复方硫酸锌粉Ⅰ型中硫酸锌含量测定方法的改进

采用原子吸收分光光度法对复方硫酸锌粉Ⅰ型中一水硫酸锌含量进行了测定。对现行标准中进行了适当改进,回收率为95．29％～103．76％,较现行标准大大提高,同时也简化了操作步骤。     

我国非食用动物产品标准体系现状分析

我国非食用动物产品的标准体系已初步建立,但现行标准还不够完善。针对现行标准混乱、覆盖不全面且与国际标准存在差距等问题,提出了开展现有标准的修订更新工作、拓展标准覆盖范围、开展国际交流等改进建议,以期对我国非食用动物产品行业的健康有序发展提供借鉴。     

索氏抽提法测定粗脂肪含量的改进

粗脂肪含量是粮食、油料、饲料等产品标准中重要的质量指标,是评价产品品质的重要依据之一。国内外测定粗脂肪含量的方法有十多种,索氏抽提法是目前应用最广泛的测定方法,是公认的脂肪含量测定的经典方法。在实际工作中,此法存在的问题主要是抽提时间过长和抽提结束后抽提瓶不易恒重。围绕这些问题,我们对抽提过程和抽提前后采用的处理手段进行改进,改进以国标方法为参照,以热浸提-油重法和残余法为改进方法,对照比较了3种检测方法的测定结果。1　改进方法原理经典索氏提取法测定脂肪是将样品放在抽提筒内以水浴蒸馏冷凝的乙醚进行回流浸提,…     

非水滴定法测定甘氨酸亚铁产品中游离甘氨酸含量的研究

文中分析了国标方法(GB/T 21996-2008)测定甘氨酸亚铁产品中游离甘氨酸含量所存在的问题,指出现行方法会导致很大的系统正误差和低的测试精密度,并用实验进行了验证。在此基础上,对原有方法进行了改进,即先利用甘氨酸和甘氨酸亚铁在冰醋酸中的溶解度差异实现两者的分离,然后再用高氯酸滴定分离出的游离甘氨酸。采用改进方法对实际样品进行了测试,RSD为3.7%,加标回收实验的回收率为95.4%~102.8%。这表明改进后的方法具有较高精密度和准确度,能够满足实际样品分析检测的要求。该方法有望用于其它氨基酸螯合物中游离氨基酸的测定。     

化探样品中部分元素测定溶矿方法的改进

在我国开始进行化探样品的分析从上个世纪的70年代开始,主要是对样品中的元素进行测定,来进行地质勘探,通过对溶矿方法的逐渐改进,对于元素的测定越来越准确,也越来越多样,本文主要通过研究溶矿的方法上进行改进来提高样品中元素的测定准确度。在本次的研究中利用电感耦合等离子体光谱法的方法进行样品中部分元素的测定。这种测定方法获得的结果准确度较高,并且速度较快,非常适合在实验室进行操作。     

电位滴定法测定畜禽粪便中的有机质

建立了电位滴定法测定畜禽粪便中的有机质的新方法,改进后的方法简单、快速、准确,特别适合大量样品的测定.     

测定畜禽粪便中的有机质

建立了电位滴定法测定畜禽粪便中的有机质的新方法，改进后的方法简单、快速、准确，特别适合大量样品的测定。     

食品中重金属检测方法研究探讨

如今重金属污染问题已经日趋严重,在食品、医药、环境等诸多方面都引起了人们广泛的重视,近年来重金属快速检测的方法发展迅速,在重金属快速检测与筛查方面发挥了很大的作用,但还需进一步改进和完善。目前,重金属检测仍然存在以下不足,忽略了对有益重金属的测定,忽略了对重金属元素的不同价态分别进行测定,还有不容忽视样品中其它物质对测定的影响。本论文从应用新型的科技成果到结合生物技术对重金属的检测方法做出探讨。     

微量元素预混合饲料中碘的测定方法探讨

在饲料行业中测定微量元素预混合饲料中的碘含量时,采用国家标准GB/T13882—2010饲料中碘的测定硫氰酸铁-亚硝酸催化动力学法。我们在采用该方法检测已知碘含量的碘酸盐样品时,发现检测结果与样品中已知碘含量相差很大,文章对该方法作了适当改进后,使方法的准确性得到大大提高。改进之处为:国标中只采用碘化钾一种物质做工作曲线,本文针对实际样品中碘源的不同而采用对应的碘标准物质做工作曲线。实验结果表明,采用国标中的方法检测样品中的碘源分别为碘化钾、碘酸钾、碘酸钙时,对应的相对误差分别为+6.0%、-21.3%、-36.9%;采用改进后的方法,大大提高了检测结果的准确性,相对误差在-2.7%~+6.0%之间。     

