东北梅花鹿卵泡发育过程中卵泡细胞超微结构的观察

为了进一步弄清东北梅花鹿卵泡细胞超微结构的变化规律,本研究用透射电镜、目镜测微尺和显微照相技术对各期卵泡中卵泡细胞的超微结构进行了观察,并按卵泡大小、颗粒细胞层数、透明带状况及卵泡腔是否出现,把卵泡分成4个阶段。结果表明：原始卵泡-卵泡细胞与卵母细胞已开始建立结构上的联系,卵泡细胞的形态变化也是适应卵泡发育的需要;初级卵泡-细胞器数量增加,结构变得清晰,卵泡细胞中出现厚壁小泡,可能是一种早期的脂滴;次级卵泡-卵泡突起穿过透明带,并出现有营养作用的脂滴和支持作用的微丝;三级卵泡-高尔基复合体发达,多与粗面内质网相贴,核糖体丰富,成簇分布,接近排卵的卵泡中卵泡细胞发生扩展等一系列结构上的变化将利于受精。     

哺乳动物卵泡闭锁的研究

哺乳动物的卵泡闭锁是一种正常的繁殖生理过程，也是一种选择性的生理性细胞死亡过程。研究卵泡发育和闭锁对于提高动物繁殖力和胚胎工程发展有着相当重要的意义。本文主要在哺乳动物的卵泡闭锁与细胞凋亡、卵泡闭锁的调控因子、卵泡闭锁的相关基因以及卵泡闭锁的相关生殖激素等方面进行了综述。     

发情前后雌性东北梅花鹿生殖激素变化规律

对3只雌性东北梅花鹿在发情前后利用吊圈保定法进行颈静脉采血,采用RIA测定血清中FSH、LH、E2和P的含量。结果表明:FSH从发情前第16d到10d缓慢升高,到第10d达2.89±0.21mIU/mL(P<0.05),然后处于平稳状态,直到发情后的第6d;LH从发情前第12d开始缓慢上升,到发情当天达峰值,发情后第2d又明显下降,之后变化不显著(P>0.05);E2在发情前第8d和第2d分别出现1个峰值(P<0.05或P<0.01),在发情当天显著下降(P<0.01),到发情后第2d下降到最低;P从发情前第16d缓慢上升,到第6d达峰值,在发情当天降为最低,在发情后第2d显著升高(0.84±0.16ng/mL,P<0.05),之后,保持平稳。在发情的24h内,各时间上FSH、LH、E2和P含量没有明显变化(P>0.05),并且与发情当天没有显著差异(P>0.05)。     

发情期蓝狐卵泡发育的显微结构观察

[目的]对发情期蓝狐卵巢的组织结构和卵泡发育过程的变化进行研究。[方法]采集发情期蓝狐的左侧卵巢共计10枚,利用光学显微镜对卵巢的组织结构和卵泡的发育过程进行观察,同时利用目镜测微尺和显微照相技术分别对30个原始卵泡3、0个初级卵泡、15个生长卵泡、15个囊状卵泡、15个成熟卵泡及各级卵泡中的卵母细胞进行测量和拍照。[结果]蓝狐卵巢由生殖上皮、白膜、皮质和髓质构成。皮质内分布着大量的间质细胞及不同发育阶段的卵泡,位于卵巢的外周;髓质位于皮质下层,分布着较多的血管。卵泡发育过程中,各级卵泡和卵母细胞的直径差异较大（卵泡为45.45～974.55μm,卵母细胞为30.23～147.27μm）,在初级卵泡阶段出现透明带物质。卵泡闭锁发生于卵泡生长的各个时期,主要表现为卵母细胞的皱缩,细胞核固缩;颗粒细胞松散、退化。[结论]为揭示雌性蓝狐的生殖机理提供了组织学依据。     

