铁皮石斛种子萌发关键因素研究

采用无菌萌发方法,观察比较不同培养基上种子萌发过程中形态学特征,以期获得影响铁皮石斛种子萌发的关键因素。结果表明,不同培养基上种子萌发快慢不同,均能观察到原球茎。本研究结论为,无菌和水分存在条件下,铁皮石斛种子即可萌发至原球茎阶段,但完成其形态建成则需要其它营养物质参与。     

铁皮石斛种子无菌萌发

[目的]研究铁皮石斛种子的无菌萌发方法。[方法]以改良MS+土豆熟汁液2.0%+蔗糖2.0%+琼脂0.65%+0.1 mg/L NAA为种子萌发培养基,将铁皮石斛种子播种后统计萌发率。[结果]铁皮石斛种子萌发率达90%以上,继代培养后组培苗生长正常。[结论]该研究建立了铁皮石斛种子的无菌萌发体系,为铁皮石斛实生苗的大批量生产奠定了基础。     

菌根共生对铁皮石斛生长发育的影响

以铁皮石斛(Dendrobium officinale)为试材,采用菌根真菌(S1和S3)与铁皮石斛幼苗共培养的方法,研究了菌根共生对铁皮石斛幼苗阶段生长发育的影响。结果表明:共培养前期,菌根真菌(S1和S3)与寄主保持着共生关系;后期,这种共生关系逐渐消失,真菌菌丝大量聚集在根外。菌根真菌在铁皮石斛生长前期促生作用强于生长后期,表明菌根真菌在兰科幼苗生长阶段仍保持着一定的促生作用,但随着共生关系的消解,促生作用也逐渐减弱。     

流苏石斛种子非共生萌发的研究

通过对流苏石斛(Dendrobium fimbriatum Hook.)成熟种子进行无菌播种诱导原球茎,研究了其在不同温度、不同质量浓度植物生长调节剂配比下种子无菌萌发情况,原球茎分化获得幼苗.结果表明:25℃,Knudson C (KC)+2％蔗糖+0.7％琼脂时,原球茎诱导时间为7-15 d,种子萌发率可达98.3...     

不同培养基对铁皮石斛种子萌发和壮苗生根的影响

以铁皮石斛种子为材料,通过组织培养技术,不添加植物生长调节剂直接得到丛生芽,并比较天然有机物、活性炭等添加物对铁皮石斛丛生芽壮苗生根的影响,优化铁皮石斛组培快繁技术体系.结果显示,铁皮石斛种子分化最佳培养基为MS+6 g/L琼脂+20 g/L蔗糖+80 g/L香蕉泥;芽苗的壮苗生根试验中,最佳培养基为1/2 MS+0.4 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA+20 g/L蔗糖+6 g/L琼脂+80 g/L香蕉泥+0.5 g/L活性炭,有利于芽苗的壮苗和生根.该研究可以一次性直接得到优质铁皮石斛幼苗,减少了试验步骤,节省人工、降低成本,提高了试验效率,促进原球茎增殖、提高分化率,促进壮苗和生根,可为铁皮石斛快繁和大规模化生产提供技术支持.     

铁皮石斛人工种子的制作

目的:建立铁皮石斛人工种子的制作方法,进行人工种子萌发的研究。方法:以愈伤组织分化30d萌发后的铁皮石斛组织为材料,以海藻酸钠、Ca Cl2、青霉素、链霉素和多菌灵粉剂为材料设计人工种皮基质,研究了人工胚乳组分对人工种子萌发率的影响。结果:以4%海藻酸钠+0.2 mol·L~(-1)Ca Cl2+0.4 mg·L~(-1)青霉素+0.4 mg·L~(-1)链霉素+0.3%多菌灵粉剂为人工种皮基质,12MS+0.5 mg·L~(-1)NAA+1.5 mg·L~(-1)KT+1.5 mg·L~(-1)6-BA作为人工胚乳成分制成的人工种子,其生长速度和萌发率最高。结论:通过研究确立了铁皮石斛人工种子制作的基本技术,并通过实验验证了铁皮石斛人工种子的最佳萌发基质。     

内生真菌对铁皮石斛种苗生长的影响

为研究内生真菌对铁皮石斛种苗生长的影响,并筛选出有利于铁皮石斛种苗生长发育的内生真菌。该研究从金钗石斛根部分离、筛选和鉴定得到3种内生真菌,将其分别配制成体积分数20%、40%和60%的液体菌剂,对铁皮石斛种苗进行接种试验。在温室栽培条件下共培养150 d后,调查统计各处理组铁皮石斛种苗生物量,并利用石蜡切片法显微观察真菌侵染情况,以及重分离真菌鉴定。结果表明,菌株FC6和FC8对铁皮石斛种苗的生长有明显的促进作用,且均能与铁皮石斛种苗形成菌丝团共生结构,菌株FC9则不能。通过对铁皮石斛种苗根部重分离的真菌鉴定,确定重分离得到了原接种真菌;菌株FC6和FC8能够侵入铁皮石斛种苗的根部组织,并在其皮层细胞中扩展、定殖,形成良好的共生关系。其中,菌株FC6对铁皮石斛种苗促进效果最佳。     

