针对fimW基因沙门氏菌的特异性PCR检测

为建立沙门氏菌快速检测方法,本研究根据沙门氏菌Ⅰ型菌毛蛋白调控基因fimW设计一对引物,建立PCR检测方法,并对收集的A群～F群14个血清型40株沙门氏菌和5种12株非沙门氏菌菌株进行PCR扩增.结果显示所有沙门氏菌均扩增出与预期(477 bp)相符的特异性片段,而非沙门氏菌扩增结果均为阴性.另外,以肠炎沙门氏菌50336株DNA为模板,敏感性试验结果显示该方法可以检测出扩增体系中1pg DNA染色体和102cfu的沙门氏菌.表明本研究建立了检测沙门氏菌简洁、敏感、特异的PCR方法.     

沙门氏菌临床检测比较研究

比较研究了临床检测沙门氏菌的三种不同方法，采用聚合酶链反应技术，玻片免疫凝集试验和生化检测方法对３０份样品检出阳性率分别８３％，７３％和３０％，同时讨论了三种方法的优缺点。     

PCR检测感染鸡沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌

用ＰＣＲ技术检测鸡感染沙门氏菌ＤＮＡ并与常规细菌分离培养作比较。从感染鸡沙门氏菌或鼠伤寒沙门氏菌的鸡组织中提取ＤＮＡ。所用的一对引物是ＩｎｖＡ中的定向序列合成的，细菌分离自样品的顶培养物。用ＰＣＲ技术从感染鸡组织ＤＮＡ中扩增了２８４ｂＰ的一个片段，与预期的结果一致。用ＰＣＲ方法不仅可检测出细菌分离阳性鸡组织中的ＤＮＡ，而且可以检出细菌分离阴性鸡组织中的ＤＮＡ，从２０个感染鸡沙门氏菌２１ｈ后的样品中     

应用聚合酶链反应技术检测沙门氏菌

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测沙门氏菌,使用了２对引物ＨＩ和ｐｈｏＰ。ＨＩ引物对各长２０ＮＴ,根据鞭毛Ｉ相抗原基因自行设计,扩增序列长２６９ｂｐ;ｐｈｏＰ引物对各长２１ＮＴ,根据ｐｈｏＰ／ｐｈｏＱ基因设计,扩增片段长２９９ｂｐ。ＰＣＲ采用５０μＬ反应体系。ｄＮＴＰＳ各１００μｍｏｌ／Ｌ,引物各１μｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ,酶２Ｕ。三温段ＰＣＲ循环条件为：９７℃预变性７ｍｉｎ;９４℃变性６０ｓ、５５℃复性４０ｓ、７２℃延伸６０ｓ,３５个循环;７２℃延伸７ｍｉｎ。检测８株标准阳性菌,结果都出现了ＨＩ引物和ｐｈｏＰ引物特异带,标准阴性菌３株只出现ｐｈｏＰ特异带,说明ＨＩ引物特异性很强。     

PCR技术检测饲料中沙门氏菌的应用研究

用聚合酶链反应(PCR)技术检测饲料中沙门氏菌,对已知被沙门氏菌污染的动物饲料培养物均能检出阳性,说明本方法对检测饲料中沙门氏菌具有特异性高、灵敏、快速等特点,适用于快速、准确地检测饲料中沙门氏菌的需要。     

猪PLTP基因的PCR扩增及多态性检测

磷酸脂转运蛋白(PLTP)是脂代谢中重要的转运蛋白之一,在机体脂类代谢中主要介导高密度脂蛋白(HDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)间的磷酸脂转移,具有调控动脉粥样硬化(AS)、降低血浆HDL水平等作用.对云南大河猪85个血样进行了DNA的提取及检测,PCR扩增PLTP基因并进行PCR-RFLP分析(HaeⅢ).结果表明,PLTP基因具有丰富的多态性,为今后研究该基因的生物学功能提供了依据.     

