DNA免疫防制鸡传染性支气管炎的探索研究

ＯＲＦ完整的ＩＢＶ类Ｍ４１株Ｓ１基因ｃＤＮＡ插入真核表达质粒ｐＣＩ ＣＭＶ启动子下游我隆位点，构成ｐＣＩＳ１用于１周龄ＳＰＦ雏鸡的ＤＮＡ免疫试验。试验鸡生疏腿部肌肉注射ｐＣＩＳ１ＤＮＡ１００ｇ，２周后加强免疫一次。二次免疫２周后，代感染ＩＢＶ Ｈ５２株。结果，ＩＢＶ人工感染后第４天气管－泄殖腔棉拭子鸡胚病毒分离阳性者，免疫试验组为１／６，而对照组为６／６，鸡胚病毒中和试验显示，二次免疫后临感染前及     

鸡传染性支气管炎及新疫苗的开发

<正> 鸡传染性支气管炎(IB=Arian Infec-tious Bronchitis)是冠状病毒科(Co-ronaviridae)的IB病毒(IBV)感染而引起的呼吸器官传染病。1931年Schalk首先发现于美国,现已蔓延到世界所有养鸡的国家。     

禽传染性支气管炎脂质体、壳聚糖/DNA疫苗免疫效果比较研究

将制备的禽传染性支气管炎脂质体／DNA疫苗和壳聚糖／DNA疫苗，分别以肌肉注射（i．m）和滴鼻、点眼（i．n）两种途径免疫健康雏鸡，以裸DNA疫苗为对照，采用流式细胞仪（FACS）及间接ELISA分别对免疫鸡外周血中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞数及特异性IBV血清抗体IgG的动态变化进行检测，并于免疫后35d进行攻毒，结果显示：（1）CD4^＋T淋巴细胞数，所有试验组在免疫后1～3周左右均高于对照组（P〈0．01或P〈0．05），各试验组间，脂质体／DNA疫苗肌肉注射途径在免疫后10d后高于壳聚糖／DNA疫苗，但仅在第15天差异显著（P〈0．05），而滴鼻、点眼途径则相反；（2）所有试验组CD8^＋T淋巴细胞数仅在免疫后第15天与对照组差异显著（P〈0．05），各试验组间无显著差异；（3）所有组间特异性IBV血清抗体IgG动态变化差异不显著；攻毒后脂质体／DNA疫苗肌肉注射组无鸡只死亡，其他试验组有4％或8％死亡率，均显著低于对照组（12％）。由此可见，脂质体和壳聚糖均为DNA疫苗良好的佐剂或载体，且脂质体／DNA疫苗肌肉注射的免疫效果优于壳聚糖／DNA疫苗。     

鸡传染性支气管炎疫苗的研究进展

随着养禽业的快速发展,传染性支气管炎传统疫苗已经无法抵抗病毒变异株的危害,新的疫苗研究势在必行,新技术在新型疫苗上的运用也正逐步成为研究者关注的热点。     

肾型鸡传染性支气管炎病毒疫苗免疫机制初探：鸡抗肾型鸡传染性支…

采用肾型ＩＢＶ毒株抗原研制成渍佐剂灭活苗接种鸡群，结果表明，血清中抗体形成快，抗体水平较高，维持时间较长且较高的免疫保护力。为此我们进行本试验，经高度纯化的鸡抗肾型ＩＢＶＩｇＧ，采用免疫荧光试验，间接阻断Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和细胞中和试验对其特异和中和作用加以研究，结果表明，鸡抗肾型ＩＢＶ抗体成人主要是免疫球蛋白ＩｇＧ。本文阐明了肾型ＩＢＶ与支气管炎型ＩＢＶ疫苗免疫机制的不同，为肾型ＩＢＶ油佐灭活苗     

以传染性支气管炎疫苗株和比利时致肾病变异株免疫的鸡…

以传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）疫苗株和ＩＢＶ致肾病变（ＮＩＢＶ）分离株免疫鸡后，进行静脉和气雾攻毒以评价气管和肾脏的交叉保护力。以４株比利时ＮＩＢＶ分离株和意大利ＮＩＢＶ ＡＺ２３．７４株作静脉攻毒。由经比利时参考株Ｂ１６４８攻毒后于不同时间采集的气管样品表明，经血清学紧密相关的比利时ＮＩＢＶ野毒免疫的鸡的气管有较强的保护力，而经Ｈ１２０、Ｈ５２和Ｄ２７４三个疫苗株以及异源ＡＺ２３．７４株免疫的鸡     