菌根真菌对铁皮石斛生长和矿质元素的影响

铁皮石斛组培苗接种6个真菌菌株,培养60 d后,接菌苗的平均鲜重增长率均高于对照,其中接种GS222、GDB162、GDB254、MLX102菌株的苗平均鲜重增长率均达到极显著差异(α=0.01),接种CLN103、CLX104的苗达到显著差异(α=0.05);接菌苗的各矿质元素(除Zn外)含量也均高于对照。接菌苗的营养根重分离获得原接种菌株。显微观察到在皮层和中柱组织形成菌丝结等典型的共生结构,表明接种菌株已与铁皮石斛根共生形成了菌根,对铁皮石斛的生长和矿质元素的吸收有较明显促进作用。由此可认为GS222、GDB162、GDB254、MLX102、CLN103、CLX104是铁皮石斛优良的菌根菌株。     

不同氮源对铁皮石斛菌根真菌生长的影响

为了研究铁皮石斛菌根真菌对不同氮源的适应性,以碳酸铵、硫酸铵、硝酸铵、硝酸钾、尿素、牛肉膏、牛肉蛋白胨、鱼肉蛋白胨作为PDA培养基中的氮源,探讨其对3种铁皮石斛菌根真菌菌丝生长速度和干重的影响.结果表明,以牛肉膏、鱼肉蛋白胨、硝酸铵3种物质作为氮源时,各种菌根真菌的生长速度较快、干重较高.因此认为,牛肉膏、鱼肉蛋白胨、硝酸铵为适用于铁皮石斛菌根真菌的外源氮源.研究以期为优化铁皮石斛菌根真菌的培养条件以及生物菌肥的制备提供参考.     

铁皮石斛人工种子制备关键技术研究

以铁皮石斛原球茎为繁殖体,初步建立适合铁皮石斛的人工种子制备工艺,为铁皮石斛的高效繁育提供一条新技术途径。结果表明,经过优化组合,以 MS＋100 g/L 土豆汁＋0.5 mg/L NAA＋30 g/L海藻酸钠＋30 g/L蔗糖＋1.0 g/L保水剂＋1.0 g/L木薯淀粉＋0.1 g/L 活性炭（AC）为人工胚乳,在2％ CaC12中反应15 min后获得的铁皮石斛人工种子呈规则的圆球形、富有弹性,培养15 d后失水率为11.17％,培养60 d后萌发率达到92.86％。此配方为制备铁皮石斛人工种子的最优组合。     

不同培养基对铁皮石斛组培快繁的影响

【目的】探讨铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根的适宜培养基,为铁皮石斛组织快繁技术提供依据。【方法】以铁皮石斛种子为外植体进行培养,研究6-BA (0-3.0 mg/L)、NAA(0.1-0.3 mg/L)、香蕉泥(15%～25%)和马铃薯泥(15%～25%)对铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根壮苗的影响。【结果】适宜种子萌发的较好培养基为MS+20%马铃薯泥,芽增殖最适培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA,增殖率达282.7%;最适生根培养基为MS+15%香蕉泥,生根率达100%。【结论】经马铃薯泥、香蕉泥培养的铁皮石斛组培苗,生长健壮,能为生产提供大量的种苗,因而此类培养基可用于大规模生产铁皮石斛组培苗。     

不同培养基对铁皮石斛组培快繁的影响

【目的】探讨铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根的适宜培养基,为铁皮石斛组织快繁技术提供依据。【方法】以铁皮石斛种子为外植体进行培养,研究6-BA（0-3.0mg/L）、NAA（0.1-0.3mg/L）、香蕉泥（15%～25%）和马铃薯泥（15%～25%）对铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根壮苗的影响。【结果】适宜种子萌发的较好培养基为MS＋20%马铃薯泥,芽增殖最适培养基为MS＋2.0mg/L6-BA,增殖率达282.7%;最适生根培养基为MS＋15%香蕉泥,生根率达100%。【结论】经马铃薯泥、香蕉泥培养的铁皮石斛组培苗,生长健壮,能为生产提供大量的种苗,因而此类培养基可用于大规模生产铁皮石斛组培苗。     

兰科植物原地与迁地种子共生萌发应用

原地种子共生萌发与迁地种子共生萌发是近年来野生兰科植物繁育的新技术。介绍两种共生萌发技术国内外的应用现状,分析两种萌发技术在应用过程中出现的问题,提出两种共生萌发技术的研究趋势。     

铁皮石斛促生内生真菌的筛选与鉴定

从铁皮石斛根中分离得到37株内生真菌,经过与组培苗共生筛选,获得9株促生菌,其中3株真菌对铁皮石斛的鲜质量增长率、根数增长率和芽数的促生效果最好。采用形态学观察和ITS序列测定相结合的方法对这9株促生菌进行鉴定。经形态学观察,初步鉴定出2株,均为瘤菌根菌属。根据rDNAITS序列分析显示,2株与Epulorhizasp．的相似性分别为100％和96％,1株与Guignardiacamelliae的相似性达100％,1株与MycosphaereUacruenta的相似性为99％。另外5株促生真菌分类地位尚不能确定,但这5株菌株与登录号为EU482263、GQ996178、AM901831、GU566294和GU566256的序列相似性分别达96％、95％、99％、98％和100％。     

