北京地区8个白金针菇主栽菌株的鉴别研究

利用拮抗试验和RAPD方法对不同白色金针菇栽培菌株进行鉴别,结果表明两种方法得到了一致的结论,将8个菌株分为五类:金白1号、白15、147、玉山Fy 4个菌株各为一类,金针菇(合肥)、金针菇(分P)、金针菇(A2)、金针菇(天)属于第五类.因此认为在食用菌菌种的鉴别中,应用拮抗试验对供试菌株进行初步筛选是必要的,可以减少工作量和盲目性,为进一步的研究提供依据;同时RAPD方法从分子方面提供了强有力的鉴别技术,进而通过系统的综合分析,为遗传学研究和育种提供依据.     

6株金针菇菌株遗传多样性的ISSR、RAPD和SRAP综合分析

为了更加快速准确的分析金针菇种质资源的遗传多样性,利用ISSR、RAPD和SRAP分子标记技术对6株金针菇菌株进行综合遗传多样性分析,并构建UPMGA亲缘关系树状图。结果表明,6株金针菇菌株间的遗传相似系数范围为0.49~0.85,在相似系数为0.59时6个菌株可分为3组,黄色菌株‘三明1号’、‘F951’、‘杂19’和白色菌株8801聚成一组,白色菌株8903和白色菌株‘金21’各成一组。该试验结果表明,3类分子标记综合分析结果相比单一分子标记分析结果能够更真实全面地体现出供试菌株之间的亲缘关系,因此该方法将有利于金针菇种质资源的评价和鉴定研究。     

高梁空间诱变效应研究

1996年利用中国第17颗返回式卫星对高粱唐恢28恢复系种子进行搭载处理后,对其变异后代进行了田间鉴定和同工酶及RAPD分析.主要结果如下(1)SP1代获得一个特大穗型突变体(MTR28),其后代性状分离广泛,变异类型丰富,从中获得了遗传性状稳定且具有不同特点的高产、抗病优良变异选系;(2)优良变异选系组配的杂交种产量明显高于对照,可应用于生产上组配高产、抗病杂交种;(3)空间诱变后代性状稳定时间比常规杂交后代稳定快2～4个世代,可缩短育种进程;(4)变异选系在酯酶同工酶和细胞色素氧化酶同工酶酶带种类及酶活性上存在着较大的遗传差异;(5)RAPD分析结果显示,空间诱变选系在基因组水平上发生了明显的变化.     

利用RAPD技术进行甘蔗育种亲本辅助选择

本研究利用RAPD技术对甘蔗杂交育种的亲本组合进行选配和评价。对31份甘蔗种质材料的遗传背景进行了RAPD分析,根据农艺性状和遗传距离选择CP72-1210和湛74-121两份材料作为杂交亲本,从该组合的F1代群体中随机选取85个株系,分析了其农艺性状分布和遗传多样性,显示出F1群体具有广泛的分离,重组优良基因型的概率很大,初步说明利用RAPD技术可进行甘蔗杂交亲本的辅助选择。     

肺形侧耳杂交后代群体灰色关联度与遗传分析

通过对肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)杂交后代群体进行农艺性状的综合评价和遗传分析,为肺形侧耳杂交品种选育和应用提供指导。应用灰色关联度分析法对肺形侧耳杂交后代群体及其亲本进行综合评价分析,并利用序列相关扩增多态性(SRAP)标记技术进行杂交菌株及其亲本的遗传分析。结果表明,在杂交后代群体中菌株H155和H232的关联度排名高于亲本,综合农艺性状表现最好,综合评估结果与杂交后代实际栽培表现相一致。18对SRAP引物共扩增出218个条带,其中多态性条带总共为147个,占总条带数的67.43%,有效等位基因数Nei’s基因多态性指数和Shannon信息指数的平均值分别为1.384 1、0.224 9和0.338 9。供试菌株间遗传相似系数(GS)值变化范围为0.63～0.93,在遗传相似系数为0.77时,可将亲本菌株及其杂交后代群体分为Ⅳ个类群,供试菌株在DNA水平上存在一定的遗传差异,SRAP适用于肺形侧耳单孢杂交后代群体的鉴别。研究结果为肺形侧耳杂交后代的筛选及遗传分析提供了一定的理论依据和技术参考。     

