一株海洋放线菌的分类鉴定及抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到1株产广谱、高活性抗菌物质的放线菌GB-2.该菌对藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等5种革兰氏阳性菌,大肠杆菌、荧光假单胞菌等4种革兰氏阴性菌及扩展青霉、黄曲霉、点青霉、犁头霉、番茄灰霉、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌等18种真菌有显著拮抗作用.根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,确定其为弗氏链霉菌变种.菌株GB-2所产抗菌物质的稳定性研究表明,该物质在121 ℃ pH 1和pH 12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射不影响其抗菌活性.结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值.     

一株海洋放线菌的分类鉴定及抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到1株产广谱、高活性抗菌物质的放线菌GB-2.该菌对藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等5种革兰氏阳性菌,大肠杆菌、荧光假单胞菌等4种革兰氏阴性菌及扩展青霉、黄曲霉、点青霉、犁头霉、番茄灰霉、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌等18种真菌有显著拮抗作用.根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,确定其为弗氏链霉菌变种.菌株GB-2所产抗菌物质的稳定性研究表明,该物质在121 ℃ pH 1和pH 12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射不影响其抗菌活性.结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值.     

9株土壤放线菌分离鉴定及抗菌活性

初步研究了贵州习水国家级自然保护区土样放线菌。用改良HV培养基分离放线菌,对9株放线菌进行了形态学、生理生化和分子鉴定,系统发育分析和抗菌活性检测。结果显示:1株为小单孢菌属(Micromonospora),相似性97%;8株为链霉菌属(Streptomyces),相似性96%~99%。抗菌活性检测发现,链霉菌C2对3株供试细菌有抑菌作用,抑菌圈直径8.5~12 mm;链霉菌C12对5株供试细菌具有抑菌效果,抑菌圈直径17~20 mm。研究结果表明,小单孢菌为稀有放线菌,链霉菌为优势放线菌;C2和C12相比,C2抑菌作用弱,C12抑菌作用强,C12抑菌谱更广,效果更好。     

一株具有抗菌活性红树林土壤放线菌的分离和鉴定

分离和鉴定具有抗菌活性的红树林土壤放线菌。基于形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析,研究通过稀释分离法从广西北海红树林的高盐泥样中分离到1株细菌。系统进化分析表明,分离菌株与链霉菌属Aurantiogriseus AY999773具有99%的同源性,因此,BH0951初步被鉴定为链霉菌属Aurantiogriseus AY999773的变种。说明放线菌BH0951具有抗菌活性,本研究能为本菌株乃至广西北海红树林的微生物资源的开发和利用提供初步数据。     

一株抗菌活性物质产生细菌的分离及鉴定

从根际土壤分离到一株细菌CY04,通过电镜观察和16S r DNA序列分析,发现该菌株同已知菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的相似度最高,为99%,初步认定为枯草芽孢杆菌。抑菌试验结果表明,该菌株对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有一定的抑菌活性,对大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌没有抑菌活性。培养48 h左右是其产生抗菌活性物质的最佳时期。     

一株具有抗菌活性的水浮莲内生放线菌的鉴定

[目的]从水浮莲(Pistia stratiotes L.)中分离获得对动植物病原菌具有拮抗活性的内生菌,对其进行系统鉴定及特性分析.[方法]采用纸片法进行拮抗实验,并对其形态特征、培养特征、生理生化特征进行检测分析, 16SrDNA序列的PCR扩增.[结果]筛选得到1株具有拮抗特性的放线菌XJPL-LA-67,该菌株的上述几个特征与链霉菌Streptomyces griseorubens的高度一致,与此同时,依据其16SrDNA序列分析,XJPL-LA-67序列的同源性与Streptomyces griseorubens高达99;.[结论]将水浮莲内生放线菌XJPL-LA-67确定为链霉菌Streptomyces griseorubens.     