鸡传染性支气管炎H株和D株疫苗比较研究

鸡传染性支气管炎是严重危害养鸡业的疾病之一，在广东对本病的主要兽医防疫措施是接种H株或D株疫苗。本文对这两株疫苗及其应用效果进行比较，现将结果报告如下。1试验材料1．1鸡传染性支气管炎疫苗病毒（IBV）H120株（自中国兽药监察所）、D41株（自广东兽医研究所）和B1系新城疫毒（自南京药械厂），种毒原液均10倍稀释后经尿囊腔接种SPF鸡胚0．2ml／只，37℃培养36小时，收取尿囊液备用。1．2鸡胚蛋购自中国兽药监察所（SPF蛋）和仲凯农技学院（非免疫蛋）。1．3试验小鸡为非免疫1日龄石歧杂黄鸡，购自广州市郊。2方法和结果2．1…     

鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对IBV DNA疫苗的免疫增强效应研究

为研究鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)DNA疫苗免疫效果的影响,根据GenBank登录的鸡IL-1β和IL-16序列设计两对引物,采用RT-PCR方法从四川山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆IL-1β和IL-16基因,与真核表达质粒pcDNA3.1(+)连接构建了pDNAIL-1β和pDNAIL-16。分别将两种重组质粒与IBVDNA联合免疫SPF雏鸡并进行攻毒试验。结果表明,pDNAIL-1β和pDNAIL-16均能促进血清中特异性抗体水平和外周血T淋巴细胞亚群数量的增加(p<0.05),增强IBV DNA疫苗对同型强毒的保护率15%～25%,pDNAIL-1β提升DNA疫苗的抗体水平的时间比pDNAIL-16多7d。试验表明,鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对IBV DNA疫苗的免疫具有增强作用。     

柔嫩艾美耳球虫BJ株核酸疫苗的构建及其免疫保护效果研究

将 E.tenella BJ株的保护性抗原基因 TA4插入真核表达载体中 ,然后在其上游融合方式插入 Et1A基因 ,构建成核酸疫苗并进行体外表达。IFAT检测表明 ,p CT转染细胞的荧光亮度高 ,p CTE载体大 ,转染效率低 ,荧光较弱。动物保护性试验中 ,间隔一周两次免疫鸡后攻虫发现 ,核酸疫苗对球虫感染具有明显的保护作用 ,可显著减轻球虫感染引起的机体增重下降 ,其中 ,重组干扰素联合 p CT中剂量 (5 0 μg)免疫时 ,鸡的增重效果最为明显 ,盲肠病变值也最小 ,ACI可达 16 7.2。试验还发现 ,5 0 μgp CTE可达到 10 0 μg p CT的抗球虫效果 ,ACI在 16 0以上 ,说明融合插入两种基因构建的核酸疫苗对球虫感染的保护效果更佳     

Effects of DDA, CpG-ODN, and plasmid-encoded chicken IFN-�� on protective immunity by a DNA vaccine against IBDV in chickens

This study examined the adjuvant effects of dimethyl dioctadecyl ammonium bromide (DDA), CpG oligodeoxynucleotides (CpG-ODN), and chicken interferon-γ (ChIFN-γ) on a DNA vaccine (pcDNA-VP243) against the infectious bursal disease virus (IBDV). A plasmid encoding chicken IFN-ã was constructed. Twice at 2-week intervals, two-week-old chickens were injected intramuscularly and intraperitoneally with either a DNA vaccine alone or a DNA vaccine together with the respective adjuvants. On week 2 after the second immunization, the chickens were orally challenged with the highly virulent IBDV. The groups that received the DNA vaccines plus either DDA or CpG-ODN showed significantly lower survival rates than the group that received the DNA vaccine alone. However, the survival rates for the DNA vaccine alone and for the DNA vaccine plus ChIFN-γ were similar. The chickens had no detectable antibodies to the IBDV before the challenge but all the surviving chickens in all groups except for the normal control group showed the induction of antibodies to the IBDV at day 10 after the challenge. As judged by the lymphocyte proliferation assays using the a WST-8 solution performed on the peripheral blood and splenic lymphocytes, the stimulation indices (SI) of the peripheral blood lymphocytes in all groups except for the normal control group were similar immediately before the challenge. At 10 days post-challenge, the SI for DNA vaccine plus either CpG-ODN or ChIFN-γ was similar to that of the DNA vaccine control group. For splenic lymphocytes, the SI in the DNA vaccine plus CpG-ODN and DNA vaccine plus ChIFN-γ groups were higher than for the DNA vaccine control. These results suggest that DDA actually compromises the protection against the IBDV by DNA vaccine, and CpG-ODN and IFN-γ had no significant effect.     

