奶牛瘤胃兼性厌氧纤维素分解菌的分离鉴定

【目的】从奶牛瘤胃液中分离出具有分解纤维素能力的兼性厌氧细菌,用于绿色粗饲料微生物添加剂的研发。【方法】从奶牛瘤胃中采取瘤胃液,接种于羧甲基纤维素钠平板,采用严格厌氧结合需氧培养方式进行培养,通过刚果红染色,筛选出分解纤维素能力强的兼性厌氧细菌;采用生化试验结合16S rDNA序列分析方法对细菌进行鉴定,并绘制系统发育树;同时对细菌生长特性及有无致病性进行初步测定。【结果】共分离到63株具有分解纤维素能力的细菌,其中29株有较强的分解纤维素能力,包括24株G-菌,5株G+菌;24株G-细菌中,18株为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种,3株为铜绿假单胞杆菌,2株为大肠杆菌,1株为产酸克雷伯氏菌;5株G+细菌中,2株与苏云金芽孢杆菌有99.7%的同源性,2株与巨大芽孢杆菌有99.6%的同源性,1株与蜡状芽孢杆菌有99.5%的同源性,分类学上可分别归于苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌。细菌的生长特性及致病性试验表明,分离到的细菌在20~41℃、pH 5.0~9.0条件下生长良好,肺炎克雷伯氏菌、苏云金芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌无致病性。【结论】分离到的奶牛瘤胃兼性厌氧细菌,可用于绿色粗饲料微生物添加剂的研发。     

纤维素分解菌的分离鉴定及生物学特性研究

对从土壤中分离到的4株纤维素分解细菌菌1、菌2、菌3、菌4进行生物学特征研究.4种菌株都能分解稻草和滤纸,其中菌1对稻草和滤纸的分解能力最强,分解效率分别为35.11%和26.15%.4种菌株在NaNO3、(NH4)2SO4作为氮源时生长缓慢且酶活力低,而在蛋白胨作为氮源时酶活力则达到较高水平.菌1、菌2、菌3、菌4产生纤维素酶的最适温度分别为28、20、28、40 ℃.4株纤维分解菌产生纤维素酶的最适pH值为6～7.菌1与荧光假单胞菌(Pseudonomas fluorescens)16S rDNA核苷酸同源率为99.2%.根据形态学、生理生化检测以及16S rDNA核苷酸序列分析结果,鉴定菌1是荧光假单胞菌.     

高效纤维素降解细菌的分离鉴定及酶学特性

从板栗苞壳发酵堆积物中筛选分离得到1株产纤维素酶的菌株BL01,通过菌体的形态结构观察、生理生化试验及16S rDNA序列同源性分析,鉴定该菌为霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei).对该菌株产酶及活性特性进行初步研究,结果表明该菌株在反应温度为35℃、pH值为7.0、发酵时间为72 h时纤维素酶活性最大,达到74.9 U/mL.     

秸秆纤维素分解细菌的筛选与鉴定

利用纤维素琼脂选择培养基和刚果红染色方法,从不同来源的土样中分离出2个菌株,测定了其纤维素酶活性、小麦秸秆降解能力,并对纤维素降解能力强的两个菌株进行了分子鉴定。结果表明,两株高效纤维素分解菌在纤维素刚果红培养基上均能形成透明水解圈,利用16S r RNA序列测序并分析Genbank中的同源性,结合形态和理化性质确定为Bacillus thuringiensis和Bacillus anthracis。在37℃,p H为7的条件下测定了纤维素酶活力,SC1-3和XR2-5-4分别为1.41和1.59。这两株37℃下经15 d后小麦秸秆失重率达19.92%和22.83%。     

牛瘤胃液中纤维素分解菌分离、鉴定及降解效果测定

从牛瘤胃液中分离筛选出高效纤维素降解细菌,用于玉米秸秆发酵处理。通过刚果红染色、滤纸分解速率和酶活性的测定与分析筛选菌株;形态学结合16S rDNA鉴定菌株;优化高产纤维素酶菌株的产酶发酵条件,并进行秸秆发酵处理,测定还原糖和可溶性蛋白质含量的变化。结果表明：初筛出6株具有纤维素分解能力的细菌,4株为G^-菌,2株为G⁺菌,可分为3个属5个种,包括2株寡养单胞菌属、2株鞘氨醇杆菌属和2株短稳杆菌属;复筛得出1、2号为高产纤维素酶菌株,其最适产酶培养温度均为37℃,初始pH值分别为6.0和5.5,且均能提高玉米秸秆中还原糖和可溶性蛋白质含量,第3天达到高峰期。综合而言,从牛瘤胃液中分离筛选出6株纤维素分解细菌,其中2株高产纤维素酶菌株可用于降解玉米秸秆。     

