马氏珠母贝激光育苗的研究

马氏珠母贝是培育海水珍珠的主要贝类。近年来,由于近亲繁殖,种群退化,贝体越来越小,致使培育的人工珍珠颗粒也越来越细。为了改良品种,培育出数量多、质量好的马氏珠母贝苗,我们从1982年起,进行激光育苗研究,并于1987年结合生产试     

马氏珠母贝人工育苗中的技术问题

近年来不少单位在马氏珠母贝育苗过程中因技术问题而使育苗效果差、经济效益低。为此笔者根据育苗实践谈几个技术问题。 1.亲贝和幼虫的优选 优选亲贝的标准是:3～4龄,活力强,外形完整,贝体厚大;生殖腺丰满,在足基处的两个乳头状突起较高,呈乳白色或橙红色,不透明,吸出的卵子放在载玻片上不易分散,卵子大小整齐,呈圆形或椭圆形,精子游动活泼。这样的亲贝育苗效果最好。幼虫的优选     

马氏珠母贝术前处理的研究

实验结果表明:经术前处理后的插核贝休养期存活率为95 2%,育珠期存活率达85 5%,每贝只插1个核,休养期留核率为0 86,育珠期留核率达0 71。珍珠的质量明显提高,优质珍珠的生成率高达34 6%,比对照组高出27 5%。     

马氏珠母贝激光育苗机理的探讨

马氏珠母贝激光育苗，其产量比常规育苗增加１０倍以上，激光能增强精子的活力，提高精液品质，可影响卵子的通透性，使卵子新陈代谢中的某些反应发生良性变化。激光能抑制中致病菌及霉菌的生长，使受精卵发育成健壮的胚胎、幼虫、幼苗。所以，激光育苗是一种投产少，效益极高的育苗方法。     

马氏珠母贝EST微卫星的筛选

构建了马氏珠母贝的血液、足、鳃、胃、肝、心脏、外套膜、珍珠囊和感染多毛虫马氏珠母贝的血液(血感)等9个组织的cDNA文库,测序获得了6979个EST序列,从中查找到了268个重复序列,隶属于243个EST,含微卫星的EST数占EST总数的3.48%.珍珠囊cDNA文库含微卫星的序列所占比例最高,为6.16%,血感的最低,为1.65%.双碱基重复序列130个,占48.5%,(AT/AT)n类型最常见;三碱基类型的83个,占约31%,其中(AAT/ATT)n和(AAG/CTT)n较多;四碱基重复的有30个,占11.2%,(AAAT/ATTT)n占了该类型的约50%.一共能够设计151对微卫星引物,有130对可以扩增,占合成引物总数的86.09%,其中,多态性引物45对.多态性EST-SSR的筛选将为马氏珠母贝的分子遗传学研究、种质鉴定和野生资源保护等提供可靠的工具.     

马氏珠母贝精子的超低温保存

通过比较不同pH值（5．5-9．5）、不同盐度的海水等作为基础液对马氏珠母贝精子保存的影响,选择其中无激活精子作用又对其生理特性（活力,寿命,受精能力等）无影响者,加入二甲亚砜抗冻剂配制成超低温保存的抗冻保护液,精液与保护液按1：10和1：20的比例混合,样品按4组不同的降温程序平衡后转入液氮冷冻,比较其超低温冻存的效果。结果表明：以海水（pH7．5—8．0）为基础液,配制10％DMSO作为抗冻保护液,精液与保护液比例为1：20,在低温（0-4℃）中平衡约30min,在距液氮面15cm、5cm处分别停留5min、10min后转入液氮（-196℃）,冻存精子效果良好。冷冻24h、48h及5个月后,在38—40℃下水浴解冻复苏后,用终浓度0．25‰的氨海水刺激,精子存活率可超过60％,受精率可达80％。     

