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牛体外受精胚胎卵裂阶段对其体外发育能力影响的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
将经过体外成熟培养(IVM)、体外受精(IVF)后获得的牛早期胚胎,按其所处卵裂阶段的不同,划分为2细胞、3~4细胞和5细胞以上3个试验组,在体外条件下继续培养到发育囊胚和孵化囊胚阶段,以观察在胚胎早期,受精卵裂发育的快慢与其后胚胎所获得的继续发育能力的关系。结果显示,牛早期胚胎体外囊胚发育率的高低,与其在体外培养(IVC)前卵裂发育的快慢成正比。在IVF后42~46h处于2细胞、3~4细胞和5细胞以上卵裂阶段的早期胚胎,其囊胚发育率分别为6.5%、21.4%和44.9%,差异非常显著(P<0.001);而经过7~9d的IVC后仍滞留在IVC前原卵裂阶段,丧失继续发育下去能力的胚胎比率则分别为51.6%、32.7%和25.7%,与其IVC前卵裂发育的快慢成反比。在IVF后66~70h仍处于2细胞和3~4细胞卵裂阶段的早期胚胎,其体外发育能力明显降低,囊胚发育率只有1.3%和8.2%;而滞留胚胎率则分别高达90.9%和59.4%。结果表明,牛体外受精早期胚胎卵裂发育的快慢,直接影响到其后体外发育的能力。 相似文献
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血管内皮生长因子对日本和牛胚胎卵裂率和4~8细胞期发育率的影响 总被引:7,自引:1,他引:6
为了探明血管内皮生长因子对IVM/IVF/IVC生产的日本和牛胚胎的卵裂率和到 4~ 8细胞期胚胎发育率的作用 ,在IVM/IVF/IVC的过程中 ,分别在SOF成熟液、BO液以及SOF培养液中添加 0、0 .1、1、10ng/ml的VEGF。通过对5 33个胚胎的检测得出 ,添加VEGF对胚胎卵裂率和 4~ 8细胞期发育率有促进作用 ,其卵裂率分别从对照的 4 7.3%提高到 5 1.4 % (0 .1ng/ml,P >0 .0 5 )、72 .6 0 % (1ng/ml,P <0 .0 5 )和 6 8.5 % (10ng/ml,P <0 .0 5 ) ;4~ 8细胞期发育率则分别从32 .0 %提高到 36 .4 %、5 9.7% (P <0 .0 5 )、5 2 .9%。结果证明 :VEGF对IVM/IVF/IVC的日本和牛胚胎发育有积极的促进作用。可以提高胚胎的卵裂率和 4~ 8细胞期胚胎发育率 ,这与作者前期从荷斯坦牛上得到的试验结果一致 相似文献
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牛体外受精胚胎衍生干细胞能力影响因素的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以牛卵巢卵母细胞体外受精获取囊胚期胚胎,比较体外受精牛胚胎不同获取内细胞团的方法和不同培养液对体外培养胚胎干细胞能力的影响。结果表明,囊胚期胚胎不除去透明带而直接培养产生胚胎干细胞,初次克隆率为55%;胰酶法去透明带分离的内细胞团(ICM)培养产生胚胎干细胞,初次克隆率为90%。免疫外科法去透明带分离的ICM在4种不同的培养液中,初次克隆率分别为16.4%、11.5%、21.8%、18.2%,但是其分离的ICM经传代后形成的衍生细胞不易发生分化,经过4~6代的传代,仍然保持其完整的形态,说明免疫外科法是一种理想的牛ICM分离法,培养液为D20+LIF(40ng/mL)可用于牛胚胎干细胞培养。 相似文献
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家畜体外受精(IVF)技术自上世纪八十年代获得成功以来,发展十分迅速,九十年代已进入试管胚的开发应用阶段。目前,IVF胚胎的质量与体内胚相比仍有很大差距。在进行IVF胚胎体外培养时,常会出现“体外发育阻断”现象,主要表现为细胞数较少、卵裂球形状不规则、存在死亡的细胞和细胞质碎片、发育速率和抗冻性降低以及酶活性和营养物摄取的改变等方面。近年来,为了克服胚胎体外发育所存在的某些缺陷,国内、外对不同动物的胚胎体外培养体系和培养方法进行了系统研究,取得了长足进展。本文就牛IVF胚胎体外培养方面的研究进展综述如下。 相似文献
