF+pcS/2SS DNA疫苗;第5～7组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF+pcS/2SS DNA疫苗,以β-actin作为内参,利用相对半定量RT-PCR,检测小鼠肌肉组织GHR和IGF-I mRNA的表达。结果表明:第3、5和6组的GHR mRNA表达显著高于1组和7组(P<0.05),第5和6组的IGF-I mRNA表达显著高于1组、2组、4组和7组(P<0.05),GM-CSF与SS的融合表达质粒(pGM-CSF/SS)的GHR和IGF-I mRNA表达高于pGM-CSF+pcS/2SS共同免疫,同种DNA疫苗,口服免疫组的GHR和IGF-I mRNA表达总体上比肌肉注射组要高。这些结果证明,GM-CSF可促进SS DNA疫苗的免疫效果,提高肌肉组织中GHR和IGF-I mRNA的表达;pGM-CSF/SS效果优于pGM-CSF+pcS/2SS,口服免疫组要优于肌肉注射免疫组。