马氏珠母贝混养紫海胆对污损生物防除效果的研究

利用我国南方紫海胆(Anthocidaris crassispina)与大亚湾马氏珠母贝(Pinctada martensi)进行不同比例混养,探讨了紫海胆对马氏珠母贝贝体和养殖网笼污损生物的防除效果,以及紫海胆和马氏珠母贝的生长状况。试验设混养组(PA3、PA6、PA9)和对照组(P),即在养殖马氏珠母贝30只/层的基础上,分别混养紫海胆3、6、9、0个/层;另设紫海胆单养组(A3、A6、A9),养殖密度分别为3、6、9个/层。试验结果显示：各混养组及P组间马氏珠母贝的存活率无显著差异(P>0.05),混养组紫海胆的存活率均接近100%,组间无显著差异(P>0.05);PA6、PA9组马氏珠母贝的特定生长率大于P组(P<0.05),而PA3组与P组之间差异不显著(P>0.05);就马氏珠母贝的壳长日平均增长率而言,PA3、PA9组与P组间无显著差异(P>0.05),但PA6组显著大于P组和PA3组(P<0.05);PA6、PA9组马氏珠母贝的肥满度显著大于P组(P<0.05),PA3组与P组间无显著差异(P>0.05);混养与单养各组之...     

马氏珠母贝不同组织同工酶的比较

采用聚丙烯酰酰胺凝胶水平平板电泳技术,研究了马氏珠母贝的８种组织７种同工酶的酶谱表型,结果表明：所测组织中未检出α－磷酸甘油脱氢酶（α－ＧＰＤＨ）和醇脱氢酶（ＡＤＨ）,乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）只在肝脏一条微弱谱带,苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）、苹果酸酶（ＭＥ）和超氧化物岐化酶（ＳＯＤ）部分组织间有显著差异,而酯酶（ＥＳＴ）则具有明显的组织特异性。     

马氏珠母贝鳃组织抗菌活性的研究

用纸片琼脂扩散法和微量测定法对制备的马氏珠母贝鳃组织匀浆物进行抗菌活性分析.结果表明,马氏珠母贝鳃组织匀浆物具有抗革兰氏阴性菌-副溶血弧菌、河流弧菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌、绿脓杆菌活性;对革兰氏阳性菌-金黄葡萄球菌具一定抑制活性,但对枯草芽孢杆菌无抑制活性.利用胰蛋白酶对马氏珠母贝鳃组织匀浆物水解后,其抗菌活性消失,表明其中抗菌成分为蛋白质.将马氏珠母贝鳃组织匀浆物在不同温度(37～95 ℃)和不同pH(2.5～5)保温,发现其抗菌活性成分对热及酸耐受性较强.马氏珠母贝鳃组织匀浆物在低浓度无溶血活性.该抗菌组分在马氏珠母贝的免疫防御中具有一定的作用.     

马氏珠母贝蛋白的分离及分子量分布研究

试验结果表明,马氏珠母贝全脏器各分离蛋白组分占总蛋白含量分别为:非蛋白氮1.48%,肌浆蛋白33.20%,肌原纤维蛋白13.14%,碱溶性蛋白21.54%,基质蛋白30.65%;贝肌肉各分离蛋白组分占总蛋白含量分别为:非蛋白氮0.83%,肌浆蛋白26.56%,肌原纤维蛋白18.48%,碱溶性蛋白30.34%,基质蛋白23.79%;马氏珠母贝蛋白氨基酸组成均衡,呈味氨基酸及支链氨基酸含量高,但在各蛋白组分中的含量存在一定差异性.利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定的分子量分布结果显示,2种原料蛋白的肌浆蛋白分子量分布范围较宽,集中在200～19 kDa,肌原纤维蛋白分子量分布集中在200～45 kDa,碱溶性蛋白集中分布在41～3 kDa.     