一株放线菌次生代谢产物抗菌活性的初步研究

研究了从秦岭山区中筛选得到的一株放线菌(编号为No.24),对其产生的次生代谢产物的抑菌活性进行了测定。生测结果表明,离体条件下,发酵液对农业常见的病原真菌均有较强的抑制作用,对苹果轮纹病菌和小麦根腐病菌的菌丝生长抑制作用最强,其EC50分别是146.87 mg.L-1和164.09 mg.L-1;对玉米大斑病菌和马铃薯干腐病菌孢子萌发的抑制作用较强,其EC50分别为129.33 mg.L-1和184.99 mg.L-1。盆栽试验在浓度为6 000 mg.L-1时对小麦白粉病的保护和治疗作用分别为76.1%和70.7%,对番茄灰霉病的保护和治疗作用分别为66.9%和61.1%。田间药效试验结果表明,No.24菌株发酵液可以有效控制番茄灰霉病和小麦白粉病的进一步蔓延。     

放线菌活性物质的挖掘与分离技术研究进展

放线菌是一类广泛分布且备受人类关注的微生物资源,其能产生多种多样的结构新颖、具有生物活性的次级代谢产物,是多种天然产物的重要来源,具有极大的研究和开发价值。本文阐述了以生物活性为导向进行筛选挖掘、基因组挖掘、转录组挖掘等放线菌天然活性物质的挖掘手段,并结合近年研究成果分别论证各方法的优势及适用条件,为合理选择挖掘手段提供参考;概述了溶媒萃取法、离子交换层析法、薄层层析法等天然活性物质分离方法及其优缺点。文中重点综述伴随着基因组学和现代分子生物学的迅速发展而兴起的包括生物信息学分析、同源表达、异源表达等利用基因组挖掘活性物质的方法,以期为微生物资源的挖掘与利用提供相应的参考。最后合理分析目前放线菌开发利用中存在的一些问题,并简要提出相应的建议,就将来放线菌的研究方向和发展前景进行了展望。     

抗真菌海洋放线菌的分离筛选与抗菌机制研究

从江苏连云港海域采集海水、海泥、漂浮物、海洋动物样品,分离得到15株海洋放线菌.采用平板对峙培养法和打孔法测定放线菌不同菌株对玉米小斑病菌(Bipolaria maydis)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum)、雪腐镰刀病菌(Fusarium nivale)、斑点落叶病菌(Alternaria alternata)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、细链格孢病菌(Alternaria tenuis)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)等植物病原真菌的抑制作用.结果表明:放线菌菌株BM-2、T-6、T-1-1、D-3、XS-X5-3、M-7、X-7对供试的植物病原真菌具有一定的抑制作用.其中BM-2菌株的抑菌作用最强,其发酵液能明显抑制多种植物病原真菌菌丝的生长,同时对细链格孢菌的分生孢子萌发和芽管伸长都有一定的抑制作用.     

虎杖内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性

采集秦巴山区野生虎杖(Polygonurn cuspidatum),选取以海藻糖、葡萄糖、淀粉等为主要营养和能源的4种培养基,经分离纯化得到47株内生放线菌.经形态学鉴定并结合16S rDNA序列分析,将6株具有较强抑菌活性的菌株初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)2株,小单孢菌属(Micromonospora)2株,链孢囊菌属(Streptosporangium)2株;采用滤纸片法初步研究了内生放线菌发酵液的抑菌活性.结果表明,17株菌株具有不同程度的抗菌活性,占所有分离菌株的36.2%,其中6株具有较明显的抑菌活性,菌株PEA023对所有靶标菌均有较强的抑制作用,菌株PEA023和PEA032对铜绿假单胞菌具有拮抗活性.     