用PCR技术检测动物产品中沙门氏菌的研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测沙门氏菌，结果表明，对各种不同血清型的沙门氏菌和已知被该菌污染的鱼粉和动物产品的肉汤培养物均检出阳性，而其他的枸橼酸杆菌、奇异变形杆菌，大肠艾希氏杆菌、缓慢爱德华氏菌和嗜水气单胞菌等非沙门氏菌类，均为阴性。证明本方法特异性高且有灵敏、快速等特点，适用于口岸检疫进出境动物产品快速、准确验放的需要。     

表达猪链球菌溶血素基因的减毒沙门氏菌的构建及鉴定

将猪链球菌溶血素（suilysin，SLY）基因克隆入原核表达栽体pBV220，将重组质粒再导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SV4089株，经PCR和酶切鉴定，构建成携带猪链球菌溶血素基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。结果表明：该减毒株具有相对安全性；用酶切和PCR鉴定法证实在无抗生素存在的条件下携带重组质粒的减毒株比较稳定；SDS-PAGE显示SLY能在宿主菌中进行表达。该结果为进一步研究制备猪链球菌口服活疫苗奠定了基础。     

聚合酶链反应在沙门氏菌检测中的研究进展

沙门氏菌是一种常见的病原菌,它不仅能导致鸡白痢、仔猪副伤寒、流产等动物疾病,还能使人类发生伤寒、副伤寒、败血症、胃肠炎和食物中毒。在各地的食物中毒中,沙门氏菌引起的中毒病例占首位或第二位。然而,沙门氏菌的检测长期以来缺乏一种简便、快速、敏感性高和特异...     

猪胆囊中沙门菌L型的分离培养与invA基因检测

为了解猪胆囊中沙门菌L型携带情况,在贵阳市屠宰场采集970例健康生猪的胆囊组织与胆汁标本,用常规细菌学方法和非高渗分离培养法分离沙门菌及其细菌L型,用PCR和核酸序列分析方法对稳定L型纯培养物进行沙门菌的invA基因检测。结果显示,970例生猪胆囊标本未检出沙门菌细菌型,细菌L型检出率为8.25%;80例细菌L型分离物中有50例invA检测阳性,占5.15%;占细菌L型阳性分离物62.50%。研究结果为生猪胆囊沙门菌L型感染的流行病学及其检查提供了依据。     

Detection of Salmonella invA by isothermal and chimeric primer-initiated amplification of nucleic acids (ICAN) in Zambia

The isothermal and chimeric primer-initiated amplification of nucleic acids (ICAN) is a new isothermal DNA amplification method composed of exo Bca DNA polymerase, RNaseH and DNA–RNA chimeric primers. We detected invA of Salmonella from chicken carcasses, egg yolk and cattle fecal samples. Fifty-three of 59 isolates were invA-positive in ICAN-chromatostrip detection. The result was consistent with those obtained by standard PCR. Salmonella invA was detected in 12 of 14 carcass rinses by ICAN, while in 7 of 14 rinses by standard PCR. These results indicate that ICAN is an efficient, sensitive and simple system to detect invA of Salmonella species in developing countries such as Zambia.     

沙门氏菌PCR检测方法的建立

根据GenBank沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因序列设计引物,扩增特异的202 bp核苷酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了沙门氏菌特异、敏感和快速的PCR检测方法。特异性试验结果表明,从沙门氏菌参考菌株中均能扩增出特异性的核苷酸片段,大肠杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄菌、志贺氏菌、蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,采用简便的直接煮沸裂解法制备样品DNA,该方法的敏感性可达2.43×103CFU/mL。     

鸡痘病毒PCR检测方法的建立

根据已发表的鸡痘病毒 (fowlpox virus,FPV) 4 b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了 2对引物 ,通过对影响PCR扩增因素的优化 ,2对引物在同一反应条件下 ,以抽提 FPV DNA或直接用其毒液制备的模板均能分别扩增出预期的 5 4 9、136 1bp的片段。特异性检测表明 ,2对引物对 FPV10 2株、FPV2 82 E4 (北京 )、FPV2 82 E4 (吉林 )、v FV2 82重组鸡痘疫苗毒及 FPV临床分离株均能扩增出相应特异性片段 ,而用鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、羊痘病毒、鸡胚成纤维细胞 (CEF)制备的模板分别进行 PCR扩增却成阴性。敏感性检测表明 ,2对引物 (p1 ,2 、g1 ,2 )分别能检测到 10 - 2 、10 - 3fmol的 FPV DNA和 10 0 .5、10 - 0 .5TCID50 的病毒。以上结果表明 ,本试验所建立的 FPV PCR检测法具有较高的特异性和敏感性 ,模板制作简单 ,完全可用于 FPV的检测     