3种石斛兰种子非共生萌发和离体保存

以金钗石斛（Dendrobium nobile）、流苏石斛（D.fimbriatum）和报春石斛（D.primulinum）为研究对象,研究了其在激素浓度配比下种子萌发情况,并对流苏石斛幼苗进行离体保存。结果表明：25℃时,Knudson C（KC）＋BA2mg／L＋N从0．2mg／L最利于金钗和流苏石斛原球茎诱导和幼苗分化;KC＋NAA0．5mg／L时最适报春石斛原球茎诱导和幼苗分化。幼苗保存在15℃,每天12h光照（20001x）,添加3％甘露醇（mannitol）的KC培养基中,10个月后存活率为96％。     

铁皮石斛菌根真菌对铁皮石斛组培苗的接种效应

[目的]对铁皮石斛（Dendrobium officinale）菌根真菌对铁皮石斛组培苗的接种效应进行研究。[方法]以从野生铁皮石斛根系中分离得到的Tjl、Tj2、Tj3真菌为材料,将其接种到铁皮石斛组培苗的根系上进行接种试验。[结果]在组培条件下,Tjl菌在前期没有表现出促生作用,Tj2菌表现出较强的促生作用,Tj3菌则对根具有促生作用,而在后期,Tj1菌则表现出了较强的促生作用,Tj2菌的接种效果最好,促生作用最强,Tj3菌则出现烂根烂苗现象;在室外条件下,Tj2菌接种使组培苗叶数增加,侧芽数增加,侧根生长明显,株高增加显著,叶片大而深绿,根部有明显的膨大现象。[结论]2种接种方式均说明Tj2菌对铁皮石斛的地上植株和地下根系生长,株数增多,株高增加,新芽和新根萌发均具有较强的促进作用,证明Tj2菌与铁皮石斛有效地建立了共生关系。因此Tj2菌对石斛组培苗的成功栽培具有实际应用价值。     

铁皮石斛兰种子萌发及其原球茎的快繁培养条件研究

[目的]对铁皮石斛兰种子萌发及其原球茎的快繁培养条件进行研究。[方法]以铁皮石斛种子为材料,研究基本培养基、外源激素的种类和浓度及光照对铁皮石斛兰种子非共生萌发及后续分化的影响。[结果]铁皮石斛种子在光照条件下1／2MS培养基中萌发率最高,达91．63％,且萌发时间最短;在1／2MS＋0．2mr／LNAA＋0．5mg／L6-BA培养基中,原球茎的分化效果最好。[结论]该研究为实现今后铁皮石斛的工厂化生产奠定了一定基础。     

铁皮石斛种子无菌法播种试验

在组培培养中,铁皮石斛种子无菌播种,通常用次氯酸钠溶液浸泡,再用无菌水冲洗,在无菌条件下取出种子播于固体培养基上,其发芽率70%左右.本试验改液体灭菌为气雾灭菌,发芽率提高20%左右,此法操作简便、成本低、功效高,为无菌播种创造一条新路.     

铁皮石斛内生真菌及其代谢产物研究进展

铁皮石斛(Dendrobium officinale)是我国传统中药材,富含多糖、生物碱、氨基酸、酚类等多种药理学活性成分。近年来,随着人们对健康生活品质的追求,铁皮石斛日益受到国内外学者的广泛关注。但其生长缓慢,病害时常发生,产量和品质受到严重影响。研究表明,内生真菌在铁皮石斛的生长过程中具有重要作用,本文重点梳理已报道的铁皮石斛内生真菌多样性及二者共生关系,概括内生真菌对铁皮石斛生长发育及病害防治的作用,并归纳其代谢产物的生物学活性,为铁皮石斛栽培产业中绿色防控和增产增收技术的开发与科学应用提供参考。     

铁皮石斛菌根真菌对铁皮石斛组培苗的接种效应

[目的]对铁皮石斛（Dendrobium officinale）菌根真菌对铁皮石斛组培苗的接种效应进行研究。[方法]以从野生铁皮石斛根系中分离得到的Tj1、Tj2、Tj3真菌为材料,将其接种到铁皮石斛组培苗的根系上进行接种试验。[结果]在组培条件下,Tj1菌在前期没有表现出促生作用,Tj2菌表现出较强的促生作用,Tj3菌则对根具有促生作用,而在后期,Tj1菌则表现出了较强的促生作用,Tj2菌的接种效果最好,促生作用最强,Tj3菌则出现烂根烂苗现象;在室外条件下,Tj2菌接种使组培苗叶数增加,侧芽数增加,侧根生长明显,株高增加显著,叶片大而深绿,根部有明显的膨大现象。[结论]2种接种方式均说明Tj2菌对铁皮石斛的地上植株和地下根系生长,株数增多,株高增加,新芽和新根萌发均具有较强的促进作用,证明Tj2菌与铁皮石斛有效地建立了共生关系。因此Tj2菌对石斛组培苗的成功栽培具有实际应用价值。