不同能量摄入水平对围产期奶牛肝载脂蛋白E mRNA丰度的影响

将年龄、胎次相同，年产奶量大于5000kg的围产期健康奶牛30头随机分为3组，每组10头。低能组饲喂中国奶牛饲养标准（2000）减少20％日粮（能量摄入80％组）、对照组饲喂中国奶牛饲养标准（2000）日粮（能量摄入100％组）和高能组饲喂中国奶牛饲养标准（2000）增加20％日粮（能量摄入120％组），试验从产前28d开始至产后56d结束，产后各组奶牛均饲喂标准日粮。采用内对照RT-PCR方法检测了不同能量摄入围产期奶牛肝组织载脂蛋白E（apolipoprotein E，apoE）mRNA丰度。结果表明：apoE mRNA相对表达量从产前28d至产后56d各组均呈现先升高后降低的趋势，各组apoE mRNA水平均在产后一天达到最大值（P〈0．01），且产后均高于产前（产后56d除外）；产前14d至产后28d低能组apoE mRNA相对表达量均高于其他两组（P〈0．05或P〈0．01），高能组在产后28d和56d高于对照组（P〈0．01）。可见，围产期奶牛能量摄入水平对肝组织载脂蛋白E mRNA丰度有显著影响。     

不同能量摄入水平对围产期奶牛肝MTP mRNA丰度的影响

将年龄、胎次相同，年产奶量大于7000kg的围产期荷斯坦奶牛30头随机分为3组，每组10头，低能量组（Ⅰ组）按中国奶牛营养标准2000年版减少20％日粮（能量摄入80％），高能量组（Ⅱ组）则按此标准增加20％日粮（能量摄入120％），对照组（Ⅲ组）按标准日粮（能量摄入100％）饲喂，试验从产前28d到产后56d结束，分娩后各组均按标准配制相同的泌乳日粮。分别于产前28、14d及产后1、14、28、56d采取肝活体组织。应用内对照RT—PCR方法检测肝脏组织MTPmRNA丰度。结果显示，各组奶牛肝MTPmRNA丰度均呈现先升高后降低的趋势。产后均高于产前，且产后1～28d差异显著（P〈0．01或P〈0．05），而后回降，至56d趋于平稳（P〉0．05）；Ⅲ组肝MTP mRNA丰度在产后1d达到峰值，而Ⅰ组和Ⅱ组在产后14d达到最大值（P〈0．01）；Ⅱ组产后1～28d显著高于I组。产后14d显著高于Ⅲ组（P〈0．01）；Ⅲ组产后1d和28d显著高于Ⅰ组（P〈0．01或P〈0．05）。这些结果表明，围产期奶牛能量摄入水平对肝MTP mRNA丰度有显著影响。     

竞争定量RT-PCR检测不同能量摄入对围产期奶牛肝PCmRNA丰度的影响

建立了奶牛肝PCmRNA丰度的竞争定量RT-PCR检测方法,优化的PCR反应条件(25μL)为:60℃退火、30个循环数、1:1的PC cDNA与PC DNA竞争模板浓度比。同时应用该方法检测不同能量摄入对围产期奶牛肝PCmRNA丰度的影响,结果表明:低能量日粮饲喂干奶期奶牛,肝脏PC mRNA丰度升高,而干奶期高能饲喂奶牛,肝脏PC mRNA丰度降低。说明干奶期低能饲喂奶牛,可以增强围产期奶牛的肝糖异生能力。     