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牛卵泡卵母细胞体外受精和发育的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用屠宰黄牛卵巢作为供试材料 ,对卵巢表面 2~8mm卵泡卵母细胞体外受精(IVF) -受精卵的体外发育 (IVD)进行了系列研究 ,采用上游法、Percoll法和本实验室沿用的直接洗涤法处理牛冻精 ,观察 3种精子处理方法处理牛冷冻精子对卵母细胞体外受精胚胎发育的影响。实验结果 ,就卵裂率指标 ,采用Percoll法处理的精子进行卵母细胞体外受精 ,和上游法及洗涤法分别比较 ,差异均不显著 (P >0 .0 5 ) ;桑囊率指标 ,只有上游法比洗涤法高 ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ,其余差异均不显著。以FERT -TALP液作为受精液采用常规培养方法 ,精卵作用 18~ 2 0h后分开 ,与精卵作用 6~ 8h后分开卵母细胞受精后的 8-细胞发育率及桑囊率变化不大 (P >0 .0 5 ) ;卵裂率指标 ,18~ 2 0h处理组高于 6~ 8h处理组 ,但两组之间差异也不显著。表明 ,在生产中采用FERT -TALP液做为受精液 ,应用上游法处理精子 ,不需要另购试剂 ,精卵孵育时间由 18~ 2 4h缩短至 6~ 8h是可行的 ,其现实意义是可以简化胚胎体外生产的程序 ,节省人力 ,降低成本 相似文献
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本试验主要讨论了冷冻液添加亚油酸蛋白(LAA)对牛体外受精胚胎(IVF)冷冻后发育能力的影响。结果表明:①低温(0~4℃)保存卵巢获得的卵子受精卵裂率达68.16%(167/245);②LAA添加浓度为4mg/mL时,IVF6日龄胚胎解冻后的存活率与孵化率分别为69.4%(34/49)和22.4%(11/49)最高;不添加LAA的解冻后胚胎的存活率及孵化率分别为47.8%(22/46)和13.0%(6/46)最低,两者差异显著(P<0.05),添加其他浓度各组间差异不显著;③7日龄胚的冻后存活率和孵化率分别为71.4%(90/126)和23.0%(29/126),6日龄胚的分别为68.6%(48/70)和22.9%(16/70),两者差异不显著(P>0.05),8日龄胚的分别为36.3%(33/91)和3%(3/91),与6,7日龄IVF胚冻后的存活率与卵化率差异极显著(P<0.01)。 相似文献
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开放式拉长细管冷冻法对牛卵母细胞体外受精后发育的影响 总被引:9,自引:1,他引:9
在常规牛体外受精(IVF)技术的基础上,分别采用开放式拉长细管 (OPS,open pulled straw)法和细管法对未经成熟培养的卵丘卵母细胞(COCs)进行玻璃化冷冻,解冻后再进行体外成熟(IVM)、IVF和早期胚胎的体外培养(IVC)。结果表明,细管组和 OPS组的解冻后 COCs正常率分别为 59.4%±4.3%和 77.9%±4.1%(P<0 01);成熟率分别为48.2%±5.3%和66.0%±5.8%(P<0 01);卵裂率分别为18.5%±2.0%和32.8%±1.4%(P<0 01);8 细胞阶段的成功率分别为14.8%±2.5%和 24.8%±1.5%(P<0 01);桑椹胚发育率分别为 0 和5 3%±1.1%,明显低于未经冷冻的鲜卵组(21.0%±3.8%;P<0 01);囊胚发育率分别为0和4.0%,明显低于鲜卵组(P<0 01)。说明OPS玻璃化冷冻法可以使未经成熟培养的牛 COCs冷冻后获得桑椹胚和囊胚,但桑囊胚发育率仍较低,方法有待改进。 相似文献