酶法测定饲料中淀粉总含量方法研究

为解决酶法测定饲料中淀粉总含量实际检测中遇到的问题,对粉碎粒度、振荡速度等参数进行了优化,对淀粉葡萄糖苷酶（AMG）的选用、AMG添加量的确定方法等问题进行研究和补充,并且研究了方法对含β-葡聚糖样品的适用性。结果显示,使用样品粉碎度为通过0.425mm筛;振荡速度为150 r/min;选用不含游离葡萄糖的AMG;并经酶活检测,确定酶的正确添加量后,方法 RSD在0.7%～2.7%之间,加标回收率在90.7%～103.6%之间,具有良好的精密度和准确性,适用于饲料原料、配合饲料、精料补充料、浓缩饲料中淀粉总含量的检测。样品中含有的β-葡聚糖对方法测定结果没有显著影响。     

紫云英嫩梢矿质元素成分及作为菜用营养价值的分析

为探明不同紫云英(Astragalus sinicus L.)品种嫩梢矿质元素含量的差异,分析其菜用营养价值,本研究测定了10个不同紫云英品种的分枝期地上部嫩梢的8种矿质元素含量,同时,结合主成分分析法与系统聚类法筛选了适宜菜用的品种。结果表明紫云英嫩梢中矿质元素含量由高到低为钙(Ca)>磷(P)>镁(Mg)>铁(Fe)>锰(Mn)>锌(Zn)>铜(Cu)>硒(Se);矿质元素含量综合得分排名前3的品种分别为‘湘紫1号’、‘闽紫7号’和‘弋江籽’;将10个紫云英品种聚为四类(A,B,C,D),其中A,B,C类分别以高Ca, Fe及Cu含量为特征,D类为‘湘紫1号’,其矿质元素含量均较高,综合评价最高。因此,紫云英种质间嫩梢矿质元素含量均有不同程度的差异,‘湘紫1号’嫩梢矿质元素含量高,作为菜用综合品质高。     

Coxiella burnetii associated reproductive disorders in domestic animals-a critical review

The bacterium Coxiella burnetii has been detected in the fetal membranes, birth fluids and vaginal mucus, as well as in the milk and other excretions of several domestic mammals. The finding of C. burnetii in association with abortion, parturition and in the postpartum period has led to the hypothesis that C. burnetii causes a range of reproductive diseases. This review critically evaluates the scientific basis for this hypothesis in domestic mammals.The review demonstrates a solid evidence for the association between C. burnetii infection and sporadic cases of abortion, premature delivery, stillbirth and weak offspring in cattle, sheep and goats. C. burnetii induced in-herd epidemics of this complete expression of reproductive failure have been reported for sheep and goats, but not for cattle. The single entities occur only as part of the complex and not as single events such as generally increased stillbirth rate. Studies show that C. burnetii initially infects the placenta and that subsequent spread to the fetus may occur either haematogenous or by the amniotic-oral route. The consequences for the equine, porcine, canine and feline conceptus remains to the elucidated but that infection of the conceptus may occur is documented for most species. There is no solid evidence to support a hypothesis of C. burnetii causing disorders such as subfertility, endometritis/metritis, or retained fetal membranes in any kind of domestic animal species.There is a strong need to validate non-pathology based methods such as polymerase chain reaction for their use in diagnostic and research in relation to establishing C. burnetii as the cause of abortion and to adapt an appropriate study design and include adequate control animals when linking epidemiological findings to C. burnetii or when evaluating effects of vaccination in production herds.     

Epidemiological and genetical studies in Norwegian pig herds. III. Herd effects

Herd differences in disease incidence in 70 Norwegian pig herds were assessed by health card registrations. Such differences proved to be considerable. The incidence of the MMA-syndrome, mastitis, metritis and neonatal diarrhoea was higher in herds producing only weaners ("weaner herds") than in herds with combined production. The mean disease incidence in herds providing breeding stock for the Norwegian Pig Breeders' Association ("breeding herds") was at the same level as in ordinary combined production herds. There was no consistent relationship between changes in disease incidence and herd size, though the incidence of the MMA-syndrome was lower in the largest herds.     

