东北地区4株猪,犬旋毛虫间及与国际标准虫株间的杂交试验

为了给中国旋毛虫虫株的分类提供依据,将分离自中国东北地区的４株猪,犬源旋毛虫虫株分别接种于小鼠,按常规分离出肌幼虫,纯化后,设８个杂交试验组,将每２个虫株的雌,雄幼虫体各５条混合,以食管灌注法接种于小鼠,４２ｄ后扑杀,消化,集虫,计数回收肌幼虫数。同法进行了哈尔滨猪株,犬株与国际标准虫株Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ（Ｔ．ｓ）．Ｔ．ｎａｔｉｖａ（Ｔ．ｎａ）之间的杂交试验。     

猪、犬旋毛虫成虫免疫原性试验

旋毛虫病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病 ,各国学者对旋毛虫免疫学进行了大量的研究。现已证实旋毛虫在黑龙江省有两个隔离种 :猪旋毛虫和犬旋毛虫。然而它们的免疫学研究报道较少 ,隔离种之间的交叉免疫方面的研究尚属空白 ,所以开展此项研究对免疫学、分类学的深入研究具有重要意义。1　材料和方法1.1　材料1.1.1　旋毛虫虫种　猪旋毛虫 ,来自黑龙江省海伦县猪体内 ,在小鼠中继 3 5代 ,国际认证为旋毛形线虫 (Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａｓｐｉ ｒａｌｉｓ) ,编号ＩＳＳ5 3 3 ;犬旋毛虫来自黑龙江省五常县犬体内 ,在小鼠中继 3 5代 ,国际认…     

猪、犬旋毛虫交叉免疫原性的研究

通过在小鼠体内感染猪、犬旋毛虫肌幼虫50条，再用同源免疫和交叉免疫方法攻击感染旋毛虫肌幼虫200条，来检测其肌幼虫的减虫率。试验得到猪旋毛同源免疫的减虫率为87.47%，对犬旋毛虫的交叉免疫减虫率是86.47%，犬旋毛虫同源免疫的减虫率为83.70%，其对猪旋毛虫的交叉免疫是83.46%。试验表明：旋毛虫肌幼虫自然免疫具有较好的免疫保护作用，交叉免疫的保护率低于同源免疫。     

猪、犬旋毛虫成虫免疫原性试验

通过提取猪、犬旋毛虫成虫抗原，制备成虫油佐剂免疫原，在小鼠体内进行同源特异性免疫试验和交叉免疫试验。试验得到猪旋毛虫成虫抗原同源免疫减虫率为５５．８０％，其对犬旋毛虫的交叉免疫减虫率是３５．１１％；犬旋毛虫成虫抗原同源免疫的减虫率为３９．００％，其对猪旋毛虫的交叉免疫减虫率是２４．９６％。试验结果揭示，猪、犬旋毛虫成虫具有一定的免疫原性，其交叉免疫减虫率低于同源特异性免疫。猪旋毛虫成虫抗原对犬旋毛虫的交叉免疫与犬旋毛虫自身的同源特异性免疫差异不显著。     

猪旋毛虫对猪,犬的感染性研究

用消化法所得的猪旋毛虫蚴分别接种猪，犬，结果表明：猪旋毛虫对猪，犬的感染性存在着明显差异，在猪的繁殖力指数为１１７．０４，而在犬为３０．６０，说明哈尔滨地区猪旋毛早相当于旋毛形线虫；其对猪感染性较高而对犬感染较差，但能通过犬的感染而对人体健康构成威胁。     

猪、犬旋毛虫新生蚴免疫原性试验

将猪、犬旋毛虫新生蚴制备成免疫原,在小鼠体内进行免疫试验,免疫１周后攻击感染肌幼虫,３５日蝗检查肌幼虫的减虫率。结果表明,猪旋毛虫新生蚴的同源免疫和其对犬旋毛虫的交叉免疫减虫率分别为８３．１１％和７９．３９％,犬旋毛虫新生蚴的为８１．３７％和８０．６９％。结果揭示,旋毛虫新生蚴具有良好的免疫原性,同源免疫的减虫率比交叉免疫的高,猪旋毛虫新生蚴抗原对犬旋毛虫的交叉免疫与犬旋毛虫新生蚴抗原的同源免疫在减虫率上差异不显著。     