2株具有抗菌活性放线菌的筛选及鉴定

从云南西双版纳采集的土壤样品中分离到2株对油菜菌核病菌、小麦赤枯、苹果轮纹均具有较强抗菌活性的放线菌2-7和9-12。通过对其进行包括形态、细胞壁化学组分分析以及16S rDNA序列测定等多相分类研究,确定其为Streptomyces albulussubsp（小白链霉菌2-7）和Streptomyces albogriseus（白灰链霉菌9-12）。     

一株放线菌的分子鉴定与抗菌谱研究

[目的]对具有抗菌开发前景的放线菌Q13菌株进行分子鉴定和抗菌谱测定,为其进一步开发和利用提供理论依据。[方法]以Q13基因组为模板,分别利用大肠杆菌和链霉菌属16S rRNA基因特异引物,扩增其16S rRNA基因序列并测序,利用Blast、MEGA等软件进行序列与系统发育树分析,鉴定其分类地位;进一步利用平板对峙试验,测定Q13菌株对玉米小斑病菌等14种植物病原真菌、胡桃肉状菌等2种食用菌病原真菌和双孢蘑菇等10种食用菌的抑菌活性。[结果]获得3条16S rRNA基因序列,GenBank登录号分别为JN593095、JN593096和JN5930957;根据序列分析的结果,确定Q13菌株为Streptomyces flavotricini;Q13菌株对小麦赤霉病菌、稻瘟菌、油菜菌核和绿色木霉具有显著抗性,而对双孢蘑菇、蛹虫草、灰树花、香菇、姬菇和平菇等食用菌菌丝生长无抑制作用。[结论]为开发植物和食用菌病害生防菌提供了理论和试验支持。     

一株产抗霉菌活性物质的海洋细菌鉴定

[目的]为了研究柄海鞘体内的微生物能否产生具有抗菌功能的活性物质。[方法]从烟台海域的柄海鞘中筛选到一株细菌,命名为N2。采用透明圈法进行抑菌试验,同时进行菌落形态、常规生理生化研究和细菌鉴定系统测试。为了进一步确定菌株N2的分类学地位,测定其16S rRNA基因序列,与相关细菌种属相应序列的同源性进行比较,并构建系统发育树。[结果]菌株N2具有抑制霉菌生长的特性;菌株N2属于革兰氏阳性菌,杆状,具有鞭毛,菌落呈乳白色,菌株N2与Bacillus属细菌的特征相似;菌株N2与枯草芽孢杆菌的亲缘关系最近,相似性达99%。[结论]菌株N2可鉴定为枯草芽孢杆菌,可以将其作为潜在的海洋有益菌应用于抗肿瘤和植物病害的防治。     

2株三尖杉内生放线菌的分离鉴定与活性研究

从三尖杉根部分离得到2株内生放线菌ECA023、ECA045,通过培养观察与16SrDNA序列分析,初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)和小单孢菌属(Micromonospora)放线菌.采用滤纸片法和MTT法研究了菌株发酵液的抑菌和抗肿瘤活性,结果表明:2株内生放线菌对4种病原菌和K562肿瘤细胞株均显示出较强的抑制活性,其中ECA023对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)表现出较强的拮抗作用,ECA045对K562细胞的平均抑制率达56.83％.     

湛江湖光岩土壤放线菌分离与抗菌活性测定

采用6种不同的方法对湛江湖光岩地质公园的土壤进行预处理,用释稀涂布方法进行放线菌的分离．并对获得的放线菌进行形态、生理生化常规鉴定与抗菌活性测定。试验结果表明。新鲜土壤经28～30℃风干10d的预处理,能够有效地抑制细菌和真菌的生长．且有利于放线菌的分离。该法共获得23株菌落形态疑似不同的放线菌,经常规鉴定,4株菌株初步确定为诺卡氏菌属．2株菌株为小单孢菌属．17株菌株为链霉菌属。另外．有9株菌株具有抑制大肠埃氏菌活性;8株具有抑制金黄色葡萄球菌活性．获得3株菌株同时具有抑制大肠埃氏菌与抑制金黄色葡萄球菌活性。     