马氏珠母贝育苗要点

马氏珠母贝(Pinctada martensii)又称合浦珠母贝,是我国南方沿海重要的经济贝类,它以生产海水珍珠(南珠)而闻名于世。2003年以来,海南大学海洋学院着手进行了"珍珠贝育种规划(Pearl Oyster Breeding scheme,POBs)"     

XLP涂料对合浦珠母贝成活率、生长及附着生物量的影响

研究了XLP防污涂料对合浦珠母贝Pinctada fucata成活率、生长及附着生物量的影响。经XLP防污涂料处理后的贝,其附着生物量明显低于对照组;经防污涂料处理后的养殖网笼具,其附着生物量也明显低于对照组;贝和养殖网笼具同时用XLP防污涂料处理时,防生物附着的效果最好。经XLP防污涂料处理后,处理前期（30～60d）合浦珠母贝养殖成活率与对照组的成活率接近,或者略低于对照组;养殖120d后试验组成活率则高于对照组。使用XLP防污涂料处理后养殖120d,合浦珠母贝的个体大小及体重高于对照组。试验结果表明,使用XLP防污涂料能有效防御污损生物附着,有利于合浦珠母贝的养殖。     

马氏珠母贝人工育苗的若干关键技术

讨论了马氏珠母贝(Pinctada martensii)人工育苗的若干关键技术。马氏珠母贝育苗的关键是要做到亲贝优、幼虫优、饵料质量好数量足、水环境稳定。育苗的最高成活率可达31．1％,单位水体的出苗量可达62．3万个／m^3。     

马氏珠母贝亲代选择对子一代的影响

研究了马氏珠母贝不同亲本规格对后代的影响,以期为育种和苗种生产中的亲贝选择提供科学的理论指导。试验从来自同一养殖群体的2000个随机个体马氏珠母贝中选取规格最大（壳长55.89±1.65mm）、中等（壳长48.55±0.81mm）、最小（壳长42.22±2.51mm）的性成熟个体各50个作为亲贝（♀∶♂=1∶1）,按规格分成大、中、小3组,分别进行各组内亲本个体群交,在相同环境及试验条件下分析亲本选择对子代生产性能的影响。结果表明,大规格亲贝优于中规格亲贝（P〈0.05）;中规格亲贝优于小规格亲贝（P〈0.05）;马氏珠母贝亲代选择对子一代生产性能具有显著影响（P〈0.05）。这表明马氏珠母贝大规格亲贝群交后代表现出明显的生长优势,截断选择策略有效。     

马氏珠母贝池塘育珠试验

目前,海水珍珠人工养殖都在自然海区进行,受各种自然环境因子制约较大,影响了珍珠养殖产量与质量的提高。为探索池塘养殖海水珍珠技术,我们于１９９６年和１９９７年在北海市竹林海水鱼类养殖基地进行了池塘浮筏吊养马氏珠母贝育珠技术试验,获得成功。现将试验情况报告如下:一、试验材料１．池塘条件:面积２２０亩,一口,不规则形,池深３．０ｍ,池底平坦,泥沙底质,池堤为石头水泥勾缝结构,设进排水门各一座,排灌方便。２．水源:靠潮差纳排自然海水。海水比重１．０１５～１．０２２,水深５０～８０ｃｍ,ｐＨ值８．０～８．５,水温年变化范围…     

马氏珠母贝高F值寡肽体外抗氧化研究

该研究采用直接醇沉法、盐提醇沉法和水提醇沉法提取马氏珠母贝 (Pinctada martensii) 黏液中的糖蛋白,优选直接醇沉法粗品 (DAS),进一步采用Sephacryl S-200纯化获得直接醇沉纯化品 (DAPS),同时测定DAS及DAPS的体外抗氧化活性。结果显示,DAS的糖和蛋白质得率均最高,且3种方法提取的糖蛋白粗品蛋白质组成无明显差异;DAPS的总糖和蛋白质质量分数分别为 (22.72±0.26)%和 (71.18±0.62)%,分子量主要集中在245 kD;DAS和DAPS对羟自由基的清除能力显著,在0.8 mg·mL⁻¹下两者对羟自由基的清除率均高于90%,对超氧阴离子自由基及DPPH自由基也有一定清除能力。研究结果可为探索马氏珠母贝黏液功效组分提供理论基础数据。

     

