日粮锌水平对雏番鸭免疫器官中细胞凋亡及Fas表达的影响

为了探讨微量元素锌对雏番鸭主要免疫器官中细胞凋亡及Fas表达的影响,选取135只1日龄体况一致的健康番鸭随机分成3组,A组为低锌组,B组为对照组,C组为高锌组,分别饲喂含锌20、40和200 mg/kg的日粮,试验期45 d,通过TUNEE,法和免疫组织化学法观察15、30、45日龄3组雏番鸭胸腺、法氏囊和脾脏中细胞凋亡的变化规律及Fas的表达情况.结果表明,15 d时,胸腺、法氏囊中细胞凋亡数,A组极显著高于B组(P<0.01),B组显著高于C组(P<0.05);脾脏中细胞凋亡数A组显著高于B组(P<0.05),B组极显著高于C组(P<0.01);30 d时,胸腺、法氏囊、脾脏中细胞凋亡数A组仍最多,与B、C组差异极显著(P<0.01),胸腺、法氏囊中细胞凋亡数C组和B组差异不显著(P>0.05),脾脏中细胞凋亡数C组显著地低于B组(P<0.05);45 d时,胸腺和法氏囊中细胞凋亡数C组均显著高于B组(P<0.05),而脾脏则仍表现为C组最少(P<0.01).Fas的表达情况与细胞凋亡规律具有一致性,但略有不同,主要表现为Fas蛋白表达的变化早于细胞凋亡.提示,低锌能够诱导雏番鸭免疫器官细胞凋亡,试验早期高锌抑制细胞凋亡,但是较长时间的添加高锌反而会诱导免疫细胞凋亡.细胞凋亡的死亡因子Fas的表达情况进一步表明,日粮锌对雏番鸭主要免疫器官中细胞凋亡的影响是通过Fas/Fas-L途径来调控的.     

番鸭呼肠孤病毒诱导雏番鸭免疫器官细胞凋亡的研究

以番鸭呼肠孤病毒腿部肌肉接种10龄健康雏番鸭,复制番鸭"花肝病",并研究其不同时期诱导免疫器官细胞凋亡的能力.结果表明,雏番鸭在感染病毒后的12 h、24 h、48 h、72 h、144 h均能观察到胸腺、脾脏、法氏囊细胞凋亡的典型形态学变化,在12～24 h达到高峰,72 h后逐渐降低.由此可知,雏番鸭呼肠孤病毒对雏鸭免疫器官的细胞凋亡具有诱导作用.揭示该病毒致病机理与淋巴细胞凋亡从而引起的免疫抑制相关.     

锌对雏番鸭淋巴器官中肥大细胞数量的影响

选择1日龄健康雏番鸭45只,随机分为3组,分别喂以每kg含锌离子20mg、40mg、200mg的饲料,饲养期为45d.于15日龄、30日龄和45日龄每组随机宰杀5只,取法氏囊、脾脏、胸腺,Camoy法固定,甲苯胺蓝染色,显微镜观察肥大细胞数量的变化规律.结果表明:15日龄时,低锌日粮组鸭子胸腺和脾脏的肥大细胞数量均比另外两组高,(P>0.05),而法氏囊中低锌日粮组肥大细胞数量比另外两组明显高(P<0.01).30日龄时,低锌日粮组鸭子胸腺、脾脏和法氏囊中肥大细胞数量均比高锌日粮组显著增多(P<0.05),而与正常锌日粮组相比,差异不显著(P>0.05).45日龄时,法氏囊高锌日粮组与低锌日粮组和正常锌日粮组差异显著(P<0.05);脾脏各组间差异不显著(P>0.05),但高锌日粮组肥大细胞数量最多;胸腺低辞日粮组与高锌日粮组和正常锌日粮组差异极显著(P<0.01).因此,锌具有稳定免疫器官中肥大细胞数量的重要作用,但长时间添加高剂量锌反而会增加肥大细胞数量.     