鸡新城疫-鸡传染性支气管炎-禽流感-产蛋下降综合征四联灭活油乳剂疫苗的研制与免疫试验

用鸡新城疫La Sota株,鸡传染性支气管炎H120株,产蛋下降综合征127株和禽流感病毒HB1(H9N2)株做为抗原制成油乳剂灭活联苗,并对其进行了物理性状、纯净、安全性、灭活效果、保存期和免疫效力等方面的检验.证明所制备疫苗完全符合质量标准;鸡体对该疫苗4种抗原均产生了良好的免疫应答;攻毒试验证明,免疫鸡能良好地抵抗同种强毒的攻击;所制备疫苗于2～8℃保存12个月后,其免疫效力没有下降.     

IBV肾型地方分离株弱毒疫苗与同类冻干疫苗的免疫效力试验比较

本试验对人工致弱IBV肾型地方分离株(SF株)与相应进口弱毒疫苗和国产弱毒疫苗进行了免疫效力比较试验。结果表明SF株免疫后产生抗体的时间和抗体效价高低与其他疫苗相当甚至略高,对攻毒鸡的保护率均为100%。剖检实验鸡,采集肾脏样本做肾脏组织切片,观察发现接种致弱的SF株疫苗后,引起的肾脏组织病理变化比选用的2种国产疫苗病理变化轻微,而与进口疫苗引起的病理变化程度相当,属可逆性病变。     

ILTV gB基因与鸡IL-18基因共表达DNA疫苗的免疫原性

本试验构建了能分别或同时表达ILTV gB和IL-18基因的重组质粒pIRES-gB、pIRES-IL18、pIRES-gB/IL18。将重组质粒通过腿部肌肉多点注射免疫21日龄雏鸡,35日龄加强免疫1次,二免后2周用ILTV HN1株进行攻毒。pIRES-gB/IL18和pIRES-gB+pIRES-IL18免疫雏鸡后均能促进外周血T淋巴细胞亚群数量和血清中特异性抗体水平的增加,能明显增强ILTV DNA疫苗对强毒的攻击保护,但pIRES-gB/IL18免疫组要优于pIRES-gB+pIRES-IL18混合免疫组及其他对照组,差异显著或极显著。结果表明,鸡IL-18能明显增强ILTV DNA疫苗的免疫原性。     

缓释复方免疫增强剂对4种鸡传染病疫苗免疫增强效果研究

为了验证缓释复方免疫增强剂对鸡减蛋综合征(EDS-76)、鸡新城疫(ND)、鸡传染性支气管炎(IB)和鸡传染性法氏囊病(IBD)4种疫苗的免疫增强作用,试验选用30日龄海兰褐蛋鸡80只,随机分为4组,每组又均分为试验组和对照组,分别注射EDS-76、ND、ND-IB和IBD疫苗,同时对试验组雏鸡投服缓释复方免疫增强剂1粒/只,在免疫前、免疫后12、27 d采血测定抗体效价(或阳性率)、T淋巴细胞花环形成率和ANAE阳性率。结果表明,试验组鸡EDS-76、ND、IB抗体效价和IBD抗体阳性率、T淋巴细胞花环形成率和ANAE阳性率均显著或极显著高于对照组。以上结果说明,缓释复方免疫增强剂可以提高EDS-76、ND、ND-IB和IBD4种疫苗抗体效价(或阳性率),增强鸡体液免疫功能和细胞免疫功能。     

中和温度对鸡新城疫、鸡传染性支气管炎二联活疫苗中鸡传染性支气管炎病毒含量影响的研究

采用分别测定每羽份疫苗成品和每0．1mL半成品胚液鸡胚半数感染量(EID50)的方法探讨了中和温度对鸡新城疫、鸡传染性支气管炎二联活疫苗中鸡传染性支气管炎病毒含量的影响。结果显示，中和温度对该二联活疫苗中鸡传染性支气管炎病毒的EID50有显著的影响。测定病毒含量时，中和条件以中和温度控制在20℃、中和时间45～60min较为合适。