SIRT1与PPARγ在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的 研究沉默信息调节因子1(SIRT1)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与临床特征和预后的关系.方法 收集39例原发性NSCLC患者的癌组织和对应癌旁组织标本.免疫组化法检测组织标本中SIRT1和PPARγ的表达水平;并分析SIRT1和PPARγ与NSCLC临床病理学特征及预后的关系.结果 癌组织中SIRT1的阳性表达率为61.54％,明显高于癌旁组织中的35.90％;癌组织中PPARγ的阳性表达率为53.85％,明显高于癌旁组织的25.64％(均P＜0.05).SIRT1与PPARγ表达呈正相关(r=0.325,P＜0.05).SIRT1表达水平与肿瘤的分化程度、临床分期以及肿瘤大小有关(P＜0.01或0.05),但与患者年龄、性别、吸烟史、组织类型及淋巴转移情况无关(均P＞0.05).PPARγ阳性表达率与患者的临床分期、肿瘤直径以及淋巴结转移情况有相关性(P=0.01或P＜0.05),而与患者的年龄、性别、吸烟史、组织类型、分化程度无明显相关性(均P＞0.05).SIRT1及PPARγ表达阳性组患者的中位生存时间都明显短于阴性表达组(均P＜0.05).结论 SIRT1与PPARγ可能在NSCLC的发生、发展中起到协同作用,可作为预示NSCLC恶性程度和预后评价的指标.     

microRNA-31和LAST2蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达

目的 探讨microRNA-31和LATS2蛋白在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中的表达.方法 采用Westemblot、荧光定量PCR检测22例非小细胞肺癌患者的肿瘤组织及癌旁正常组织中microRNA-31及LATS2蛋白的表达情况,并分析其表达水平的差异.结果 与癌旁正常组织相比较,miRNA-31在肺癌患者肿瘤组织中的表达明显增高,LAST2蛋白表达则明显降低(P＜0.05).结论 microRNA-31在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中的表达上调,并可能通过负调控LATS2蛋白水平,从而影响肿瘤的发生和发展.     

MiR-34a在人鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨miR-34a在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法收集30例鼻咽癌组织标本,qRTPCR检测鼻咽癌组织中miR-34a表达量,对miR-34a表达与肿瘤临床病理特征及患者预后相关性进行分析,探讨miR-34a表达是否影响鼻咽癌细胞的迁移及侵袭能力。结果 30例鼻咽癌组织中miR-34a的相对表达量为(2.367±0.235),而对应癌旁组织为(5.399±0.463);其中22例鼻咽癌组织(73.33%)中miR-34a的相对表达量低于对应癌旁组织,差异有统计学意义(P0.001);存在淋巴结转移及具有较高的TNM分期(Ⅲ+Ⅳ)的鼻咽癌组织中miR-34a的表达更低(P0.01)。结论 miR-34a在鼻咽癌组织中表达下调,并与患者不良临床病理特征相关,上调miR-34a表达可能会抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,miR-34a基因可能作为一种抑癌基因在鼻咽癌的发生和发展中发挥重要作用。     

FBXO31对肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨FBXO31基因对肺腺癌细胞系A549增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染法将FBXO31表达质粒及FBXO31 siRNA序列分别转染肺癌A549细胞,用Western blot、MTT、平板克隆、划痕和Transwell实验分别检测A549细胞中FBXO31蛋白表达、细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力.结果Western blot显示FBXO31表达质粒转染上调A549细胞中FBXO31蛋白表达,而转染siRNA下调FBXO31蛋白表达.FBXO31基因过表达增强A549细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力,而FBXO31基因沉默抑制细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力(P＜0.01).结论FBXO31基因可促进肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力.     