分子标记结合田间观察快速鉴定外源DNA导入玉米的变异后代

本研究通过花粉管通道导入技术将甜高粱总DNA导入优良玉米自交系4112和8902中,并应用RAPD标记技术从导入后代中筛选出变异后代。从306个RAPD引物中筛选出79个引物对供受体及导入后代进行鉴定,其中10个随机引物在供、受体和导入后代间有多态性。对D1和D2代进行田间茎秆糖分调查,并对D2代室内考种,发现糖分含量和穗长、穗重、轴粗、穗粒重等穗部性状都发生了明显变异。结合分子鉴定结果,最终获得了一批变异材料。     

黑粒小麦子粒色素的遗传研究

河东乌麦526、黑粒小麦76、漯珍1号为3个黑粒小麦新品种，富含天然黑色素，蛋白质和18种氨基酸以及对人体有利的各种微量元素的含量都显著高于普通小麦，具有特殊的调节和保健功能。通过这3个黑粒小麦品种与京411(白粒)杂交，分析其粒色遗传。研究结果表明河东乌麦526的色素分布在糊粉层中，黑粒性状是胚乳性状，受两对互补基因控制，F2代符合9(黑色)：7(白色)的分离规律。漯珍1号、黑粒小麦76的色素分布在果皮和种皮中，黑粒性状是种皮和果皮性状，均为不完全显性，漯珍1号的黑粒性状受一对基因控制，F3代符合3(黑色)：1(白色)的分离规律，黑粒小麦76的黑粒性状受两对互补基因控制，F3代符合9(黑色)：7(白色)的分离规律。     

应用SRAP、ISSR和TRAP标记构建金针菇分子遗传连锁图谱

本研究应用金针菇(Flammulina filiformis)的两个菌株,黄色金针菇Y1701和白色金针菇W3082为作图亲本,采用分子标记以构建高密度的金针菇分子遗传连锁图谱。通过F1代产生的71个单孢为遗传连锁图谱作图群体,应用SRAP、ISSR和TRAP标记引物,利用PCR对得到的作图群体进行多态性分析,构建了一张拥有11个连锁群以及125个标记位点,总长度860.3 cM的遗传连锁图谱。连锁群平均长度为78.21 cM,最长的连锁群为132.9 c M,最短的连锁群为16.3 c M。多态性标记间最大遗传距离为38.4 cM,最小距离为0.5 cM,连锁图中出现了6个大于20 cM的间隙,标记密度6.88 cM,是迄今以来金针菇遗传连锁图谱相关研究中密度最高的。本研究所获得的高密度遗传连锁图谱有助于金针菇QTL定位,分子辅助育种和基因定位的研究。     

加拿大披碱草和老芒麦及其杂种F1,F2的RAPD分析

利用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对加拿大披碱草和老芒麦及其杂种F1,F2做了比较分析。旨在用分子标记方法探索亲本加拿大披碱草与老芒麦及其远缘杂种后代的遗传关系,为后期育种提供理论依据。结果表明:两亲本加拿大披碱草和老芒麦之间的亲缘关系较近,杂种F1主要表现为互补双亲的RAPD扩增带,同时还丢失了双亲部分的RAPD扩增带,杂种F1的多态性条带有偏向母本遗传的倾向;F1是真正的杂种;F2的多态性条带表明:F2与父母本的遗传距离相差不大,略偏向母本。亲本与杂种F1,F2的RAPD扩增带表型均具有一定的差异,RAPD遗传标记可用于杂种鉴定和目标性状植株的检测。     

北京地区白色金针菇菌株的SRAP分析

应用SRAP技术对22个金针菇（Flammulina velutipes）菌株进行了遗传多样性分析。结果表明,有9对引物可扩增出189条清晰、稳定的DNA条带; 聚类分析表明,在相似系数0. 820 水平时,可将其余供试菌株分为5大类,第一类包括F21高邮、F43、F1312高邮、F45、F48、金白10号、金针菇2001、白金上庄、金白1号、金白8号; 第二类包括日金1号和F47 ;第三类包括F8909、F14、F天、F合肥、F（分P）、FA2、F49、F6;第四类仅有金针菇2098;第五类仅有日本金信。本研究通过SRAP技术揭示了北京地区金针菇菌株的遗传多样性。     

