基于网络药理学探究人参、红参与黑参治疗气虚的药效物质基础与机制

目的 基于网络药理学探究人参、红参与黑参治疗气虚的药效物质基础与机制。方法 通过查阅文献,筛选三种人参的有效成分和靶点。采用Swiss target prediction等平台预测其有效成分与靶点信息。结合GeneCards数据库检索与气虚相关的靶点,运用Cytoscape 3.7.2软件,构建药物-活性成分-靶点-疾病网络图。在String平台上构建靶点蛋白互作网络,利用R软件对关键靶点基因进行KEGG通路富集分析,揭示三种人参治疗气虚的作用机制与潜在信号通路。结果 经条件筛选,人参中kaempferol(山奈酚)、Ginsenoside Rk2(人参皂苷Rk2)、20(S)-protopanaxatriol(原人参三醇)等23个核心成分可通过VEGFA(血管内皮生长因子A)、HPSE(乙酰肝素酶)、HSP90AA1(热休克蛋白90AA1)等19个核心靶点作用于115条通路上;红参中Panaxytriol (人参三醇)、20 (R)-Ginsenoside Rh1 (人参皂苷Rh1)、Ginsenoside Rk2 (人参皂苷Rk2)等17个核心成分可通过VEGFA(血管内皮生长因子A)、HPSE(乙酰肝素酶)、HSP90AA1(热休克蛋白90AA1)等11个核心靶点作用于83条通路上;黑参中Ginsenoside Rk3(人参皂苷Rk3)、Ginsenoside Rh3(人参皂苷Rh3)、Ginsenoside Rh4 (人参皂苷Rh4)、Ginsenoside Rk1 (人参皂苷Rk1)4个核心成分可通过VEGFA(血管内皮生长因子A)等5个核心靶点作用于33条通路上。三种人参主要涉及抑制细胞分裂周期、调节胰岛素代谢、控制炎症反应等方面,发挥多靶点、多通路治疗气虚的作用。结论 人参、红参与黑参及其活性成分可通过VEGFA (血管内皮生长因子A)、HPSE (乙酰肝素酶)、HSP90AA1(热休克蛋白90AA1)等多个关键靶点干预PI3K-Akt信号通路、肿瘤坏死因子信号通路等。进一步揭示了三种人参可通过多个靶点、多条通路发挥治疗气虚的作用。预测三种人参对于气虚的治疗作用为:人参>红参>黑参。     

EGCG通过PI3K-AKT信号通路调控FOXO1磷酸化抑制3T3-L1前脂肪细胞分化

为探究EGCG对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其分子机制,以3T3-L1前脂肪细胞为材料,分别添加不同浓度EGCG(0μM、5μM、10μM、50μM、100μM),通过油红O染色检测EGCG对3T3-L1脂肪细胞分化过程中脂质积累的影响,同时采用RT-PCR和免疫印迹检测不同浓度EGCG对PPARγ、FAS、PI3K、FOXO1的mRNA及蛋白表达的影响.油红O染色结果表明,EGCG可抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,阻碍脂质积累,并具有浓度效应,EGCG浓度越高抑制作用越明显;EGCG能够直接抑制PPARγ和FAS的表达,同时抑制P-AKT、P-PI3K以及P-FOXO1的表达.表明EGCG通过介导PI3K/AKT-FOXO1级联信号通路,下调具有促进前脂肪细胞分化功能的PPARγ和FAS的表达,从而抑制前脂肪细胞分化,阻碍脂肪生成.     

人参皂苷Rb1对人体皮肤成纤维细胞衰老的影响

目的 初步探究人参皂苷Rb1是否具有抗皮肤衰老的作用,使用不同浓度过氧化氢探究并建立人体真皮成纤维细胞(HSF细胞)氧化衰老模型,随后观察人参皂苷Rb1预处理是否具有预防HSF细胞氧化衰老的作用,并研究人参皂苷Rb1对HSF细胞凋亡的影响。方法 使用不同浓度的过氧化氢处理HSF细胞并建立HSF细胞氧化衰老模型,随后使用人参皂苷Rb1预处理细胞后再加入过氧化氢诱导,观察各组细胞形态,计算细胞活力,以及检测细胞氧化应激水平以细胞及凋亡进程。结论 600μM的过氧化氢可引发HSF细胞的氧化应激,导致细胞活力下降及死亡;500μM的人参皂苷Rb1预处理细胞2小时后可有效缓解过氧化氢的引起的细胞毒性,降低细胞内活性氧ROS的水平,并且抑制HSF细胞的凋亡,本研究揭示了人参皂苷Rb1的抗氧化作用以及在皮肤衰老治疗的应用前景。     