旋毛虫各隔离种杂交试验

种间杂交是研究旋毛虫分类的重要方法。旋毛虫各隔离种之间的最大差异是由杂交试验所证实的 ,生殖隔离是命名虫种的最重要的依据 [1]。为了搞清我国旋毛虫的分类问题 ,国内学者对此做了一些工作 ,但结果不尽一致 [2 ,3 ]。本文用单对和多对杂交试验对旋毛虫各隔离种进行了比较研究 ,现将结果报告如下 ,以期为虫种分类提供理论依据。1　材料与方法1 .1　材料1 .1 .1　旋毛虫各隔离种　猪旋毛虫 (T.swine,T.sw) :来自黑龙江省海伦县猪体内 ;在小鼠中传代 50次。犬旋毛虫 (T.dog,T.d) :来自黑龙江省五常县犬体内 ;在小鼠中传代 50次。T.spira…     

哈尔滨地区猪旋毛虫对猪,犬的感染性试验

用消化法所得的猪旋毛虫蚴分别接种猪,犬。结果表明,猪旋毛虫对猪,犬的感染性存在着明显差异,在猪的繁殖力指数为１１７．０４,而在犬为３０．６０,说明哈尔滨地区猪旋毛虫档地旋毛形线虫;     

哈尔滨地区犬旋毛虫对猪,犬的感染性研究

用消化法所得的犬旋毛虫蚴分别接种猪，犬。结果表明：犬旋毛虫对猪、犬的感染性存在着明显差异，在犬的繁殖力指数为１８．６８。而在猪为零，说明哈尔滨地区犬旋毛虫相当于本地毛形线虫。犬旋毛虫对犬易感而对猪不感染，通信能通过猪的感染而对人体健康构成威胁。     

中国旋毛虫形态度量学分析

对来自中国８个地区的猪、犬源旋毛虫（哈尔滨海伦猪株、哈尔滨五常犬株、长春犬株、沈阳猪株、河南南阳猪株、湖北十堰猪株、西安猪株、云南大理猪株）,系统测量了其不同发育阶段,包括包囊、肌幼虫、成虫（、♀）的长度、宽度,包囊形态学指数,肌幼虫和成虫体部大小。旋毛虫各发育阶段之间形态学变化缺乏规律性,表现在包囊大,幼虫和成虫不一定大,反之亦然;各地虫株长宽度间虽然也有差异,但也缺乏一定的规律性。因此,旋毛虫形态学在种株分类研究中不能作为依据。     

头孢噻呋等抗菌药物对4种标准菌株的药效学研究

通过用头孢噻呋等抗菌药物对兽医 临床常见的4种标准菌株的体外抗菌活性的 研究,表明头孢噻呋等对4种标准菌株的抗 菌活性较强;头孢噻呋等对4种标准菌株的 杀菌速率均较大;与氨苄西林相比,头孢噻呋 的各个浓度(8,5,2MIC)对金黄色葡萄球菌、 猪链球菌的杀菌速率较小,即它们在3h内使 活菌减少的值差异显著(P<0.05),但头孢 噻呋的各个浓度(8,5,2MIC)对鸡大肠杆菌、 鸡白痢沙门氏菌的杀菌速率均大于氨苄西林 的各个浓度;头孢噻呋与头孢曲松的各个浓 度相比较,对4种标准菌株的杀菌速率差异 均不显著(P>0.05);头孢噻呋等3种β 内 酰胺类抗生素对4种菌株的杀菌速率均不随 浓度(8,5,2MIC)的增加而增大(P> 0.05),即它们均为非浓度依赖性的杀菌药 物。     