锌对雏番鸭淋巴器官中肥大细胞数量的影响

选择1日龄健康雏番鸭45只,随机分为3组,分别喂以每kg含锌离子20mg、40mg、200mg的饲料,饲养期为45d。于15日龄、30日龄和45日龄每组随机宰杀5只,取法氏囊、脾脏、胸腺,Carnoy法固定,甲苯胺蓝染色,显微镜观察肥大细胞数量的变化规律。结果表明：15日龄时,低锌日粮组鸭子胸腺和脾脏的肥大细胞数量均比另外两组高,（P〉0.05）,而法氏囊中低锌日粮组肥大细胞数量比另外两组明显高（P〈0.01）。30日龄时,低锌日粮组鸭子胸腺、脾脏和法氏囊中肥大细胞数量均比高锌日粮组显著增多（P〈0.05）,而与正常锌日粮组相比,差异不显著（P〉0.05）。45日龄时,法氏囊高锌日粮组与低锌日粮组和正常锌日粮组差异显著（P〈0.05）;脾脏各组间差异不显著（P〉0.05）,但高锌日粮组肥大细胞数量最多;胸腺低锌日粮组与高锌日粮组和正常锌日粮组差异极显著（P〈0.01）。因此,锌具有稳定免疫器官中肥大细胞数量的重要作用,但长时间添加高剂量锌反而会增加肥大细胞数量。     

黄曲霉毒素B_1对雏鸡免疫器官影响的病理学观察

为探明黄曲霉毒素B1对雏鸡免疫器官组织学及超微结构的影响,将100只1日龄艾维茵健康公雏随机分为4组,分别喂以对照日粮和AFB1日粮(AFB1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组日粮中AFB1添加量分别为0.15、0.3和0.6mg·kg-1),试验期21d。结果显示,AFB1Ⅱ组和Ⅲ组雏鸡的免疫器官脏器指数显著下降(P0.05)。AFB1组雏鸡的免疫器官组织学损伤表现:胸腺皮质区网状细胞周围见较多细胞核碎片;法氏囊淋巴滤泡内细胞核碎片增多,滤泡髓质区淋巴细胞减少;脾白髓区细胞核碎片增多。超微病理学观察,胸腺、法氏囊和脾内淋巴细胞线粒体肿胀,以染色质边移为特征的凋亡细胞数目增多。结果表明,摄食含0.15~0.6mg·kg-1 AFB1的日粮,可不同程度地抑制雏鸡免疫器官的发育,致免疫器官中的淋巴细胞数量减少、细胞核碎片增多。     

禽流感病毒与番鸭呼肠病毒感染番鸭免疫器官细胞凋亡的研究

应用原位末端标记法和免疫组化SABC法,分别以H9亚型禽流感和番鸭呼肠病毒单独感染或混合感染雏番鸭后1、3、5、7、10d对胸腺、法氏囊、脾脏细胞凋亡和P53的动态变化进行检测。结果显示,H9亚型AIV,MDRV单独感染和混合感染均可导致雏番鸭胸腺、法氏囊和脾脏出现淋巴细胞凋亡增多;病毒感染早期各免疫器官组织细胞凋亡明显,感染后期细胞凋亡量逐渐减少;混合感染组脾脏、胸腺细胞凋亡更为显著。P53表达的变化与细胞凋亡呈现相同变化规律,表明P53表达与病毒诱导的细胞凋亡机制密切相关。     

高锌对天府肉鹅免疫功能的影响

将1日龄天府肉鹅健雏200只随机分为A、B、C、D共4组，A组作为对照组仅喂基础日粮（Zn 100mg／kg），B、C、D组分别饲喂基础日粮＋Zn900mg／kg、基础日粮＋Zn1400mg／kg和基础日粮＋Zn1900mg／kg，试验期7周，以研究高剂量锌对雏鹅免疫功能的影响。结果，与对照组相比，高锌的B、C和D组雏鹅淋巴器官发育受阻，胸腺、腔上囊和脾的器官生长指数程度不同地降低；胸腺、腔上囊和脾淋巴细胞数量减少、变性、坏死；淋巴细胞分裂增殖受抑，胸腺、腔上囊、脾和外周血淋巴细胞分裂指数程度不同地降低。结果表明，日粮高锌可致雏鹅免疫功能受损。     