红花草莓红花基因RAPD标记转化为SCAR标记

红花草莓不但具有经济价值,还具有很高的观赏价值。本研究将3个与红花基因连锁的RAPD标记即AW65679（1031bp）、S484（620bp）与S1383（500bp）进行了克隆与核苷酸测序,并根据测序结果设计4对SCAR引物,将这4对引物对红花草莓品种粉红熊猫、白花草莓品种鬼怒甘及它们的杂交后代进行PCR扩增程序优化和鉴定,筛选出一对SCAR引物可扩增出与红花基因连锁的特异片段AW65679（1038bp）,这就是与红花基因连锁的SCAR标记。SCAR标记因其稳定性好,重复性高将为草莓分子育种开辟一条新的有效途径。     

中国金针菇工厂化生产用种SSR和AFLP遗传多样性分析

探讨SSR、AFLP分子遗传标记技术在金针菇遗传变异分析和菌种鉴定上的应用。用SSR和AFLP分子标记技术比较分析了中国市场上20个主要的工厂化生产金针菇用种的遗传多样性。29对SSR引物和60对AFLP引物分别检测到37个及206个多态位点;遗传相似系数分别为0.56~1.00、0.54~0.97。AFLP标记的多态性比SSR高。2种标记的聚类分析结果均揭示出中国市场上工厂化金针菇用种遗传多样性相对较小,亲缘关系十分接近。     

结球甘蓝迟抽薹基因RAPD标记转SCAR标记

本研究以与结球甘蓝迟抽薹基因连锁的N1750为引物,应用RAPD技术进行PCR扩增,检测到迟抽薹基因,对特异片段进行回收、克隆和测序,依据测序结果设计SCAR引物。在166株BC1群体(A21与P02杂交得到F1再与P02回交)中通过与RAPD标记的比较,SCAR扩增结果同RAPD扩增结果完全一致,从而证实了SCAR标记的准确性。实验结果表明,与甘蓝迟抽薹基因连锁的RAPD标记被成功转化为SCAR标记,为甘蓝分子标记辅助选择育种提供了基础。     

南瓜抗CMV基因的RAPD分子标记筛选

以抗病自交系K01和感病自交系K02杂交后自交所得的F2群体为材料,采用分离群体分析法筛选与南瓜抗CMV基因连锁的RAPD分子标记。通过520个随机引物和310组双引物的RAPD扩增分析,共找到了2个与南瓜抗CMV亲本K01中的抗病基因相连锁的分子标记S4391400和S19 S345600。这2个标记与K01的抗病基因的重组率分别为7.5%和11.8%,遗传距离分别为7.1和11.7 cM。     

中国野生葡萄抗寒基因的RAPD标记及其序列分析

以抗寒性存在差异的83份葡萄种质及3个杂交组合玫瑰香(Vitis vinifera)×黑龙江实生(V.amurensis)、北醇(V.vinifera×V.amurensis)自交、燕山-1(V.yes hanensis)×河岸-3(V.riparia Beaumont)的F1代122株为试材,进行了中国野生葡萄抗寒基因RAPD标记的研究。通过对110个随机引物的筛选,获得了2个与中国野生山葡萄抗寒基因相连锁的RAPD标记S241-670和S238-800。通过克隆、测序,这2个RAPD标记的实际长度分别是717bp和854bp,因此重新命名为S241-717和S238-854,其序列的GenBank登录号分别为GQ338290和GQ338289。经序列分析,S241-717与29条欧洲葡萄全基因组鸟枪序列有77%~97%的同源性,S238-854与6条欧洲葡萄全基因组鸟枪序列有82%~100%的同源性;二者分别编码欧洲葡萄的一种假定蛋白。RAPD标记S241-717和S238-854可用于葡萄抗寒育种的早期分子标记辅助选择。     