猪miR-204组织表达及重要靶基因筛选

基于Illumina Hiseq 4000高通量测序技术筛选得到仔猪感染C型产气荚膜梭菌耐受和易感组中显著上调表达的miR-204。为研究miR-204在各组织中的表达,进一步筛选miR-204参与调控仔猪C型产气荚膜梭菌感染的关键靶基因,采用实时荧光定量PCR方法检测了miR-204在7日龄仔猪各组织中的表达,利用MEGA7.0软件对其成熟体序列保守性进行分析,运用TargetScan、miRDB、PicTar软件进行靶基因预测,并用DAVID软件对靶基因进行Gene Ontology和KEGG Pathway通路富集分析,进一步采用qRT-PCR方法对筛选得到的关键靶基因在猪肠上皮细胞(IPEC-J2)中进行靶向关系验证。结果表明,miR-204在7日龄仔猪肾脏、肝脏、胸腺、淋巴、十二指肠和回肠组织中均高度表达,其成熟体序列在脊椎动物间高度保守。3种软件预测到的共同靶基因有114个,这些靶基因显著(P 0.05)富集在15个GO功能和13个信号通路。结合前期得到的抗性基因,筛选到4个关键靶基因NR3C1、SIRT1、BCL2L2和DLG5,转染miR-204 mimics后,靶基因SIRT1、BCL2L2和DLG5极显著(P 0.01)下调表达。miR-204是参与调控仔猪抵抗C型产气荚膜梭菌感染的重要因子,SIRT1、BCL2L2和DLG5可能是miR-204的关键靶基因,其功能还需进一步验证。     

三叶因子3对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的探讨TFF3基因在非小细胞肺癌中的作用及其对凋亡的影响。方法免疫组织化学法检测组织芯片31例肺腺癌、21例肺鳞癌、10例正常肺组织TFF3表达阳性率;慢病毒包装TFF3基因ORF序列及TFF3-shRNA基因质粒、转染、嘌呤霉素筛选获得稳定过表达及沉默TFF3基因的A549细胞株;实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法验证TFF3基因和蛋白表达水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和信号通路分子Akt表达水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果肺腺癌和鳞癌组织TFF3蛋白阳性表达率显著高于正常肺组织(P0.05),Ⅲ级肺癌组织中TFF3阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ级(P0.05),有淋巴结转移的肺腺癌和鳞癌组织中TFF3阳性表达率高于无淋巴结转移组织(P0.01)。过表达TFF3的A549细胞(A549-TFF3)中TFF3基因及蛋白水平显著高于对照组,沉默TFF3基因的A549细胞(A549-shTFF3)中TFF3 mRNA及蛋白水平较对照组明显降低(P值均0.01)。Western blot检测Bcl-2/Bax、p-Akt、p-Akt/Akt在A549-TFF3组显著高于对照组(P0.01);在A549-shTFF3组Bcl-2/Bax、p-Akt表达水平显著低于对照组(P0.01),p-Akt/Akt表达水平低于对照组(P0.05),Akt表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞结果显示A549-TFF3细胞凋亡率较低(P0.01),A549-shTFF3细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01)。结论非小细胞肺癌组织TFF3高表达,与病理分级及淋巴结转移有相关性。过表达TFF3在非小细胞肺癌细胞中可能通过激活Akt信号通路抑制肺癌细胞凋亡,促进肿瘤细胞恶性增生。     

IGFBP-7在非小细胞肺癌患者血清和肿瘤组织中的表达

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP-7)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血清和肺癌组织中的表达。方法分别采用ELISA、免疫组化法检测57例NSCLC和17例肺部良性病变患者血清、肺组织中IGFBP-7的表达,并分析IGFBP-7表达与病理参数间的关系。结果 NSCLC组血清及肿瘤组织中的IGFBP-7表达水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);NSCLC患者血清及肿瘤组织中IGFBP-7的表达与淋巴结转移、局部侵犯、远处转移和TNM分期有关(P<0.01或0.05)。结论血清及肿瘤组织中IGFBP-7低表达在NSCLC发生、发展及转移中有重要作用,有助于NSCLC诊断及预后判断。     

