中国商陆抗病毒蛋白基因的克隆及其转化辣椒

根据美洲商陆抗病毒蛋白基因序列设计引物,从中国商陆（Phytolacca acinosa）叶片基因组DNA扩增克隆缺失无毒型中国商陆抗病毒蛋白基因（PacPAP1）,构建该基因植物表达载体,采用农杆菌介导的叶盘法转化辣椒,对转基因植株进行分子检测,TMV及CMV人工接种鉴定,25d后统计发病情况。结果表明：克隆得到缺失无毒型PAP基因PacPAP1,大小为714bp,与美洲商陆抗病毒蛋白基因（Pam-PAP）的同源性为99.7%;得到了PacPAP1整合入辣椒基因组中的阳性植株;接种TMV、CMV的阴性对照植株都明显发病,转PacPAP1植株未出现症状,说明转基因辣椒植株可获得抗TMV和CMV材料。     

Cry2Aa2 和PamPAP 双价表达载体的构建及其对辣椒的遗传转化

 为了获得既抗虫又抗病毒病，又对人体和环境安全的转基因辣椒（Capsicum annuum L．）材料，将启动子CaMV35S、终止子Nos-ter 及缺失无毒型商陆抗病毒蛋白基因PamPAP 一起插入到植物表达载体pCAMBIA1301-Cry2Aa2-PMI 的多克隆位点上，构建双价表达载体，采用农杆菌介导法将其转入辣椒中，并用PMI/甘露糖筛选体系对转化植株筛选。经PCR 扩增和Southern 杂交检测，结果表明Cry2Aa2和PamPAP 已经整合到辣椒基因组中。进一步经RT-PCR 分析，证实Cry2Aa2 和PamPAP 在T₀ 代转基因辣椒植株中共表达。经抗虫性、抗病毒病表型鉴定：T₀ 代转基因辣椒植株对黄瓜花叶病毒（CMV）和斜纹夜蛾幼虫的抗性均显著高于非转基因植株。     

利用基因工程进行番茄品种特性改良的研究现状

番茄作为一种蔬菜作物,在基因工程拓宽种质资源上得到了极大的发展。迄今为止,利用基因工程进行番茄品种特性改良的研究取得了很大的进展,已经获得形式多样的转基因番茄。本文概述了利用基因工程进行番茄品种特性改良的研究现状。 1.转基因抗病毒番茄的研究 Powell和Nelson将TMV外壳蛋白基因转入番茄,获得能稳定遗传的抗病毒植株。SanderTMV-CP基因和T0MV-CP基因分别导入番茄,获得高抗TMV植株。Whitham等将烟草抗TMV的N基因转入番茄。产生抗性反应,表明与N基因抗性表达有关的因子均存在于番茄中。赵淑珍利用CMV卫星RNA-1…     

辣椒苗期抗CMV和TMV鉴定与田间成株抗病性相关分析

通过辣椒品种苗期人工接种不同地区来源的CMV和TMV鉴定病指与江苏地区辣椒成株期田间自然发病病指之间相关性分析表明 ,江苏辣椒病毒病常年以CMV为主 (连续 6年占发病总份数X±S =68.35%± 1 1 .58%。CMV(江苏毒源 )苗期鉴定病指能反映该品种在江苏田间成株期病毒病的抗性水平 (r=0 .8663 ,P <0 .0 1 ) ,该病指为 (X)预测辣椒品种在江苏田间成株病毒病的抗性 ( ^y) ,回归方程为 ^y =1 1 .74 98+0 .981 1X。CMV江苏毒源和CMV吉林条斑毒源存在致病性相似的株系 ,也有一定差异 (r=0 .642 1 ,0 .0 1

相似文献   

辣(甜)椒TMV、CMV及疫病抗性材料的鉴定

通过室内苗期人工接种,对70份甜、辣椒材料进行了TMV、CMV和疫病的抗病性鉴定,其中57份接种TMV、63份接种CMV和51份接种疫病,结果表明:抗TMV的材料40份,抗CMV的材料45份,抗疫病的材料14份;双抗材料20份;三抗材料11份.同年春季种植,调查农艺性状,获得抗性好且农艺性状优良的材料5份.     