Construction of a linkage map for watermelon (Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum & Nakai) using random amplified polymorphic DNA (RAPD)

Summary A linkage map for watermelon (Citrullus lanatus) was constructed on the basis of RADP, ribosomal DNA restriction fragment length polymorphism (RFLP), isozyme, and morphological markers using F₁BC1. A segregating population of 78 individuals was the result of a backcross of a cultivated inbred line (H-7; Citrullus lanatus; 2n=22) and a wild form (SA-1; C. lanatus; 2n=22), in which the latter was the recurrent (male) parent. A total of 69 RAPD, one RFLP, one isozyme, and three morphological markers was found to segregate in the BC1 population. Linkage analysis revealed that 62 loci could be mapped to 11 linkage groups that extended more than 524 centimorgans (cM), while 12 loci segregated independently of all other markers. The locus for exocarp color was linked to two RAPD markers within a region of 5 cM on linkage group 4. The locus for flesh color was linked to a RAPD marker within a region of 30 cM on linkage group 6. The isozyme marker GOT was located on the linkage group 1. Linkage group 2 contained a locus for ribosomal DNA within 5 cM of a RAPD marker. Half of the RAPD markers on the linkage group 7 displayed severely distorted segregation. The construction of linkage map using molecular markers is necessary for the breeding of watermelon to introduce useful gene of wild watermelon efficiently. However the linkage map that was constructed for the most part on the basis of RAPD markers could not cover significant parts of the genome, the linkage map provides breeders of watermelons the possibility of tagging useful agronomic traits, as well as the gene for exocarp color.Abbreviations RAPD random amplified polymorphic DNA - RFLP restriction fragment length polymorphism - GOT glutamate oxaloacetate transaminase - MDH malate dehydrogenase - ACP acid phosphatase - 6PGH 6-phosphogluconate dehydrogenase     

对除草剂敏感致死水稻bel基因的RAPD和SCAR分子标记

以8077s与抗感的籼稻品种丰35亲本及杂交后自交所得的F2群体为材料，采用群分法（Bulked Segregant Analysis, BSA），从210个10mer随机引物，找到两个水稻苯达松敏感池和抗感池之间表现多态性的特异引物——S20和S316，分别产生的标记片段为S20-440和S316-590。它们与bel基因的连锁距离分别为12.132 cM和7.97 cM。对RAPD扩增标记的片段进行克隆、测序，根据测序结果合成两对特异性的SCAR引物，包含原有的RAPD序列。SC01引物在敏感单株中扩增出一条423 bp带；SC02引物在敏感单株中扩增出一条606 bp带，它们的SCAR标记与bel基因的连锁距离为10.66 cM和7.04 cM。应用SCAR标记对水稻恢复系进行了辅助选育。     

Identification of PCR-based markers linked to the powdery-mildew-resistance gene Pl1 from Malus robusta in cultivated apple

The availability of molecular markers linked to mildew resistance genes would enhance the efficiency of apple-breeding programmes. This investigation focuses on the identification of random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers linked to the Pl₁ gene for mildew resistance, which has introgressed from Malus robusta into cultivated apples. The RAPD marker technique was combined with a modified ‘bulked seg-regant analysis’ mapping strategy. About 850 random decamer primers used as single primers or in combinations were tested by PCR analysis on the basis of resistant and susceptible DNA pools. Selected primers producing RAPD fragments were applied in an additional selection step to M. robusta and genotypes representing intermediate breeding stages of the breeding population 93/9, for which a 1:1 segregation could be observed for the resistance trait. Seven RAPD markers, all representing introgressed DNA sequences from M. robusta, were identified and arranged with the Pl₁ locus in a common linkage group. The two most tightly-linked RAPD markers, OPAT20₄₅₀ and OPD2₁₀₀₀ were mapped with a genetic distance of 4.5 and 5 cM, respectively, from the Pl₁ gene. Both markers are suitable for marker-assisted selection in apple breeding. The polymorphic DNA fragment OPAT20₄₅₀ was cloned and sequenced, and longer primers for the generation of a sequence-characterized amplified region (SCAR) marker have been constructed; this marker was easier to score than the original RAPD marker.