摄入不同能量的围产期乳牛肝低密度脂蛋白受体mRNA丰度的比较

将30头健康、经产、处于围产期的黑白花乳牛随机分为3组，每组10头。从产前28d开始，低能量组乳牛饲喂《中国奶牛饲养标准（2000）》减少20％日粮（能量摄入80％），对照组乳牛饲喂《标准》日粮（能量摄入100％），高能量组乳牛饲喂《标准》增加20％日粮（能量摄入120％），产后各组乳牛均饲喂标准日粮。至产后第56d结束试验；采用内对照RT-PCR方法检测摄入不同能量的围产期乳牛肝活体组织低密度脂蛋白受体（LDLR）mRNA丰度。结果，不同能量组乳牛肝LDLR mRNA丰度产前至产后均呈现先升高后降低的趋势。100％和120％能量组肝LDLR mRNA丰度在产后14d达最大值，且产后均高于产前（产后56d除外，P〈0．01或P〈0．05）；而80％能量组产后1d即达到最大值，产前14d至产后14d，LDLR mRNA相对表达量显著高于100％和120％能量组；产后28～56d，120％能量组显著高于80％和100％能量组（P〈0．01）。表明围产期乳牛能量摄入水平对肝LDLR mRNA丰度有显著影响。     

不同能量摄入对围产期奶牛脂肪组织胰岛素受体mRNA丰度的影响

将年龄、胎次相同,年产奶量大于5000kg的围产期健康奶牛30头随机分为3组,每组10头。按照中国奶牛饲养标准(2000),低能组饲喂减少20%日粮(能量摄入80%组),对照组饲喂标准日粮(能量摄入100%组),高能组饲喂增加20%日粮(能量摄入120%组),试验从产前14天开始至产后28天结束,产后各组奶牛均饲喂标准日粮。采用半定量RTPCR方法检测了不同能量摄入对围产期奶牛脂肪组织胰岛素受体(InsR)mRNA丰度的影响。结果表明:各组脂肪InsRmRNA相对表达量从产前14天至产后28天均呈现先升高后降低的趋势,产后14天达到最大值,且产后高于产前;低能组产前InsRmRNA相对表达量低于高能组和正常组,产后1天至产后28天高于高能组和正常组,产后14天显著高于高能组(P<0.01)。可见,干乳期低能饲喂奶牛,产后脂肪InsRmRNA表达增加,提示产前适当降低能量摄入水平,有利于胰岛素抑制泌乳初期脂肪动员作用的发挥。     

应用半定量RT-PCR方法测定围产期奶牛肝PEPCK-C mRNA的丰度

建立了奶牛肝PEPCK-CmRNA丰度的半定量RT-PCR检测方法，其优化的PCR反应条件（25pL）为：57C退火、2．4mmol／L Mg^2＋、26～28个循环数、cDNA不小于2．6mg／L、2：1的PEPCK-C／β-actin引物比。同时，应用该方法检测了围产期奶牛肝中PEPCK-CmRNA丰度，结果显示：产前低血糖奶牛肝PEPCK-C mRNA丰度显著低于对照组，但是产后却高于对照组。围产期奶牛血糖水平与肝PEPCK-C mRNA丰度之间的相关系数，对照组为0．68（P=0．14），低血糖组为0．82（P=0．047）。因此，围产期奶牛肝PEPCK-CmRNA丰度对奶牛血糖浓度具有调节作用，低血糖奶牛表现得更为明显。     

干奶期不同能量摄入对围产期奶牛糖异生的影响

将围产期健康奶牛30头随机分为三组,分别于产前第28d开始饲喂标准日粮(能量摄入100%组)、标准日粮增加20%日粮(能量摄入120%组)和标准日粮减少20%日粮(能量摄入80%组),产后各组奶牛均饲喂标准泌乳日粮,至产后第56d结束,观察干奶期不同能量摄入水平对围产期健康奶牛糖异生的影响。结果表明,产前低能饲喂可以增加围产期奶牛血浆葡萄糖(GLU)浓度,肝脏丙酮酸羧化酶(PC)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)基因表达升高。说明干奶期低能饲喂奶牛,可以增强围产期奶牛的肝糖异生能力。     