吉林梅花鹿发情期卵泡发育波研究

本研究通过直肠B超技术监测了经过2种同期发情处理（CIDR＋PG＋PMSG和1G）的9头吉林梅花鹿发情周期卵泡动态发育情况。实验得出：梅花鹿的卵泡发育均呈波形发育,1个发情周期由1—3个卵泡波组成。3个1波周期,3个2波周期,2个3波周期。1波周期的长度是5．3d±0．6d,2波周期的长度是12．3d±4．0d,3波周期的长度是25．5d±2．1d。未发情的216号梅花鹿在整个观察期中出现2个卵泡发育波,而未发情的1号鹿卵泡发育没有出现明显的波。1波周期梅花鹿的最大卵泡平均直径（5．4mm±0．5mm）,比2波周期中第1个（5．1mm±0．6mm）和第2个内波的最大卵泡平均直径（4．8mm±0．5mm）和3波周期中第2个内波的最大卵泡平均直径（5．2mm±0．4mm）都大（P〉0．05）,比3波周期中第1个和第3个内波的最大卵泡平均直径（分别是5．6mm±0．3mm和5．7mm±1．1mm）小（P〉0．05）。2波和3波周期中的所有内波的最大卵泡平均直径差异显著（P〈0．05）,2波周期中的最大卵泡比3波周期中的直径小。2波周期的内波间隔（6．0d±1．4d）比3波周期的所有内波间隔（9．8d±1．5d和5．7d±1．rid）明显短（P〉0．05）。1波周期生长持续期是4．5d±0．7d,2波周期生长持续期（4．7d±1．5d和4．0d±1．7d）和3波周期中卵泡的生长持续期（4．5d±2．1d、6．5d±2．1d和2．5d±0．7d）差异不显著（P〉0．05）。2波周期中第1波（0.5mm／d±0．3mm／d）和第2波的生长速率（0．5mm／d±0．2mm／d）没有显著差异（P〉0．05）。排卵波和闭锁内波的卵泡生长持续期也没有显著差异（P〉0．05）。     

禽类卵泡生长发育和闭锁的调节机制

本文综述了禽类卵泡的生长发育和闭锁的调节机制的研究进展。指明了该项研究在禽类生产实践中对促进卵泡的生长,分化和降低卵泡闭锁率具有重要的意义。     

东北梅花鹿转铁蛋白的多态性

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定了140头东北梅花鹿5个类型的转铁蛋白(Tf)的多态性。Tf有6种表型,受TfA1、TfA2、TfB1、TfB2、TfC1、TfC26个复等位基因控制。比较了梅花鹿5种类型间Tf基因频率,类型间有较大差异。利用同质度(H·I)、平均杂和性(-H)和有效基因数(Ne)比较5种类型间的遗传变异性,双阳型和伊通型变异性较大,其次是东丰型、抚松型和龙潭型。根据基因频率计算遗传距离,并用类平均法进行聚类分析,结果表明,东丰型与抚松型、双阳型与伊通型的亲缘关系较近,龙潭型与其它四种类型有较大的分化。     

发情期蓝狐卵泡发育的显微结构观察(英文)

[目的]对发情期蓝狐卵巢的组织结构和卵泡发育过程的变化进行研究。[方法]采集10只发情期蓝狐的左侧卵巢共计10枚,利用光学显微镜对卵巢的组织结构和卵泡的发育过程进行观察,同时利用目镜测微尺和显微照相技术分别对30个原始卵泡、30个初级卵泡、15个生长卵泡、15个囊状卵泡、15个成熟卵泡及各级卵泡中的卵母细胞进行测量和拍照。[结果]蓝狐卵巢由生殖上皮、白膜、皮质和髓质构成。皮质内分布着大量的间质细胞及不同发育阶段的卵泡,位于卵巢的外周;髓质位于皮质下层,分布着较多的血管。卵泡发育过程中,各级卵泡和卵母细胞的直径差异较大(卵泡为45.45~974.55μm,卵母细胞为30.23~147.27μm),在初级卵泡阶段出现透明带物质。卵泡闭锁发生于卵泡生长的各个时期,主要表现为卵母细胞的皱缩,细胞核固缩;颗粒细胞松散、退化。[结论]为揭示雌性蓝狐的生殖机理提供了组织学依据。     

东北梅花鹿染色体R分带的研究

[目的]研究东北梅花鹿染色体R带核型,为梅花鹿的遗传变异、基因定位等提供参考。[方法]采用外周血细胞培养,过量胸腺嘧啶脱氧核苷阻断法使细胞分裂同步化,用RBG显带方法来研究东北梅花鹿中期染色体R带核型。[结果]梅花鹿单倍体染色体显带数目达400条。No1、No2、No3、No4、X染色体和Y染色体的R带和高分辨G带几乎完全是相反的;除了No21、No24、No28末端浅染外,其他的末端均为阳性深染带。[结论]RBG显带方法能使东北梅花鹿中期染色体显示出典型的R带带型。     