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从屠宰场获得牛卵巢,采取卵母细胞,成熟培养用TCM199+犊牛血清;精子获能处理,以BO液+肝素钠为基础,三个试验组分别添加咖啡因、蔡碱和已酮可可碱,受精经分别为81.3%、83.3%、88.9%,均显著高于对照组(P〈0.01),三个试验组的囊胚率分别为20.4%、19.3%、21.2%。试验得出以下结论:囊胚率与受经成正比,添加已酮可要碱效果最好。另外组内种公牛成绩也有差异。 相似文献
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将牛体外受精后发育到7天和8天的胚胎进行核型鉴定,结果表明胚胎的性比例与胚胎的发育速度密切相关。发育7天体外受精胚胎进行核型鉴定的结果如下:处于扩展囊胚阶段的胚胎,雄性比例为100%;处于扩展中囊胚、囊胚和早囊阶段的胚胎,雄性比例分别为89%、75%和40%。将发育8天的囊胚进行核型鉴定,雄性比例下降为20%。体外受精胚胎平均有丝分裂指数为3.5%。这些结果提示:利用胚胎发育速度与性别的关系,可以对体外受精胚胎进行无损伤的性别鉴定。 相似文献
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将不同直径牛卵泡内卵母细胞体外成熟培养22h后,对其体外受精后的卵裂率,胚胎发育速度和胚胎染色体异常发生率进行了研究。结果表明,体外受精后48h,直径3-6mm卵泡内卵母细胞外受精后的卵裂率明显高于直径1-2mm和7-10mm卵泡内卵母细胞体外受精后的卵裂率(P<0.05)。体外受精后48h,直径3-6mm包泡内卵母细胞体外受精后的胚胎的发育速度明显快于直径1-2mm和7-10mm卵泡组胚胎(P<0.05)。通过对不同卵裂期胚胎的染色体标本分析表明,直径1-2mm卵泡内卵母细胞体外受精后的胚胎染色体异常发生率明显高于直径3-6mm卵泡组(P<0.05),但与直径7-10mm卵泡组之间无显著性差异。 相似文献
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为研究卵巢质量和保存液对牛卵母细胞孤雌发育能力的影响,本实验将采集卵巢按其质量分为A、B 2组,于生理盐水中运输到实验室,利用切割法采集卵巢表面卵泡中的卵母细胞培养,成熟后孤雌激活;将采集牛卵巢随机分到D-PBS保存液与生理盐水中,运送到实验室后采集卵母细胞培养。以卵母细胞的成熟率、孤雌胚的卵裂率、囊胚率来评价卵巢质量、保存液对卵母细胞发育能力的影响。结果表明:A组卵巢平均获得的卵母细胞数(2.1枚)显著低于B组卵巢获得的卵母细胞数(5.5枚),从A组卵巢上获得的卵母细胞成熟率(56.98%)、卵裂率(42.86%)及囊胚率(9.52%)显著低于B组卵巢上获得的卵母细胞成熟率(84.38%)、卵裂率(70.17%)及囊胚率(31.50%)(P<0.05);使用含离子丰富的D-PBS溶液,较对照组保存液生理盐水,其卵母细胞的成熟率、卵裂率及囊胚率均没有显著差异(P>0.05) 相似文献
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血管内皮生长因子对牛胚胎体外发育影响的最适添加浓度筛选试验 总被引:1,自引:0,他引:1
为了探明血管内皮生长因子Vascular Endothelial Growth factor,VEGF)对牛卵母细胞体外发育影响的最适添加浓度,试验中应用了人类重组VEGF165。结果表明,添加1ng/ml、2ng/ml和5ng/ml VEGF均可显著提高胚胎的卵裂率和体外发育率,但以5ng/ml VEGF处理组可以得到最高的胚胎发育至4-8细胞期的发育率,因而选择5ng/ml VEGF浓度作为以后VEGF系列试验的添加浓度。 相似文献
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