干奶期不同能量摄入水平对奶牛产后能量负平衡的影响

选择围产期健康奶牛30头,随机分为三组,产前第28d开始,饲喂不同能量日粮,即对照组(C组)、高能量组(H组)和低能量组(L组);产后各组奶牛均饲喂标准泌乳日粮,至产后56d结束。研究干奶期不同能量摄入水平对产后奶牛能量负平衡的影响。结果表明:低能量组奶牛产后干物质摄入量显著高于其它两组、体重消耗较低,能量负平衡状态缓解。     

干奶期奶牛不同能量摄入对其肝脏胰岛素受体mRNA表达的影响

将健康围产期奶牛30头随机分为3组,预产前28 d分别饲喂奶牛标准日粮（能量摄入100%组）、标准日粮增加20%日粮（能量摄入120%组）和标准日粮减少20%日粮（能量摄入80%组）,产后各组奶牛均饲喂标准的产奶日粮,至产后56d结束,采用半定量RT-PCR方法,观测干奶期不同能量摄入水平对围产期健康奶牛肝脏胰岛素受体（IR）基因表达的影响.试验结果表明,干奶期低能饲喂奶牛,产后肝脏IR mRNA表达增加,提示低能饲喂有利于调节奶牛产后血糖平衡.     

干奶期不同能量摄入水平对产后奶牛生产性能的影响

将围产期健康奶牛30头随机分为3组．分别于产前28d开始饲喂NRC标准日粮（能量摄入100％组）、NRC标准增加20％日粮（能量摄入120％组）和NRC标准减少20％日粮（能量摄入80％组）．产后各组奶牛均饲喂标准日粮，至产后56d结束，观察干奶期不同能量摄入水平对产后奶牛生产性能的影响。结果表明，高能量组奶牛产后干物质采食量和产奶量均显著低于其他2组，并且体质量消耗明显。由此认为，干奶期能量摄入水平是影响和调节产后干物质摄入量、产乳量和能量平衡状态的重要因素。     

Effect of Natural Antioxidants on Superoxide Dismutase and Glutathione Peroxidase mRNA Expression in Leukocytes from Periparturient Dairy Cows

During the peripartum period, high-yielding dairy cows experience metabolic stress, which alters their homeostasis and exposes the cows to illness. The aim of this study was to quantify the expression levels of genes involved in antioxidant defences during the transition period in the blood of dairy cows and to evaluate the regulative activity on these genes of natural antioxidants in the diet. Three groups of 7 heifers each, at the 7th month of pregnancy, were used. Starting from 3 weeks before the expected calving date (–22 days), the three groups were allotted to the following experimental treatments: control (CTR, basal diet); lycopene (LYC, basal diet + lycopene 540 mg/day) and grape polyphenols (POL, basal diet + grape polyphenols 10 g/day). Blood was sampled at 22 and 8 days before and 8, 15 and 22 after calving and analysed for the expression level of glutathione peroxidase (GPx) and superoxide dismutase (Cu/ZnSOD) using the real-time PCR technique with LUX (Light Upon eXtension) fluorogenic primers. During the peripartum period (–22 days until + 22 days from calving), Cu/ ZnSOD mRNA expression decreased (p<0.05) in the CTR and LYC groups, but increased at 15 days after calving in the POL group. No significant differences were found in GPx mRNA expression. The results suggest that grape polyphenols may have a controlling effect on peripartum metabolic stress through modulation of superoxide dismutase expression.     

日粮碳水化合物与脂肪对奶牛采食量和能量分配影响的研究进展

近年来,能量饲料种类逐渐增多,奶牛日粮配方的能源物质随之增多。研究证明,同一能量水平不同能源构成的日粮会使能量在体组织沉积和泌乳之间的分配出现很大差异。生糖营养素(Glucogenic)和生脂营养素(Lipogenic)作为泌乳奶牛主要的供能物质,在能量的分配中分别扮演不同角色。本文对饲粮淀粉、纤维和脂肪相关的研究结果进行了归纳和梳理,为今后的科学研究和生产实践提供参考依据。     