基于网络药理学的人参、红参、黑参、人参叶、西洋参和三七抗心力衰竭的作用机制及活性成分研究

目的利用网络药理学的研究方法探究人参、红参、黑参、人参叶、西洋参和三七治疗心力衰竭的作用机制及不同药性的药物治疗心力衰竭的差异性。方法利用TCMIP v2.0、Swiss Target Prediction数据库并结合文献挖掘筛选各药物的成分及作用靶点;GeneCards、OMIM等数据库筛选有关心力衰竭靶点;取交集后将交集靶点通过String数据库构建靶点蛋白互作网络;运用GO、KEGG数据库对靶点基因信号通路分析;由Cytoscape.v3.7.2构建网络并挖掘人参、红参、黑参、人参叶、西洋参和三七治疗心力衰竭的作用机制并赋值法比较不同药性的药物治疗心力衰竭的差异。结果人参活性成分64种,红参活性成分30种,人参叶活性成分27种,西洋参活性成分26种和三七活性成分40种;各药物治疗心力衰竭潜在靶点分别为157、108、96、80、93、106个。GO功能富集显示各药物生物功能主要集中在炎症反应的调节、蛋白激酶活性等方面;KEGG通路富集显示各药物治疗心力衰竭主要涉及蛋白多糖、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性通路、PI3K-AKT等信号通路。对各药物成分、靶点、通路赋值得到温热性药物治疗心力衰竭的主要成分为人参皂苷Rh3等,主要靶点为CDK8、AGTR1、GYS1、MMP1,主要通路为脂质与动脉粥样硬化通路;寒性药物治疗心力衰竭的主要成分为人参皂苷Rh6等,主要靶点为CYP1A2、EPAS1、ATP1A3、ATP1A,主要通路为受体活化通路。结论通过构建“活性成分-靶点-信号通路-疾病”网络和赋值分析法,从多成分、多靶点、多通路角度阐释人参、红参、黑参、人参叶、西洋参和三七治疗心力衰竭的作用机制,分析比较不同药性治疗心力衰竭的的差异性,为后续研究中药传统功效提供了新的思路与基础。     

HPLC法检测黑三七中20种单体皂苷含量

目的建立一种HPLC法测定黑三七中20种单体皂苷,即三七皂苷R1、R2(R),人参皂苷Rg1、Re、Rh1(S)、Rh1(R)、Rg2(S)、Rg2(R)、Rg5、Rh2(S)、Rh2(R)、PPD、Rb1、Rd、RK3、PPT、Rg3(S)、Rg3(R)、RK1、RK2。方法使用Thermo BDS Hypersil C₁₈(250mm×4.6mm,5μm)柱通过HPLC系统进行分析,乙腈-水梯度洗脱,检测条件为:波长203nm、流速1.0mI/min、柱温40℃。结果黑三七单体皂苷含量为0.006～15.150mg/g,干三七经加工炮制,随蒸制时间的变化,黑三七中单体皂苷含量也在变化,其中Rg3(R)、Rg3(S)、Rg5、RK3、RK1含量增加最明显,分别增加了112倍、23倍、10倍、9倍、8倍。结论干三七经加工炮制得黑三七,三七中主要单体皂苷通过水解转化为稀有皂苷,提高了药理活性,提升了药用价值和产品附加值,具有很好的开发前景。     

鹿茸多肽对冈田酸诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤模型中PI3K、AKT、Caspase-9表达的影响

目的观察鹿茸多肽对冈田酸(OA)诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤模型中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,探讨鹿茸多肽对HT22细胞损伤模型的保护作用机制。方法采用含10%胎牛血清(FBS)培养液(DMEM/F12)传代培养HT22细胞7d后,分为正常对照组、二甲基亚砜(DMSO)对照组、OA细胞损伤模型组、鹿茸多肽高、中、低剂量组。正常对照组给予含10%FBS的DMEM/F12,DMSO对照组给予DMSO终浓度<0.01%的DMEM/F12,OA细胞损伤模型组给予10nmol OA的DMEM/F12,鹿茸多肽高、中、低剂量组分别给予50、500、1000μg/ml的DMEM/F12,于37℃、5%CO2条件下孵育24h。利用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,酶联免疫法(ELISA)检测各组实验细胞内PI3K、AKT含量,蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组实验细胞内PI3K、AKT、Caspase-9表达水平。结果MTT比色法检测结果表明,与OA细胞损伤模型组比较,鹿茸多肽能够明显提高细胞存活率(P<0.05);ELISA检测结果表明,与OA细胞损伤模型组比较,鹿茸多肽能够明显提高受损HT22细胞内PI3K、AKT含量(P<0.05或P<0.01);Western Blot检测结果表明,与OA细胞损伤模型组比较,鹿茸多肽能够明显提高受损HT22细胞内PI3K、AKT、Caspase-9表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论鹿茸多肽对OA诱导的HT22细胞损伤模型具有保护作用,作用机制可能与调节受损HT22细胞内PI3K、AKT、Caspase-9表达水平相关。     