鸭源肠球菌的致病性试验

以临床分离的2株鸭源肠球菌分别接种小白鼠,观察感染后小白鼠的主要临床症状和病变特点,并测定感染小白鼠的发病率、死亡率及半数致死量,旨在探讨这2个菌株对小白鼠的致病性。结果表明,2株肠球菌均能造成小白鼠发病。该病原主要侵害小白鼠肝脏、脾脏和肾脏,最明显的病变特征是引起脾肿大、纤维素性渗出性炎症;肝脏淤血、出血甚至坏死;肾间质血管淤血等。从而揭示了肠球菌可引起小鼠感染发病并导致组织病变而死亡。     

四株分离自同一猪场的H3N2亚型猪流感病毒的进化分析

猪作为流感病毒异源毒株间发生基因重组的"混合容器",其呼吸道上皮细胞上同时存在着能够感染人（SA α-2,6-Gal）和禽（SA α-2,3-Gal）两种流感病毒的受体,具备产生新型流感病毒的潜力。在我们的前期研究中,连续两年（2013年和2014年）从南宁地区某个规模化养猪场当中分离获得了2株新型甲型流感病毒重配的H3N2亚型猪流感病毒（swine influenza viruses,SIVs）。为了解SIVs在同一地方的遗传进化规律,我们在2018年至2019年间对该猪场进行了持续的监测,并于2019年再次成功分离获得了2株H3N2亚型的三源重组毒株,命名为A/swine/Guangxi/JG13/2019（简称JG13/2019）和A/swine/Guangxi/JG20/2019（简称JG20/2019）。遗传进化分析表明其基因重配形式与2013年分离株A/swine/Guangxi/JGB4/2013（简称JGB4/2013）和2014年分离株A/swine/Guangxi/JG1/2014（简称JG1/2014）相同,表面基因HA和NA来源于类人H3N2谱系,内部基因NP、M、PA、PB1和PB2来源于2009年甲型H1N1大流感谱系（pdm/09H1N1）,NS基因来源于古典型H1N1谱系。此外,新分离株JG13/2019和JG20/2019同早期分离株JGB4/2013和JG1/2014 HA和NA基因的核苷酸相似性分别为95.3%~97.4%和93.9%~97.0%,内部基因（NP、M、PA、PB1和PB2）的核苷酸相似性为96.2%~98.1%,NS基因的核苷酸相似性为97.1%~97.6%。通过分析比较这些年代不同毒株之间的关键氨基酸位点差异,结果发现JG20/2019和JG13/2019的HA蛋白仍旧保持了与人型受体结合的分子特征（190D、226I和228S）,却也出现了V223I或P227S的新变化,JG13/2019的PA蛋白（R356K）和PB2蛋白（I588T）也与之前的毒株有所不同。这些位点上的氨基酸改变是否影响到病毒的致病能力、复制能力以及跨种间传播能力,有待今后进一步研究。历经6年,携带有pdm/09 H1N1多种内部基因片段（PB2、PB1、PA、M、NP）和类人表面基因（HA和NA）的H3N2亚型SIVs依旧在同一个猪场的猪群中流行,虽然其关键的功能区域出现了基因突变,但是仍然保持着能够感染人的受体结合特性。因此,加强对SIVs流行情况的监测,将为今后防控人类流感大暴发提供预警。     

宁夏地区牛支原体药物敏感性分析

[目的]提高牛支原体病治疗效果。[方法]应用微量肉汤稀释法对宁夏地区分离鉴定的74株牛支原体进行药物敏感性分析。[结果]恩诺沙星的MIC分布范围最小,MIC₅₀与MIC₉₀最小,其次是大观霉素、庆大霉素和卡那霉素;试验菌株对大观霉素的耐药率最低（12%）,其次为恩诺沙星（22%）,对庆大霉素和卡那霉素的耐药率最高且相同（36%）;肺分离株耐药性最强,关节液分离株次之,乳汁分离株最弱。[结论]恩诺沙星对牛支原体的体外抑菌效果最好,但易产生耐药性,应注意用药剂量和时长;肺分离株耐药性最强可能与呼吸道感染牛支原体的概率大且频繁使用抗生素有关。     