Surveys on Coxiella burnetii infections in Swedish cattle,sheep, goats and moose

Background

Q fever is a zoonotic disease caused by the bacterium Coxiella burnetii. Prevalence data in ruminant species are important to support risk assessments regarding public and animal health. The aim was to investigate the presence of or exposure to C. burnetii in cattle, sheep, goats and moose, and to compare two enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs). National surveys of antibodies against C. burnetii were performed for dairy cattle (n=1537), dairy goats (n=58) and sheep (n=518). Bovine samples consisted of bulk milk, caprine of pooled milk, and ovine of pooled serum. Antibodies were investigated in moose samples (n=99) from three regions. A one-year regional cattle bulk milk survey was performed on the Isle of Gotland (n=119, four occasions). Cattle, sheep and goat samples were analysed with indirect ELISA and moose samples with complement fixation test. For the sheep, goat, and parts of the cattle survey, samples were run in parallel by ELISAs based on antigens from infected ruminants and ticks. Bulk milk samples from the regional cattle survey and vaginal swabs from a subset of the sheep herds (n=80) were analysed for the agent by polymerase chain reaction. Spatial clustering was investigated in the national cattle survey.

Results

The prevalence of antibodies in dairy herds was 8.2% with large regional differences. High risk clusters were identified in the southern regions. The prevalence among dairy herds on the Isle of Gotland varied from 55.9% to 64.6% and 46.4% to 58.9.0% for antibodies and agent, respectively, overall agreement between agent and antibodies was 85.2%. The prevalence of antibodies in sheep was 0.6%, the agent was not detected the vaginal swabs. Antibodies were not detected in goats or moose, although parts of the moose samples were collected in an area with high prevalence in cattle. The overall agreement between the two ELISAs was 90.4%.

Conclusions

The prevalence of antibodies against C. burnetii in dairy cattle in Sweden shows large regional differences. The results suggest that C. burnetii is a rare pathogen among Swedish moose, dairy goat and sheep. ELISAs based on ruminant and tick antigen performed in a similar manner under Swedish conditions.     

高寒草甸优势禾草-异针茅内生真菌的分离与鉴定

异针茅作为青藏高原地区重要的乡土草种之一,是高寒草甸草原主要的建群禾草种类。迄今为止,有关异针茅所感染内生真菌的种类和分类地位的研究尚未见报道。基于此,以青海高原地区两个地理种群的异针茅为研究对象,采用常规分离培养形态观测和管家基因扩增目的片段基因并与已公布的内生真菌序列构建系统发育树的方法,确定异针茅感染内生真菌的种类和分类地位。结果表明:异针茅分离出的内生真菌菌落形态、生长速度和分生孢子形态等均与Epichloё属内生真菌的形态特征相似。编码蛋白tub和肌动蛋白actin序列构建的系统发育树表明,异针茅感染的内生真菌种类分别为Epichloёgansuensis和Epichloёsylvatica,而转录延长因子tef序列构建的系统发育树发现异针茅感染的内生真菌种类分别为Epichloёinebrians和E.sylvatica。由此可见,异针茅感染的内生真菌分别为甘肃内生真菌E.gansuensis、醉马草内生真菌E.inebrians和欧洲短柄草内生真菌E.sylvatica;进一步揭示异针茅感染的内生真菌表现出多样性,异针茅与其感染的内生真菌间未形成严格的宿主特异性。     

不同密度甘肃马先蒿寄生和内生真菌互作对紫花针茅内源激素及生物碱含量的影响

根寄生植物是禾草生长过程中的一种生物逆境,禾草内生真菌能增强其对生物或非生物逆境的耐受能力;然而,有关禾草内生真菌对不同密度根寄生逆境下禾草生长、内源激素水平和生物碱含量变化的研究鲜有报道。基于此,通过开展温室盆栽试验,以建立根寄生关系的带菌(E+)和未带菌(E-)紫花针茅及根寄生植物-甘肃马先蒿为研究对象,比较E+和E-紫花针茅在不同甘肃马先蒿寄生强度下生长、内源激素和生物碱含量变化。结果表明,与未寄生紫花针茅相比,随着甘肃马先蒿密度增加,紫花针茅生物量降低80%,株高、分蘖数和根长均降低25%,吲哚乙酸、脱落酸含量分别增加43%和51%,细胞分裂素含量降低50%。内生真菌侵染显著提高紫花针茅生长特性,增加内源激素和生物碱含量;带菌紫花针茅在根寄生逆境下生物碱含量持续增加,同时甘肃马先蒿利用根部木质部通道可获取寄主内生真菌合成的生物碱。由此可见,内生真菌通过调控紫花针茅体内有关生长和逆境预警相关内源激素水平及改变生物碱含量的方式增强紫花针茅对甘肃马先蒿根寄生逆境的耐受能力,为利用禾草内生真菌共生体修复甘肃马先蒿型退化草地提供新视角。     