云南省梅花鹿产业现状调查及发展建议

梅花鹿是中国特产的珍贵药用动物,作为野生动物已属濒危,但在中国已经形成规模的人工养殖,梅花鹿全身是宝,其产茸质量佳,具有极高的食用价值和药用价值;云南省大部分地区是饲养梅花鹿的适宜区,还具有品质高、劳动成本低及面向东南亚的区位优势,具有广阔的产业发展前景。为更好地发展云南省梅花鹿产业,在调查问卷及实地调查的基础上概述了云南省梅花鹿产业现状、产业优势及存在的问题,从产业培育、制品加工、建立市场体系和构建科技支撑体系等方面提出发展建议。     

东北梅花鹿染色体C带和高分辨G带研究

采用外周血细胞培养、C分带技术对东北梅花鹿染色体进行研究,结果表明,不同地域东北梅花鹿染色体的结构异染色质可能存在一定程度上的多态性.采用氨甲喋呤阻断法使细胞分裂同步化,结合胰酶G显带技术对东北梅花鹿染色体进行研究,得到了高分辨G带核型,单倍体染色体显带数目增加至456条.     

东北梅花鹿鹿茸尖端组织全长cDNA文库的构建

为克隆出与鹿茸生长发育相关基因的全长序列,采用SMART技术构建了东北梅花鹿鹿茸尖端组织的全长cDNA文库.用SV Total RNA Isolation System试剂盒提取总RNA,以逆转录酶PowerScriptTM 反转录合成第一链cDNA,然后通过LD-PCR合成并扩增ds cDNA.扩增产物经纯化、SfiⅠ酶切、过CHROMA SPIN-400柱去除小片段后,连接到SfiⅠ消化过的pDNR-LIB质粒载体中,最后用电转化法将重组质粒转化到E. coli DH5α内得到原始文库.经测定,构建的原始文库约含有2.56×10~6个重组子,插入片段多在0.5～2kb之间,平均插入片段长度约1.1kb,重组效率接近100%.结果表明,东北梅花鹿鹿茸尖端组织的全长cDNA文库已构建成功.     

基于DGGE和T-RFLP分析采食不同粗饲料梅花鹿瘤胃细菌区系

【目的】细菌区系在梅花鹿（Cervus nippon）瘤胃发酵中发挥着重要作用,然而有关梅花鹿瘤胃细菌区系的研究鲜有报道。研究梅花鹿瘤胃细菌区系,为梅花鹿瘤胃发酵调控提供分子生物学依据。【方法】选取4头2岁龄的装有永久性瘤胃瘘管的成年雄性梅花鹿为研究对象,分别饲喂以柞树叶（OL组,梅花鹿A和B）和玉米秸秆（CS组,梅花鹿C和D）为主要粗饲料的日粮,持续饲喂30 d。通过瘤胃瘘管取瘤胃内固液混合物,提取瘤胃微生物基因组DNA。扩增瘤胃细菌16S rRNA基因V3区以及16S rRNA基因,分别用于DGGE和T-RFLP分析。DGGE图谱进行聚类分析,并切取优势条带进行克隆测序,鉴定瘤胃内细菌组成。根据T-RFLP图谱结果计算细菌群落的多样性、优势度、均匀度和丰富度,通过Microbial Community AnalysisⅢ（MiCAⅢ）数据库推测T-RFs可能代表的微生物种类,并进行T-RFLP图谱的聚类分析。【结果】DGGE图谱聚类表明,CS组和OL组瘤胃细菌区系相似性低于65%,表明粗饲料种类影响梅花鹿瘤胃细菌区系。OL组梅花鹿A和B的DGGE图谱相似度大于70%,CS组梅花鹿C和D的DGGE图谱相似性大于75%,而且同组不同个体之间瘤胃细菌区系存在差异。OL组和CS组分别获得20和24个DGGE特异性条带。序列分析表明,CS组条带可归类为拟杆菌门、厚壁菌门和变形菌门,而OL组条带可归类为拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和互养菌门。OL组与CS组中存在大量Prevotella spp.,但不同组中Prevotella spp.在种水平组成不同,主要纤维降解菌为Clostridium spp.与Eubacterium spp.。T-RFLP结果显示,梅花鹿D（CS组）具有最高的丰富度、多样性、均匀度和最低的优势度,梅花鹿A和B的各项指数相近但低于梅花鹿D,说明OL组中的粗饲料（柞树叶）影响瘤胃中微生物的相对生物量。梅花鹿C和D的各项指数相差较大而且梅花鹿C的指数低于梅花鹿A和B,表明同组不同个体之间存在差异。81、214、272和308 bp的T-RFs为OL组优势条带,90、95、175、273和274 bp的T-RFs为CS组优势条带,161、259、264、266和284 bp的T-RFs为共同条带。根据MiCAⅢ结果,这些T-RFs代表细菌归类于拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和酸杆菌门。T-RFs图谱聚类表明,4头梅花鹿T-RFs聚为两类,粗饲料来源影响梅花鹿瘤胃细菌T-RFs图谱特征,其中梅花鹿A、B和C的T-RFs特征条带图谱相似。【结论】Prevotella spp.是梅花鹿瘤胃优势细菌,但不同粗饲料影响梅花鹿瘤胃细菌区系组成。     