与辣椒抗CMV扭关的数量性状位点（QTL）的鉴定

在辣椒（Capsicum annuum）种内进行抗CMVQTL分析。从感病品种Maor与抗病品种Perennial杂交获得180个F3。在美国和以色列的三个试验中用两个病毒株系接种。大部分RFLP和AFLP标记被用作构建遗传图谱,区间分析被用作QTL检测。有4个QTL与抗CMV显著相关。检测到了两个标记对CMV抗性的双基因互作,没有检测到单基因效用。3个试验中检测到控制表现型变异（cmv11．1）的QTL,其变异最大百分比为16％～33％,该QTL与双基因互作有关。这个QTL与L位点连锁,并证实该QTL与抗TMV有关。在Perennial上早期非常有趣的观察到抗CMV感TMV的现象。来自于不相关的种群的一个高世代的回交育种株系3990,被选择用来分析对CMV的抗性,标记覆盖整个基因组,检测到来自Perennial的基冈渗入。这些基因渗入的区域中包括4个与抗CMV相关的QTL。在两个基因区域的标记被鉴定与抗CMV的QTL相关,同时也与控制果实重量的QTL相关,另外的育种观察也证实对CMV的抗性来源于Perennial和小果型品种。     

与辣椒抗CMV相关的数量性状位点(QTL)的鉴定

在辣椒(Capsicum annuum)种内进行抗CMV QTL分析.从感病品种Maor与抗病品种Perennial杂交获得180个F3.在美国和以色列的三个试验中用两个病毒株系接种.大部分RFLP和AFIP标记被用作构建遗传图谱,区间分析被用作QTL检测.有4个QTL与抗CMV显著相关.检测到了两个标记对CMV抗性的双基因互作,没有检测到单基因效用.3个试验中检测到控制表现型变异(cmy11.1)的QTL,其变异最大百分比为16%～33%,该QTL与双基因互作有关.这个QTL与L位点连锁,并证实该QTL与抗TMV有关.在Perennial上早期非常有趣的观察到抗CMV感TMV的现象.来自于不相关的种群的一个高世代的回交育种株系3990,被选择用来分析对CMV的抗性,标记覆盖整个基因组,检测到来自Perennial的基因渗人.这些基因渗入的区域中包括4个与抗CMV相关的QTL.在两个基因区域的标记被鉴定与抗CMV的QTL相关.同时也与控制果实重量的QTL相关,另外的育种观察也证实对CMV的抗性来源于Perennial和小果型品种.     

人工接种CMV后辣椒植株中病毒含量的时序变化及症状表型

以5份不同类型的辣(甜)椒为供试材料,人工接种CMV重花叶型株系,通过DAS-ELISA方法,分别检测接种5、10、15、20、25、30d后辣椒植株中CMV含量的时序变化,同时对供试材料进行人工接种抗性鉴定,并对2种方法得到的数据进行相关性分析。结果显示:不同类型供试材料接种5~15d后的病毒含量逐渐增加,并于15d时达到最高水平,之后略有回落;通过DAS-ELISA检测得到的植株病毒含量与人工接种抗性鉴定得到的病情指数呈正相关,说明2种鉴定方法获得的结果一致。     

辣椒CMV广州分离物的鉴定及辣椒材料抗病性筛选

应用RT-PCR方法从黄瓜花叶病毒广州分离物CMV-GZ中扩增出外壳蛋白基因,并进行测序分析,证明该分离物归属于黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ。对45份辣（甜）椒材料进行室内苗期人工接种抗CMV鉴定,结果表明,4份辣椒材料对CMV表现为抗病,21份辣椒材料表现为中抗。结合农艺性状调查结果,筛选出5份抗CMV且农艺性状优良的辣椒材料。     

转多基因抗病番茄及试种示范

国家生物工程中心利用现代生物技术率先获得了世界首例转多基因高抗烟草花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）、马铃薯X病毒（PXV）和抗斑枯病、晚疫病二种真菌的番茄植株,培育出了DRD8012、DRD8013、DRD8018早、中、晚熟多抗番茄新品种。通过在病毒易发区多由试种示范表明,该多抗番茄不但抗病毒抗真菌效果突出,而且高产优质,适应性广。有关部门的专家们认为“这是我国番茄育种史上的重大新突破”。目前通过了国家级技术鉴定。 一、工程番茄的抗病性 TMV、CMV、PXV和致使番茄患斑枯病、晚疾病的二种真菌是番茄栽培的大害。其中CMV病毒为害尤烈,被称为“植物癌症”,对800多种农作物都有极大危害。农药等常规防治手段对它根本不起作用,人类目前也尚未找到一株能天然带有抗病毒特性的植株。国际上许多研究机构都在着力采用“转基因技术”以期获得生产上的多种品种。     