核桃内生放线菌的分离、鉴定及抗菌活性

分别从生长于云南楚雄的核桃根、茎、叶中分离内生放线菌,并对分离菌株进行纯化、保存。通过对分离菌株生长特性、形态观察、分子分类等研究,对菌株进行初步鉴定与抗菌活性研究。结果表明,共分离得到42株内生放线菌,其中从根中分离11株、从茎中分离12株、从叶中分离19株,分离菌株均属于链霉菌属。试验内生放线菌菌株SA8对拟盘多毛孢、链格孢、德氏孺孢、灰葡萄孢、疫霉这5种病原菌均有抑菌作用。     

西岛内港沉积物放线菌的分离及其抗菌活性研究

从西岛内港采集沉积物,采用自然风干后,湿热60℃、处理10 min的预处理方法,稀释涂布于GA培养基上,成功地分离得到44株海洋源的放线菌。经初步形态显微观察判断,其中18株为链霉菌,26株为非链霉菌,链霉菌中以小单孢菌为主。18株链霉菌抗香蕉枯萎病测试结果显示,菌株090314表现出一定的抗香蕉枯萎病菌(4号生理小种,FOC 4)活性。     

2株红树林淤泥放线菌的鉴定及抗菌活性研究

【目的】对分离自广西北海红树林海洋淤泥中的2株放线菌(BH200951、BH200954)进行鉴定,并对其抗菌活性进行分析。【方法】对BH200951与BH200954 2株典型放线菌的形态特征及生理生化特征进行了观测,并采用医学药敏试验方法对其抗菌活性进行了测定,最后提取2株菌株的总DNA,用放线菌通用引物对其16 SrDNA进行PCR扩增,对获得的扩增结果进行DNA序列测定,采用邻接法构建其与其他典型菌株的系统发育树。【结果】在高氏1号培养基上,BH200951和BH200954菌株生长良好,菌落分别呈灰白色和黄色,菌落皱褶,致密坚实;在光学显微镜下观察发现,2株菌株气生菌丝发达,呈深灰色,成熟后生成孢子丝;能使明胶液化,淀粉、纤维素水解,牛奶凝固而不胨化;对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、普通变形杆菌均有较好的抑制作用。经测序后比对显示,2株放线菌菌株均属于链霉菌属,其中BH200951鉴定为链霉菌属(Streptomyces aurantiogriseus)AY999773的变种;BH200954初步鉴定为链霉菌属的仙台链霉菌。【结论】对分离自广西北海红树林海洋淤泥放线菌BH200951和BH200954菌株进行了鉴定,其发酵产物具有明显的抗菌活性。     

一株对大豆疫霉具有抑制活性放线菌的分离与分子鉴定

大豆疫霉(Phytophthora sojae)可引起大豆疫霉根腐病,是一种分布广泛、危害较为严重的世界性土壤传播病害。为获得对大豆疫霉根腐病具有良好抑制效果的放线菌资源,采用高氏培养基从采集自内蒙古多伦县的土壤中分离对大豆疫霉具有抑制活性放线菌并进行分子鉴定。结果表明:分离到一株对大豆疫霉具有较强抑制作用的放线菌,编号为放线菌1-17,平板对峙的抑菌直径在17.81mm以上。另外该菌对尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌也具有抑制作用,抑菌直径均在10mm以上。放线菌1-17的16SrDNA序列比对结果显示其与Streptomyces humidus NBRC 12877(T)相似性达99.85%,表明其为链霉菌属菌Streptomyces humidus sp.。     

一株具抗菌活性的红树植物内生真菌的分离与鉴定

从4种红树植物的根、茎、叶中共分离出103株内生真菌,从中筛选出1株抗菌活性较强、且具有广谱抗菌的菌株B3.8,经鉴定B3.8是丛梗孢目Moniliaceae、暗梗孢科Dematiaceae、拟黑根霉属ThielaviopsisWent中的一种。其抗菌谱表明,它对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及部分真菌具较强抗性。