马氏珠母贝珍珠瑕疵的观察研究

为了了解珍珠瑕疵的形成原因,以育珠期为1个月的马氏珠母贝薄层珍珠为观察对象,对珍珠瑕疵进行了研究。结果表明:收获的珍珠样品中95.3%有瑕疵,珍珠的瑕疵主要有尾巴、凸起、黑斑、全污;污斑、尾巴、凸起和全污等各种瑕疵出现频率分别为53.9%、25.2%、19.1%和1.8%,其中,污斑出现频率最大,全污出现频率最小;尾巴只出现在A区和B区,C区、D区、E区和F区没有尾巴出现,在B区出现尾巴的频率大于A区,分别为66.8%和34.6%,其中1.4%同时在A区和B区出现尾巴;凸起和污斑可出现在A区、B区、C区、D区、E区和F区,其中A区出现凸起和污斑的频率最大,E区则很少出现凸起和污斑。     

马氏珠母贝黏液糖蛋白分离纯化及其抗氧化活性研究

该研究采用直接醇沉法、盐提醇沉法和水提醇沉法提取马氏珠母贝(Pinctada martensii)黏液中的糖蛋白,优选直接醇沉法粗品(DAS),进一步采用Sephacryl S-200纯化获得直接醇沉纯化品(DAPS),同时测定DAS及DAPS的体外抗氧化活性。结果显示,DAS的糖和蛋白质得率均最高,且3种方法提取的糖蛋白粗品蛋白质组成无明显差异;DAPS的总糖和蛋白质质量分数分别为(22.72±0.26)%和(71.18±0.62)%,分子量主要集中在245kD;DAS和DAPS对羟自由基的清除能力显著,在0.8 mg·mL-1下两者对羟自由基的清除率均高于90%,对超氧阴离子自由基及DPPH自由基也有一定清除能力。研究结果可为探索马氏珠母贝黏液功效组分提供理论基础数据。     

马氏珠母贝TNFR27基因克隆与功能初探

肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)是一类重要的细胞因子受体,主要参与细胞凋亡、宿主免疫防御、炎症等生物过程。本研究采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了马氏珠母贝TNFR27(PmTNFR27)的cDNA全长并进行生物信息学分析,运用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测了PmTNFR27 mRNA在马氏珠母贝不同组织、脂多糖(LPS)、聚肌胞苷酸(Poly(I:C))及镉胁迫后的表达模式。结果显示：PmTNFR27 cDNA全长为1 524 bp,5′UTR长为186 bp,3′UTR长为248 bp,包含28 bp的poly(A)尾巴,开放阅读框(ORF)为1 062 bp,编码353个氨基酸;结构域预测表明PmTNFR27具有一个典型的CRD结构域和一个跨膜蛋白结构域,符合肿瘤坏死因子受体超家族特征;多序列比对结果表明贝类种间的相似性不高,但功能结构域位置较保守。系统进化树结果显示马氏珠母贝与其他贝类聚为一簇。qPCR结果显示,PmTNFR27 mRNA在马氏珠母贝各组织中均有表达,在鳃中表达量最高。LPS刺激后,PmTNFR27基因在鰓中的表达量于3 h达到最高,于72 h降到最低;Poly(I:C)刺激后,PmTNFR27基因在鰓中的表达量在6 h、12 h显著上升并达到最高至96 h时降到最低。镉胁迫后,3 h表达量达到最高,24 h、48 h表达量显著下降。研究结果显示PmTNFR27可能参与了马氏珠母贝的免疫应答反应。     

马氏珠母贝分段育珠试验

于2009年进行了马氏珠母贝分段育珠试验.在河口内湾进行插核母贝的术前处理和后期育珠管养,在池塘进行术后休养和前期育珠管理,以避开台风和河口内湾的淡水期.试验结果表明:手术后休养期珠母贝的成活率平均为87.4%,留核率达78.2%;育珠期珠母贝的成活率平均为73.6%,收获时成珠率为29.5%,插核万贝收珠1.96 kg.与传统育珠模式相比,育珠贝的成活率、成珠率及珍珠质量都有明显提高.