蒲公英提取物对LPS诱导小鼠乳腺炎的减轻效应及其机制分析

旨在研究蒲公英提取物对内毒素（LPS）诱导小鼠乳腺炎的减轻效应及其机制分析。将小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组和蒲公英提取物高、中、低剂量组。蒲公英提取物高、中、低剂量组分别按10.0、5.0、2.5 g·kg^-1灌胃给药,连续灌胃6 d,2次·d^-1,空白组灌胃等体积生理盐水。末次给药1 h后,于小鼠乳房基部分别灌注50 μL 0.2 mg·mL^-1 LPS,建立LPS诱导的小鼠乳腺炎模型,阳性组在建模后6和12 h腹腔注射5 mg·kg^-1地塞米松。24 h后取血,分离血清,剥离乳腺组织。ELISA法测定小鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6）的含量,髓过氧化物酶（MPO）试剂盒测定小鼠血清MPO的含量,HE染色观察病理变化,Western blot法测定小鼠乳腺中TLR4蛋白以及NF-κB信号通路和MAPKs信号通路相关蛋白的表达。结果显示,蒲公英提取物高、中剂量组对LPS诱导的乳腺炎小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌有极显著抑制作用（P<0.01）,极显著降低小鼠血清中MPO的含量（P<0.01）;蒲公英提取物高、中剂量组能改善LPS诱导的小鼠乳腺组织的病理变化,极显著下调LPS诱导的小鼠乳腺中TLR4、p-IκB、p-p65、p-p38、p-JNK、p-ERK蛋白的表达（P<0.01）。结果表明,蒲公英提取物通过调控NF-κB和MAPKs信号通路对LPS诱导的小鼠乳腺炎有明显减轻作用,为蒲公英的临床开发及应用奠定了基础。     

11种牛分枝杆菌抗原在牛结核病诊断中的初步评价

为筛选及评价用于牛结核病诊断的抗原,本试验将CFP-10、ESAT-6、TB10.4、TB27.4、MPT51、MPT63、MPT64、MPB70、MPB83、Rv3872和Ag85B共11种牛分枝杆菌抗原分别作为包被抗原建立间接ELISA方法,比较其对牛结核病的检出率;同时利用豚鼠和牛的皮试试验评价重组蛋白作为皮试试验刺激原的潜力。此外,将重组蛋白分别刺激结核病阳性牛和阴性牛的抗凝血24 h,检测血浆中的IFN-γ水平,评价各重组蛋白作为IFN-γ释放试验刺激原的潜力。结果显示,不同重组蛋白对结核病阳性血清的反应活性不一,MPB70总检出率最高,为59.7%;其次是Ag85B、ESAT-6和MPB83,检出率均在45%以上;MPT51的检出率最低,仅为2.2%。豚鼠和牛皮试试验均显示,单个重组蛋白作为刺激原难以产生令人满意的迟发型过敏反应（delayed type hypersensitivity,DTH）,而TB10.4、TB27.4、MPT64、MPT63或Rv3872作为补充抗原,分别与CFP-10或ESAT-6混合,均可特异性地刺激结核病阳性牛产生较强的DTH反应,且与PPD-B无显著差异（P>0.05）。重组蛋白CFP-10、ESAT-6、TB10.4和MPT51均能刺激结核病牛全血释放一定的IFN-γ,其中CFP-10、CFP-10-ESAT-6串联蛋白和MPT51刺激结核病阳性牛全血释放的IFN-γ显著高于阴性牛（P<0.05）。因此,这11种牛分枝杆菌抗原并不适合单独用于牛结核病的血清学诊断、皮试试验或IFN-γ释放试验,但以CFP-10和ESAT-6为核心,TB10.4、TB27.4、MPT64、MPT63、Rv3872或MPT51作为其补充抗原,均能提高检测敏感性,有作为皮试试验和IFN-γ释放试验特异性刺激原用于牛结核病诊断的潜力。     