能量平衡对围产期奶牛泌乳和干物质摄入量及机体代谢的影响

为了阐明不同能量平衡状况的围产期奶牛泌乳量、干物质摄入的变化及其机体代谢调节作用。在某一集约化牛场选取胎次、年龄相近的奶牛,分为高血糖组(H)和低血糖组(L),每组各15头。在产前21、14、7d和分娩当天,产后7、14、21d,分别记录奶牛围产期干物质摄入量(DMI)、泌乳量(MY),并测定血浆血糖(Glu)、游离脂肪酸(NEFA)、β-羟丁酸(BHBA)、胰岛素(Ins)、胰高血糖素(Gn)、瘦蛋白(Lp)、皮质醇(Cor)的浓度。结果显示,试验奶牛产后泌乳量和干物质摄入量均增加,但是产后能量负平衡发生率高于产前,产后21d达最高;两组产后血浆Glu水平均降低,血浆NEFA和BHBA升高,L组血浆NEFA和BH-BA水平高于H组(P0.05);H组血浆Ins与Lp水平高于L组(P0.05),血浆Gn与Cor水平低于L组(P0.05)。围产期不同能量平衡状态的奶牛机体能量代谢发生了各自适应性的变化。血浆低水平Ins、Lp和高水平Cor在缓解能量负平衡方面发挥了重要作用。     

奶牛载脂蛋白B100基因克隆及原核表达

本研究根据GenBank已收录奶牛ApoB100基因序列,设计特异性引物获得目的基因。经pGM-T载体克隆,对重组质粒进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定并测序,序列同源性达100%;将目的基因连接到pET-28a表达载体中,提取质粒,转化到Rosetta(DE3)中,筛选的阳性克隆经IPTG诱导。SDS-PAGE初步分析表明,成功获得分子质量为35 ku的蛋白质;Western blotting结果呈阳性,表明通过本试验成功获得了目的蛋白。     

干奶期奶牛的乳腺更新

干奶期是奶牛整个生产泌乳周期中必不可少的修复过程,此间的乳腺更新有利于保持乳腺上皮细胞增殖和凋亡之间的动态平衡,而乳腺分泌细胞的数目和活性决定了产奶量与泌乳曲线形状,因此干奶期乳腺修复正常与否直接关系到此后泌乳性能:而且乳腺更新是一个受多因素调节的复杂的生理过程,目前为止关于乳腺退化期乳腺更新的调节机理还存在广泛的研究空间.     

Effects of Feed in the Dry Period on Fertility of Dairy Cows Post Partum

It has been hypothesized that the decrease in fertility of dairy cows is related to the increase in milk yield and associated with fatty liver and increased vulnerability for both infection and metabolic diseases. To elucidate the mechanisms behind this complex of health and reproductive problems an Animal Model, based on overfeeding in the dry period, has been developed. In an experiment carried out in 1996 sixteen animals were fed 119 MJ/d net energy to lactation (NEL) (experimental group) and another sixteen just 49 MJ/d NEL (control group) in the last 8 weeks before parturition. During lactation the cows from both groups were given the lactation ration ad libitum. After parturition both groups differed significantly in level and duration of the NEB, in weight loss, increased concentrations of NEFAs and bHBB in the blood and TAG in the liver. Although the insulin level was lower in the experimental animals during the first week, the difference was not significant. The number of ovulations within the first 100 days pp was significant lower in the experimental group and was related to depth and duration of the NEB and the weight loss: more NEB leads to less ovulations. The interval partus-le ovulation was also significant different but related to the TAG level in the liver: more TAG leads to a longer interval. The experimental group with the fatty liver suffered more incidenses of metabolic diseases. It has been concluded that the Model leads to a severe NEB, to Fatty Liver and to more incidences of diseases. Both the NEB and the fatty liver influence the fertility of the cows pp and it can not be excluded that some diseases have an effect too. More studies are planned to unravel the factors that affect the fertility of high yielding cows.