旋毛虫肌幼虫p53cDNA的克隆及鉴定

根据GenBank中旋毛虫53000抗原基因的序列设计引物，用PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p53cDNA，将其克隆到pMD-18T载体，转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析，结果表明，克隆到1176bp的p53cDNA，共编码391个氨基酸。序列分析表明，p53cDNA序列与GenBank中的旋毛虫p53基因序列相比共有12个核苷酸发生改变，二者的同源性为98％，所编码蛋白质氨基酸序列的同源性为98％。将其克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star（DE3），经IPTG诱导表达后获得约48000的重组蛋白。Western blotting检测证实，p53重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别，具有很好的抗原性。     

Preliminary characterization and interaction of tubulin from Trichinella spiralis larvae with benzimidazole derivatives

Tubulin was estimated to account for 0.3% of the total soluble protein in Trichinella spiralis cytosolic fractions. Tubulin from T. spiralis was partially purified by precipitation with either taxol or vinblastine sulphate. Immunoblotting with alpha- and beta-tubulin monoclonal antibodies revealed the presence of tubulin in T. spiralis partially purified preparations. Electrophoretic mobility of T. spiralis tubulin in sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gels was very similar to that shown by pig brain tubulin. Further studies with colchicine binding assays indicated that T. spiralis tubulin has binding features similar to that of tubulin from other nematodes: colchicine association constant = 8.1 x 10(-4) M and competitive inhibition of colchicine binding by podophyllotoxin, with an inhibition constant of 1.3 x 10(-6) M. Finally, inhibition of colchicine binding by several benzimidazoles (mebendazole, fenbendazole, oxibendazole and albendazole) was investigated. All the benzimidazoles inhibited colchicine binding in a competitive manner, with inhibition constant values ranging from 1.4 x 10(-7) M (mebendazole) to 3.9 x 10(-6) M (fenbendazole).     

2株鸭源肠球菌的鉴定和药敏试验

对2株鸭源肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌参考菌株的形态特征、培养特性、生理生化特性、对药物的敏感性等生物学特性进行了初步研究。结果表明,3个被检菌株在光学显微镜下呈球形、革兰氏阳性染色和链状排列方式;能在10℃、45℃和6.5%NaCl肉汤等条件下生长,能耐热60℃30min,其特性均符合肠球菌属的特征,各菌株生化反应特性均与粪肠球菌特性基本一致,3个菌株均可鉴定为粪肠球菌。药敏试验结果表明,3个菌株均对青霉素、万古霉素、庆大霉素和左氟沙星高度敏感,而对四环素耐药。     

一株犬源近平滑念珠菌的分子鉴定及部分生物学特性试验

应用核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列分析技术从47株临床分离的犬源真菌中鉴定出一株近平滑念珠菌,对其部分生物学特性进行研究。结果显示,该菌株在沙堡氏培养基上形成白色奶油状菌落,菌体呈典型酵母菌形态。腹腔接种小鼠出现脏器病变并回收到该菌,而皮肤接种小鼠未出现病变。药敏试验显示,该菌株对制霉菌素高度敏感,对两性霉素B、伊曲康唑和酮康唑中度敏感,对氟康唑耐药。ITS区基因序列分析表明,该菌株与人源近平滑念珠菌高度同源;系统进化分析表明,该菌与日本的人源分离株遗传关系较近。     

IBV 3株分离株的血清中和试验及S1基因同源性分析

通过血清中和试验、RT-PCR、核酸序列分析和S1基因的同源性分析，表明鸡传染性支气管炎病毒（IBV）BJ9601、HN9604与M41株的血清中和效价最高，其次为H120，TJ9602与试验毒株的血清中和效价较低。BJ9601、HN9604的S1基因与H120和H52的同源性很高，与H120和H52同在一个分支，其来源与H120或H52有密切关系。TJ9602的S1基因只与LDT3的同源性达到93％，共同形成一个分支，与其他毒株的同源性均在88％以下。血清中和试验和S1基因同源性之间存在较高的相关性，但并不能达到完全的吻合，即血清中和效价最高的毒株之间S1基因的同源性并不是最高的。在GenBank中登记的IBV中国大陆分离株的S1基因可分为3个基因群，其中Ⅰ群和Ⅱ群是主要的流行毒株，共有38个分离毒株，占90．48％。