PK-15细胞中与CSFV感染相关的microRNAs筛选及miR-214的功能研究

【目的】利用制作的猪的miRNA表达谱芯片筛选猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)感染PK-15细胞后表达有差异的miRNA,并进一步探讨其中表达差异较明显的miRNA的作用和功能,从miRNA的角度探究CSFV的致病机制,为猪瘟(classical swine fever,CSF)的防控提供新依据。【方法】为了研究CSFV感染PK-15细胞后miRNA表达的变化情况,根据miRBase version 19.0数据库中326条猪的miRNA合成探针,采用原位合成技术制作表达谱芯片,筛选得到CSFV感染PK-15细胞后表达有差异的miRNA。挑选CSFV感染PK-15细胞后表达差异最明显的miR-214作为进一步研究对象,研究miR-214在CSFV感染过程中的功能和作用。CSFV感染PK-15细胞后,用荧光定量PCR检测miR-214的mRNA表达水平。为了进一步研究miR-214对CSFV感染的影响,合成miR-214模拟物及抑制物,并分别转染PK-15细胞,转染后24 h感染CSFV,感染后48h用荧光定量PCR检测CSFV的基因拷贝数,用间接免疫荧光方法检测CSFV的病毒滴度。为了进一步探究miR-214参与调控CSFV复制的机制,通过生物信息学软件预测miR-214参与调控CSFV复制的靶蛋白,并用荧光素酶报告基因系统进一步确证miR-214能够靶向作用于凋亡通路中重要分子TNFR1相关的死亡区域蛋白(TNF Receptor-Associated Death Domain,TRADD),因此猜测miR-214通过影响靶蛋白TRADD的表达水平从而影响PK-15细胞凋亡,将miR-214模拟物及抑制物分别转染PK-15细胞,转染后24 h感染CSFV,同步设立不感染CSFV的细胞对照,感染后48 h用荧光定量PCR和Western blot分别检测TRADD的mRNA和蛋白表达量的变化,同时用流式细胞术检测miR-214对CSFV感染的PK-15细胞凋亡的影响。【结果】CSFV感染PK-15细胞后,通过表达谱芯片技术筛选得到69条表达有差异的miRNA,其中miR-214表达量上调且差异最明显。qRT-PCR结果显示,CSFV感染PK-15细胞后miR-214的mRNA表达量上调,验证了表达谱芯片的结果。将miR-214模拟物转染PK-15细胞后再感染CSFV, CSFV的基因拷贝数及病毒滴度均显著下降;转染miR-214抑制物后再感染CSFV,CSFV的基因拷贝数及病毒滴度均显著上升,表明miR-214促进了CSFV的复制。为了进一步探究miR-214促进CSFV复制的机制,用生物信息学软件预测TRADD为miR-214的靶蛋白,荧光素酶报告基因系统验证了miR-214能够靶向作用于TRADD。转染miR-214模拟物后,PK-15细胞中TRADD的mRNA和蛋白表达量均显著上升,而转染miR-214抑制物后,PK-15细胞中TRADD的mRNA和蛋白表达量均显著下降,表明miR-214抑制TRADD的表达。通过流式细胞术,验证了CSFV感染PK-15抑制细胞凋亡,miR-214抑制CSFV感染的PK-15细胞凋亡。【结论】CSFV感染PK-15后,上调细胞内miR-214的表达。miR-214能通过靶向抑制TRADD蛋白的表达,从而抑制PK-15细胞凋亡,促进CSFV在细胞内的复制。     

非小细胞肺癌中MAGE-3蛋白的Western Blot分析

目的：观察黑素瘤抗原-3(MAGE-3)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达。方法：用Western blot方法对3种人肺癌细胞系和56例NSCLC标本及相邻正常肺组织标本MAGE-3蛋白的表达情况进行研究。结果：3种人肺癌细胞系均表达MAGE-3蛋白;56例NSCLC标本中,28你表达MAGE-3蛋白,而相邻正常肺组织均不表达MAGE-3蛋白。结论：MAGE-3蛋白在NSCLC中有较高比率的表达．有望以该抗原作为适宜靶点对NSCLC患者进行免疫治疗。     

Sin3A相关蛋白18在宫颈癌组织中表达及临床意义

为探讨Sin3A相关蛋白18(SAP18)在宫颈癌组织中的表达情况,并研究SAP18对宫颈癌细胞HeLa增殖和迁移能力的影响与分子机制.利用TCGA和GTEx数据库分析SAP18在宫颈癌患者癌组织和癌旁组织中的表达水平,并计算SAP18表达水平与患者生存率的关系.免疫组织化学染色试验检测宫颈癌组织标本中SAP18蛋白的表达情况.CCK-8试验和软琼脂克隆形成试验检测SAP18对HeLa细胞增殖的影响,细胞划痕试验检测SAP18对HeLa细胞迁移能力的影响.免疫印迹法验证敲低人乳头瘤病毒(HPV)编码的E6、E7蛋白对SAP18表达水平的影响.结果表明:SAP18在宫颈癌组织中呈高表达;SAP18表达水平与宫颈癌患者生存率呈负相关.过表达SAP18可增强HeLa细胞克隆形成、增殖和迁移能力.敲低HPVE6和E7蛋白导致SAP18表达水平下调.这一研究说明HPV通过E6和E7蛋白上调SAP18的表达促进宫颈癌恶性转化、增殖和迁移,SAP18蛋白的高表达不利于宫颈癌患者的生存.