一株低温厌氧纤维素降解细菌的分离、鉴定及其酶学性质的研究

从若尔盖草甸淤泥中获得一株低温厌氧纤维素菌CD-2,分离菌株革兰氏染色阴性,直杆状,严格厌氧,菌体大小为0.3μm×2.8 ～ 3.1 μm,生长温度范围5～40℃(最适温度20℃);pH范围6.5 ～8.0(最适pH7);NaCl浓度范围0.1％～0.4％(最适NaCl浓度0.2％).分离菌株能利用滤纸、纤维素粉MN300、微晶纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、木聚糖等.在菌株CD-2的纤维素酶系中,存在外切-β-1,4-葡聚糖酶(CI酶)、内切-β-1,4-葡聚糖酶(Cx酶)和β-葡萄糖苷酶3种组分,最适温度分别为30、30和25℃.该菌株还存在木聚糖酶,最适温度为30℃.通过16S rDNA序列分析表明,菌株CD-2属于梭菌属Clostridium,与C.papyrosolvens的相似性为99.1％.     

宏基因组学方法分析奶牛瘤胃尿素分解菌的多样性

利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物PCR扩增并测序,揭示奶牛瘤胃尿素分解菌的多样性。提取本研究室前期鉴定的16个脲酶克隆的质粒,利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到pMD19-T载体,转化E.coliJM109,挑取阳性克隆测序。利用Blast程序将序列与GenBank和RDP数据库进行比对,并使用Mega 4.0软件构建系统发育树。4个脲酶克隆含有脲酶保守序列ureC,系统发育树分析表明,U1、U5、U13和U15分别属于Firmicutes、ε-Proteobacteria、β-Proteobacteria和Actinobacteria;7个脲酶克隆含有16S rDNA,经过建树分析,U1、U3、U7、U10、U11、U12和U14分别属于Staphylococcus、Shigella、Bacillus、Acinetobacter、Achromobacter、未培养微生物和Bacillales。实验结果显示,奶牛瘤胃微生物脲酶基因和尿素分解菌具有多样性的特点。     

一株益生芽孢杆菌的分离与鉴定

[目的]为优良益生菌的开发提供理论依据。[方法]以采自中国农业科学院北京畜牧兽医研究所鸡舍附近的土壤样品为材料,采用稀释平板法对其中的菌株进行分离与纯化培养,并对分离菌株的生理生化特性和淀粉酶活性进行测定。[结果]从土壤样品中分离到一株芽孢杆菌（编号为P-31）,结合16S rDNA测序、系统发育树分析和生理生化鉴定结果,确定该菌株为巨大芽孢杆菌,其16S rDNA GeneBank登录号为GU271136;水解酶活性测定结果显示,该菌株具有产蛋白酶和淀粉酶的活性。[结论]该研究所分离的菌株P-31具有良好的益生菌开发前景。     

一株抗铬芽孢杆菌的分离鉴定及16S rDNA序列分析

从湖北省大冶市某矿区土壤中分离到1株可以在含7mmo·L-1铬(Cr6+)的培养基上正常生长的菌株,命名为MD08.对该菌株进行了形态学观察和生理生化鉴定以及16S rDNA序列分析.结果表明,MD08为革兰氏阳性细菌,椭圆形,中央有1个大的芽孢,利用葡萄糖产气产酸,甲基红试验显示为阴性;通过对该菌株的16S rDNA进行测序和同源性比较,发现它与芽孢杆菌的同源性达到99%,该菌株被鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium);MD08对多种重金属普遍具有较高的抗性,可以用于重金属污染的微生物修复和研究微生物与重金属的相互作用.     

拮抗草莓灰霉病菌的内生细菌SL2的分离及鉴定

从草莓健康叶片中分离到27株内生细菌,与草莓灰霉病菌的对峙试验测定结果表明．其中有3株对草莓灰霉病菌具有显著拮抗作用。且SL2的抑菌效果最为明显,其抑菌半径达到14mm,通过对其进行形态、生理生化特性及16S rDNA序列等方面的研究,初步鉴定SL2为地衣芽孢杆菌。     

纤维素分解菌的分离筛选

[目的]为获得纤维素分解菌,以研究其在有机物质资源的利用上的应用。[方法]通过固体培养初筛和摇瓶发酵复筛从腐烂的含菌秸秆、腐叶、朽木和土壤中筛选出纤维素酶活较高的菌株,并对它们对不同碳源的利用进行了初步研究。[结果]通过初筛和复筛获得了内切酶活力和滤纸酶活力均较高的3株细菌和4株真菌。将7个菌株分别接种到不同碳源的液体培养基中,经3d培养后测定其CMC酶活,可发现不同菌株对同一碳源产生的酶活不同,同一菌株对不同来源纤维素的利用能力也不同。[结论]测定各菌株在不同纤维素碳源中的纤维素酶活力并将其应用于相应行业,这在生产上具有重大意义。     