辣椒抗病毒病种质资源创新研究初报

在确认了重庆市辣椒病毒病侵染的主要毒原为TMV和CMV，株系分别为TMV-PM、CMV-POM、CMV-PmM的基础上，对我所保存的280份辣椒种质资源进行田问及室内病毒病抗性鉴定，获得3份抗TMV或抗CMV的材料：65尖、159、270。通过前期配合力测定，对3份抗源分别采用优势育种原理直接利用的方法和采用回交转育创新育种材料的方法，获得了抗TMV和CMV、性状稳定、优良的育种新材料5份；利用抗源65尖直接配组，初选出强优势组合B2005和B2015，利用5份抗源转育新材料作杂优亲本配组，初选出强优势组合6个。     

重庆市辣椒TMV和CMV的鉴定

1997～ 1999年在重庆市郊辣椒产区采集病毒病标样 16 2个 ,采用生物学鉴定、血清学鉴定及稳定性试验进行检测 ,结果表明 ,重庆市辣椒病毒病主要由CMV和TMV复合侵染所致 ,其检出率分别为 79.0 %和 5 4.2 %。TMV单独为害检出率较低 (7.5 % ) ,CMV单独侵染的频率较高 (32 .3 % )     

利用pmi作为筛选基因对辣椒进行Bt基因转化的研究

根据Cry2Aa2的保守基因序列设计引物,从而扩增出完整的Cry2Aa2序列,连接到含有磷酸甘露糖异构酶基因（pmi）的表达载体pCAMBIA1301-PMI上,采用农杆菌介导的方法转化辣椒,利用甘露糖筛选体系对辣椒转化体进行筛选,对转基因植株进行分子生物学检测和抗虫试验,72h后统计抗虫情况。结果表明：获得了含有Cry2Aa2转基因植株;食用转Bt基因辣椒叶片和果实的斜纹夜蛾幼虫的校正死亡率均高于阴性对照,且大多表现出僵化和厌食的状态,对转基因的辣椒伤害较小,说明Bt基因成功导入辣椒中。     

黄河蜜甜瓜CMV CP基因转化及其抗病性鉴定

利用整合有CMVCP基因及NPT-II基因的改建质粒pBim438,以农杆菌为载体,对黄河蜜甜瓜子叶进行转化,以75mg/L卡那霉素筛选转化体,获得了完整的转基因植株。Southern杂交证明转化植株整合了CMVCP基因,Western杂交证明转基因获得了表达。温室CMV攻毒试验及病毒含量测定表明,转基因甜瓜对CMV的侵染表达了较高的抗病性,能够推迟系统症状显症发生,减轻病害发生程度,转基因植株体内病毒含量低于对照。转基因植株抗病性存在差异,筛选出的2个抗性株系中,TM0-1抗性高于TM0-2。     

甘肃省河西地区辣(甜)椒病毒病毒原鉴定

2006～2009年用DAS-ELISA方法对采自甘肃省河西地区辣(甜)椒病毒病病株的27份样本进行了烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草蚀纹病毒(TEV)、辣椒轻微斑驳病毒(PMMoV)、番茄斑萎病毒(TSWV)、马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、苜蓿花叶病毒(AMV)和蚕豆萎蔫病毒(BBWV)共9种病毒的检测,同时采用反转录聚合酶链式反应对其中20份样本进行了前4种病毒的测定。结果表明,DAS-ELISA方法检测出的病毒种类有TMV、CMV、PMMoV、PVY和TEV,其中TMV和CMV是优势毒原种群,检出率分别为44.4%和33.3%;RT-PCR方法检测出TMV、CMV、TEV和PMMoV;未检出TSWV、PVX、AMV和BBWV。     

中晚熟甜椒新品种‘中椒8号’

中椒8号为中晚熟甜椒一代杂种,适于走路地栽培,中抗烟草花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）和疫病,果实商品性好,商品果率高,产量可达60000kg/hm^2。     

陕西关中西部线辣椒病毒病毒源检测

病毒病是陕西关中地区线辣椒的主要病害。关于该地区线辣椒病毒病毒源鉴定已经有过文献报道。但是,随着品种的更新、栽培环境的演化以及病原的分化等,有必要对其毒源进行定期地检测,以便为病毒病的防控提供依据。该研究在陕西省关中西部线辣椒主产区（千阳县、凤翔县、周至县）根据田间宏观症状随机采集当地主栽品种和部分育种优系的叶样,利用ELISA检测蚕豆萎蔫病毒（BBWV）等6种病毒,同时利用检测试纸对黄瓜花叶病毒（CMV）进行现场检测。ELISA结果表明,检测的55份样品均携带1种以上病毒,病毒侵染率高达100％。有2个样品携带所检测的全部6种病毒。在检测的6种病毒中,BBWV,PMMV、CMV、ToMV、TMV和PVY的检出率分别为100％、81．8％、76．4％、43．6％、41．8％和23．6％。CMV试纸检测的18个样品全部携带CMV病毒。