梅花鹿生茸骨膜干细胞可溶性总蛋白抗体的制备及滴度测定

为了获取梅花鹿生茸骨膜干细胞可溶性总蛋白抗体。本试验培养了梅花鹿生茸骨膜干细胞,从该细胞中提取可溶性总蛋白。以其可溶性总蛋白为抗原,通过淋巴结和皮下注射两种方式免疫试验动物,注射的抗原量分别为70μg/只和280μg/只。分别于末次免疫后第10天和第20天采血,分离血清,通过ELISA试验检测血清中抗体滴度。结果表明,280μg皮下免疫和70μg淋巴结免疫均获得了较好的免疫效果,末次免疫后第10天的抗体滴度较高。     

梅花鹿鹿茸蛋白聚糖的提取与分离

探讨梅花鹿（Cervus nippon）鲜鹿茸中蛋白聚糖的提取与分离方法，为深入研究和开发利用鹿茸提供了理论基础。采用Tris-HCl缓冲液匀浆提取梅花鹿鲜鹿茸，将粗提液上DEAE Sepharose FF离子交换柱，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分离组分。结果表明提取液中总蛋白聚糖含量为6．69mg／g；DEAE Sepharose FF离子交换层析收集到三个蛋白聚糖组分I、Ⅱ、Ⅲ，其蛋白聚糖含量分别占总蛋白聚糖含量的45．25％、25．15％、18．26％；聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝和甲苯胺蓝染色均着色，蛋白聚糖I核心蛋白分子量大约为40kD，甲苯胺蓝染色显示3条单一宽带。DEAE Sepharose FF阴离子交换层析能用于梅花鹿鲜鹿茸中蛋白聚糖的分离，且此法快速简便。     

卵巢运输保存温度和时间对野生梅花鹿卵母细胞体外成熟的影响

以屠宰日本北海道野生梅花鹿(Cervus nippon Temminck)卵巢为材料,研究了卵巢不同保存温度(20～25 ℃,10～15 ℃)和时间(12 h,24 h)及卵母细胞周围的卵丘细胞层对卵母细胞体外成熟的影响.结果表明,卵巢在20～25 ℃下保存12 h,卵母细胞成熟率为77%,无变形卵子出现,但其保存时间延长到24 h时,卵母细胞成熟率降至35%,变形率高达62%;而在10～15 ℃下保存12 h,卵母细胞成熟率为45%,卵母细胞变形率为18%,但10～15 ℃保存24 h与20～25 ℃保存24 h相比,卵母细胞变形率却很低(35%,62%)(P<0.05).周围卵丘细胞层3层以上和少于3层的卵母细胞中,48%～53%的受精卵都能正常地卵裂,但前者获得了13%的囊胚率,后者未发育至囊胚(P<0.05).     

不同精粗比全混合日粮对雄性梅花鹿生产性能及血液生化指标的影响

在能量浓度相近、粗蛋白水平一致的前提下,研究不同精租比全混合日粮(TMR)对雄性梅花鹿生产性能和血液生化指标的影响.采用单因子试验设计,全混合日粮精粗比分别为A-65:35、B-55:45、C-45:55、D-35:65.试验结果表明:在饲料适口性、鲜茸产量、干茸产量、折干率和茸头围度等方面B组与其他3组均存在显著差异(p<0.05);在鹿茸生长日期、鹿茸眉枝长、主干长、主干围度和茸基围度等方面差异不显著(p>0.05);血液生化指标中血清总蛋白浓度、血清白蛋白浓度及血清免疫球蛋白浓度差异显著(p<0.05),以B组最高;血清尿素氮浓度和血清葡萄糖浓度各组间差异不显著(p>0.05).