一株高纤维素酶活力纤维素分解菌的分离与鉴定

从腐烂朽木及附近土壤筛选分离到一株高纤维素酶活性的纤维素分解菌CDY-3,经初步鉴定其为芽孢杆菌属菌株。pH5时,该菌羧甲基纤维素酶活性最高达14.59IU,对滤纸有较强的降解能力。生理生化特性表明该菌最适生长条件为30℃,pH7。     

纤维素分解菌群的分离和筛选

滤纸平板法结合摇床接着筛选到２个纤维分解能力较强的混合菌Ｍ１和Ｍ２。在以纤维素为碳源的培养液中２８℃振荡培养４ｄ，滤纸纤维素失重率分别达５７．５３％和５４．９２％，未经处理的稻草秆纤维素失重率为３８．８２％和３６．２１％，膨化稻草比稻草秆易分解，纤维素降解率可达６８．８３％和６０．０２％，经初步鉴定，Ｍ１由木霉Ｆ１和芽胞杆菌Ｂａ组成，Ｍ２由木霉Ｆ２和芽孢杆菌Ｂａ组成，实验结果表明，由真菌，细菌组成     

一株鹿源纤维素降解菌Lu14的分离与鉴定

从梅花鹿粪便中分离筛选出24株芽孢杆菌,初筛获得10株具有纤维素降解能力的菌株,经过复筛,菌株Lu14纤维素降解能力较高,其内切葡聚糖酶活和滤纸酶活分别为1.106 U/m L和0.76 U/m L。对Lu14进行菌落形态、生理生化特征鉴定和16S rDNA序列分析,结果发现其与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的相似性高达99.99%,故鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。     

高效纤维素分解菌分离筛选的研究

从土壤、马粪、牛粪等材料中分离出分解纤维素能力较强的高温细菌３个菌群,中温放线菌３株,中温真菌３株。在稻草培养基中,Ｂ１菌群的纤维素酶活力为５．６６ｍｇ·（ｇ·ｈ）－１,Ａ３菌株的纤维素酶活力为６．５５ｍｇ·（ｇ·ｈ）－１,Ｆ３菌株的纤维素酶活力为５．７６ｍｇ·（ｇ·ｈ）－１,稻草经Ｂ１,Ａ３,Ｆ３分解后,其中的粗纤维含量分别降至６．６９％,６．２６％和６．３５％。     

秸秆纤维素分解菌的分离筛选

利用纤维素分解菌生产发酵饲料是当前饲料业的一个发展方向,它可将纤维素分解为牲畜可利用的糖。此项试验从各种土壤及饲料中分离到12株能分解纤维素的菌株。分别测定滤纸分解度、CMC酶活、FPA酶活和天然纤维素酶活,筛选出6株对天然秸秆纤维素有较强降解能力的菌株。通过改变其培养基中天然纤维素的含量,发现随着培养基中天然纤维素含量的增加,酶活力也随之升高。     

1株苯酚高效降解菌的筛选与鉴定

从某焦化厂排水沟采集污泥,通过以苯酚为唯一碳源的培养基逐步驯化,获得耐酚能力高达2 200 mg/L的菌株JDM-2-2.利用形态观察、生理生化检测、16S rDNA序列分析将其初步鉴定为炭疽芽孢杆菌.菌株JDM-2-2在30℃和pH值7.0条件下,42 h内能将800 mg/L的苯酚彻底降解,属苯酚高效降解菌.     

猪源高产蛋白酶芽胞杆菌的分离与鉴定

利用酪蛋白培养基从猪粪便样品中分离产蛋白酶的芽胞杆菌,采用福林酚法测定其酶活力,对筛选到的高酶活菌株进行形态学、生理生化和分子鉴定。结果表明,从86株分离茵中筛选了一株酶活较大的菌株B．A464,革兰氏阳性菌,呈粗杆状,能形成卵圆形芽孢,16SrDNA序列长度是1463bp,与蜡样芽孢杆菌的同源性高达99％,鉴定为蜡样芽孢杆菌,所产蛋白酶活力为2．19×10^3U·mL^-1。     

双季稻区厌氧纤维分解菌的分离与筛选

在严格的厌氧条件下,从水牛粪便和胃残渣中共分离了230个标样,得到1150个菌株。通过对这些菌株降解滤纸速度的观察,筛选出了3株纤维素分解能力较强的细菌。其中以301菌株能力最强,将1ml1.7×103cfu/ml菌液加入到含有滤纸的9ml2号培养液中培养,分解50%粗滤纸只需3d,全部分解只需7d。通过JSM-6360电镜4×104倍放大观察,此细菌为圆椭圆形,直径为225nm左右。此外,对301菌株在不同培养液、不同pH值等培养条件下分解纤维素的能力进行了初步研究。