硒缺乏通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导鸡胸腺细胞凋亡

本试验旨在探讨硒缺乏是否通过激活Toll样受体信号通路诱导鸡胸腺细胞凋亡。复制硒缺乏模型,将200只1日龄健康的肉鸡随机分为对照组（C组）和缺硒组（L组）,对照组饲喂硒含量0.2 mg·kg^-1的正常日粮,缺硒组饲喂硒含量0.004 mg·kg^-1的缺硒日粮。在15、25、35、45、55日龄时,每组分别选取15只鸡,观察胸腺组织病理形态变化和超微结构变化;检测胸腺组织中TLR4信号转导通路与细胞凋亡相关因子的表达。又建立了MDCC-MSB1（MSB1）细胞硒缺乏模型,并在此基础上设立6个分组：对照（C group）组、缺硒（L group）组、缺硒+转染空质粒（L+pCMV-HA-N）组、缺硒+siRNA阴性对照（L+NCsiRNA）组和缺硒+过表达TLR4（L+pCMV-HA-TLR4）组、缺硒+干扰TLR4（L+siChTLR4）组,低硒处理5 d后,检测细胞活力、细胞凋亡情况、TLR4信号转导通路与细胞凋亡相关因子的表达。结果显示：1）与C组相比,L组皮质髓质的淋巴细胞数量减少、细胞排列紊乱、皮质髓质充血、核碎裂,广泛的局灶性坏死。L组鸡胸腺组织淋巴细胞间出现裂隙,体积缩小,细胞碎裂,核染色质边集,线粒体肿胀,嵴断裂。2）与15日龄C组相比,L组鸡胸腺中TLR4、MyD88、NF-κB、Caspase-3、Caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达水平在15~55日龄中均显著上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平呈相反趋势。3）与C组相比,L组MSB1细胞活力显著下降、细胞凋亡数量明显增加、TLR4、MyD88、NF-κB、Caspase-3、Caspase-9、Bax mRNA和蛋白的表达均显著增加、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平极显著降低;与L组相比,L+siChTLR4组细胞活力明显增强、细胞凋亡数量明显减少、相关因子mRNA和蛋白表达显著下降,而L+pCMV-HA-TLR4组细胞活力明显降低、细胞凋亡数量明显增加、相关因子mRNA和蛋白表达均明显增加。综上所述,硒缺乏通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导鸡胸腺细胞凋亡,并进一步诱导鸡胸腺损伤。     

细胞因子IL-17作为牛结核病诊断标志物的研究及实时荧光定量PCR检测方法的建立

试验旨在评价细胞因子IL-6和IL-17 mRNA转录水平与牛分枝杆菌感染之间的关系,及其在牛结核病诊断中的应用潜力。通过皮内变态反应试验和IFN-γ释放试验临床筛选结核病阳性牛和结核病阴性牛,采集试验动物抗凝全血,分离、收集外周血淋巴细胞,分别用牛结核菌素（PPD-B）、禽结核菌素（PPD-A）、重组蛋白CFP-10-ESAT-6（CE）、pET-32a载体标签蛋白（PET）或PBS 37℃培养6 h,用实时荧光定量PCR检测细胞因子IL-6、IL-17和IFN-γ的mRNA相对转录水平。结果显示,PET和空白对照PBS类似,不能刺激细胞因子mRNA转录水平的提高,表明CE中包含的PET对试验的影响可忽略不计;牛外周血淋巴细胞经PPD-B、PPD-A或CE刺激后,结核病阳性牛样品中IL-17和IFN-γ的mRNA转录水平均显著高于结核病阴性牛（P<0.05）,其中PPD-B刺激效果强于CE和PPD-A,而CE刺激的特异性更好;选取CE作为最佳刺激源,结果显示,IL-17和IFN-γ的mRNA转录水平之间相关性良好（spearman r=0.79）,并初步建立了基于IL-17和IFN-γ转录水平的实时荧光定量PCR检测方法;以此方法对14头结核病阳性牛进行临床检验,IL-17实时荧光定量PCR法的阳性样本检出率为85.7%,高于IFN-γ（71.4%）。本研究结果初步表明,牛分枝杆菌特异性抗原（PPD-B、CE）诱导的IL-17 mRNA转录水平与牛结核病相关,以CE为刺激源建立的IL-17实时荧光定量PCR检测方法具有用于牛结核病诊断的潜力。