动物性食品中奇异变形杆菌PCR检测方法的研究

研究制定动物源性食品中奇异变形杆菌的PCR检测方法,为日常食品卫生监测提供快速检验的依据。根据奇异变形杆菌抗亚碲酸盐基因的保守序列设计Q248F/R,确定PCR条件,利用标准菌株检验方法的特异性和敏感度。引物Q248对奇异变形杆菌检测具有良好的特异性,对人工布菌样品的检测敏感度达1.2×102cfu/100g。通过对扩增目的片段的核酸序列测定,目的片段大小为248bp。该方法用于奇异变形杆菌检测具有特异性强、敏感、快速的特点,适用于动物性食品中奇异变形杆菌检测的快速筛选检验。     

沙门氏菌简便的核酸检测技术

利用聚合酶链反应技术，特异性扩增沙工菌Ｈ１基因的２６９ｂｐ片段。８株标准一菌和３株阳性菌检测结果完全相符，并对３０株分离的疑似沙门氏菌进行了检测。采用５０μｌ体系，引物为自行设计各２０６割寡聚苷酸，各１μＭ；ｄＮＴＰｓ各１００μＭ，Ｔａｑ本科Ｕ。二温段水浴扩增３５循环，条件为预变性９７℃７ｍｉｎ，变性９４℃６０ｓ，复性和延伸６０℃６０ｓ，终延伸７２℃７ｍｉｎ。     

荧光PCR法检测鸡肉中沙门氏菌的研究

作者采用合成的基因探针和引物，对2株阳性标准菌株、2株野生菌株和1个无菌去离子水进行检测，结果准确可靠，整个试验过程在30 h内完成。可见，该法是一种特异、敏感、简便、快速的沙门氏菌检测方法，对快速通关将发挥积极的作用。     

丝状支原体丝状亚种SC生物型PCR检测方法的建议

建立了一个可以识别丝状支原体丝状亚种SC生物型（MmmSC)的PCR方法。根据丝状支原体丝状亚种SC生物型（MmmSC)相关核苷酸序列，设计合成了MC1、MC2和SC1、SC2两对引物。MC1、MC2是一对簇特异性引物，用于鉴别丝状支原体族6个成员，对MmmSC、MmmLC扩增出与预期结果相符的462bp片段；而SC1、SC2是针对MnnSC的一对特异性引物，只能对MmmSC扩增出277bp的片段，经过VspI、Bsp143I和Dral三种限制性内切酶鉴定与预期结果相符，而不能扩增出MmmLC型Y－goat代表株，说明具有非常好的特异性。对MmmSC进行的敏感性试验显示SC1、SC2引物能够检测到100个CFU，具有非常高的敏感性。     

用PCR对鸡毒支原体感染的检测

应用已建立的检测 MG和 MS的 PCR方法 ,对人工接种鸡毒支原体后 2～ 2 0 d的 SPF鸡气管棉拭样品和气管、肺、肝、脾、胸肌、腿肌等器官和组织进行了检测 ;对现场采集的样品同样作 PCR检测。结果表明 ,上述人工样品均检测到病原 ,以气管棉拭样品检出最多 ;现场样品PCR的阳性检出率为 1 0 .2 8% ,分离培养的阳性率为 2 .8% ,敏感性前者高于后者。     

利用聚合酶链反应技术检测牛结核杆菌病的研究

应用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 技术检测牛结核分枝杆菌纯化 Ｄ Ｎ Ａ, 其敏感性为２５０ｆｇ 。所用引物序列对９种抗酸分枝杆菌 Ｄ Ｎ Ａ 进行扩增, 经琼脂糖凝胶电泳证实, 只有人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌产生了３１７ｂｐ 的特异性扩增带。将 Ｐ Ｃ Ｒ 法与皮内变态反应试验（ Ｐ Ｐ Ｄ） 检测方法比较; ５４ 份血样标本中 Ｐ Ｃ Ｒ 的阳性率为１ ％ , Ｐ Ｐ Ｄ 试验的阳性率为０ 。同时对奶样标本的检测与血样结果一致。结果表明, Ｐ Ｃ Ｒ 在直接检测患牛血样、奶样标本中显示出快速、敏感、特异的优点。为今后牛结核病的检测工作提供了一条新的途径。