EGCG抑制Nicotine诱导肺腺癌H1299细胞JAK2/STAT3 mRNA的表达研究

为探索EGCG对Nicotine诱导肺癌细胞增殖的抑制作用,本研究通过MTT实验筛选出EGCG、Nicotine对肺腺癌细胞H1299的最佳作用浓度,利用实时荧光定量PCR技术检测EGCG、Nicotine对H1299细胞中Bax、Bcl-2、Jak2和Stat3基因mRNA相对表达量的变化。实验结果表明,EGCG对H1299细胞的半抑制浓度IC₅₀值约为32βμmol·L^-1（24βh）、15βμmol·L^-1（48βh）;1βμmol·L^-1的Nicotine对H1299细胞促增殖作用明显;以15βμmol·L^-1的EGCG预处理H1299细胞24βh可显著下调1βμmol·L^-1 Nicotine的促增殖作用（P<0.05）。1βμmol·L^-1的Nicotine处理H1299细胞可明显降低JAK2/STAT3信号通路中Bax基因mRNA的表达,增加Bcl-2、Jak2、Stat3基因的mRNA表达;15βμmol·L^-1 EGCG预处理H1299细胞可反向调控Nicotine诱导所致JAK2/STAT3信号通路中Jak2、Stat3和Bax、Bcl-2基因表达量的变化,结果具有显著性差异（P<0.05）。由此可知,EGCG对Nicotine诱导的肺腺癌H1299细胞增殖及JAK2/STAT3信号通路中促增殖基因mRNA的表达起抑制作用。     

Canolol induces apoptosis in human gastric carcinoma cell through PI3K/Akt signaling pathway

Canolol is a natural polyphenolic compound in rapeseed oil with multiple biological activities.Anti-cancer potential of canolol has been proposed in some studies.However,the effect and underlying mechanism of canolol on human gastric carcinoma(AGS)cells have not been well understood.This study showed that canolol had significant inhibition in proliferation and strongly apoptotic effects in AGS cells,which were verified by the decrease of cell viability,high level of reactive oxygen species(ROS),and damage in mitochondria membrane potential(MMP).Treatment with canolol arrested cells in S phase,and increased expressions of Bax,cleaved caspase-9,and cleaved caspase-3 proteins.Meanwhile,low expression of Bcl-2 and cytochrome C(Cyt C)release were found.The expressions of PI3K(phosphoinositide 3-kinase)and p-AKT(phosphorylated serine/threonine kinase)were also downregulated.Overall,these results suggested that canolol inhibited proliferation and induced apoptosis in AGS cells by regulating PI3K/Akt pathway,demonstrating a potential in gastric cancer treatment.     

茶黄素激活Nrf2/HO-1通路保护血管内皮细胞氧化应激损伤

为探讨茶黄素（Theaflavin,TF）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的保护效应及作用机制,将人脐静脉血管内皮细胞HUVEC分为对照组、损伤组（0.2 mmol·L^-1 H₂O₂处理）和TF预处理组（2.0、5.0、10.0 μmol·L^-1 TF和0.2 mmol·L^-1 H₂O₂处理）。损伤组和TF组均以H₂O₂处理24 h,其中TF组先以不同浓度TF预处理2 h,对照组均以定量溶剂处理。以MTT法测定细胞活力,DCFH-DA探针测定活性氧（ROS）水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot测定蛋白表达水平,相应试剂盒测定乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化氢酶（GSH-Px）活性。结果显示,与对照组相比,损伤组细胞活力显著降低,LDH释放量增加,NO水平降低,胞内ROS水平升高,MDA增加,抗氧化酶活力降低,细胞凋亡升高;TF预处理能够显著提高细胞活力,降低LDH水平,维持NO水平,降低胞内ROS水平及MDA的产生,提高抗氧化酶活力,并抑制细胞凋亡;进一步研究显示,TF能够激活Nrf2/HO-1通路,且Nrf2抑制剂会显著降低TF的内皮细胞保护效应。可见,TF能够有效抑制H₂O₂诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤,其机制至少部分是通过激活Nrf2/HO-1通路实现的。     

基于Overview和物理图谱的大豆株高性状候选基因挖掘

为更加准确地挖掘大豆株高性状候选基因,本研究利用已有研究中与大豆株高性状相关的249个QTL位点,以大豆基因组物理图谱为背景进行整合,并通过Overview分析得到32个重演性较好的置信区间,分布在大豆D1b、N、C1、A1、C2、M、K、O、B1、F、J、D2、G和L连锁群上,其中D1b、A1、C2、M、F、L连锁群的重演性较好的置信区间较多。对候选区段进行基因注释,分析得出植物激素信号转导通路(ID:Ko04075)可能为大豆株高调控的主要通路,该通路与植物细胞增大、分化、茎生长、休眠、果实成熟和抗逆性等植物生理过程紧密相关。通路中13个候选基因与大豆株高性状相关,9个基因被注释为编码生长素响应蛋白,3个基因被注释为编码脱落酸相关蛋白,1个基因为GH3生长素响应启动子。本研究为挖掘大豆株型性状候选基因、构建大豆理想株型和促进分子辅助育种提供新思路。