铜中毒对雏鸭免疫器官细胞凋亡影响的研究

选用1日龄天府肉鸭健雏210只，随机分为3组，分别喂以对照日粮(Cu12．16mg，kg)、中毒1日粮(Cu850mg／kg)和中毒11日粮(Cu1050mg／kg)7周，以超微病理学和流式细胞术的方法观察研究了铜中毒对雏鸭免疫器官淋巴细胞凋亡的影响。电镜观察，铜中毒Ⅰ组和中毒Ⅱ组免疫器官淋巴细胞发生凋亡的频率明显高于对照组。发生凋亡的淋巴细胞表现为染色质凝聚、边集、细胞核呈新月形、“C”形、花瓣状、圆环状或圆斑状，并出现凋亡小体。流式细胞术测定．2个中毒组免疫器官淋巴细胞凋亡百分率也明显高于对照组。上述研究结果表明．铜中毒可以诱导淋巴细胞凋亡。     

番鸭呼肠孤病毒诱导的细胞凋亡观察

以番鸭呼肠孤病毒人工感染10日龄健康番鸭,运用原位末端标记技术及免疫组织化学方法,对番鸭呼肠孤病毒感染后番鸭多种组织的细胞凋亡进行检测,对死亡因子FasL的表达进行研究。原位末端标记检测显示,多种组织器官中出现大量阳性细胞,表明番鸭呼肠孤感染可引起肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、胸腺、盲肠和法氏囊发生不同程度的细胞凋亡。免疫组织化学研究结果表明,感染番鸭呼肠孤病毒后,肝脏、肾脏、肺脏、胸腺、盲肠和法氏囊等多种组织中可观察到FasL表达,且各种组织FasL表达的强弱与原位末端标记检测的细胞凋亡指数高低相一致。结果表明番鸭呼肠孤病毒诱导细胞凋亡的机制与FasL的表达密切相关。     

黄曲霉毒素B_1诱导的胸腺细胞凋亡的线粒体和死亡受体途径

黄曲霉毒素B_1是恒温动物中潜在的免疫抑制剂,它与免疫器官凋亡的上调有关。本研究中,我们研究了线粒体、死亡受体和内质网通路在黄曲霉毒素B_1诱导的胸腺细胞凋亡的作用。给试鸡饲喂含有黄曲霉毒素B_1的饲粮(0.6 mg/kg)3周。研究结果表明,(1)含黄曲霉毒素B_1饲粮能诱导肉仔鸡T细胞亚群减少,形态变化以及胸腺的凋亡。(2)极度的凋亡涉及了线粒体途径,上调了促凋亡蛋白Bax/Bak、细胞色素C的基因表达,下调了抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-2相关X蛋白Bcl-xL的基因表达;还涉及了死亡受体途径,上调了死亡受体Fas、Fas的配体FasL和死亡结构域结合蛋白FADD的基因表达。(3)在胸腺中也确认了氧化应激是凋亡的诱导剂。结论,本文首次证明线粒体和死亡受体途径参与了黄曲霉毒素B_1诱导肉仔鸡胸腺细胞的凋亡。     

硒缺乏通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导鸡胸腺细胞凋亡

本试验旨在探讨硒缺乏是否通过激活Toll样受体信号通路诱导鸡胸腺细胞凋亡。复制硒缺乏模型,将200只1日龄健康的肉鸡随机分为对照组（C组）和缺硒组（L组）,对照组饲喂硒含量0.2 mg·kg^-1的正常日粮,缺硒组饲喂硒含量0.004 mg·kg^-1的缺硒日粮。在15、25、35、45、55日龄时,每组分别选取15只鸡,观察胸腺组织病理形态变化和超微结构变化;检测胸腺组织中TLR4信号转导通路与细胞凋亡相关因子的表达。又建立了MDCC-MSB1（MSB1）细胞硒缺乏模型,并在此基础上设立6个分组：对照（C group）组、缺硒（L group）组、缺硒+转染空质粒（L+pCMV-HA-N）组、缺硒+siRNA阴性对照（L+NCsiRNA）组和缺硒+过表达TLR4（L+pCMV-HA-TLR4）组、缺硒+干扰TLR4（L+siChTLR4）组,低硒处理5 d后,检测细胞活力、细胞凋亡情况、TLR4信号转导通路与细胞凋亡相关因子的表达。结果显示：1）与C组相比,L组皮质髓质的淋巴细胞数量减少、细胞排列紊乱、皮质髓质充血、核碎裂,广泛的局灶性坏死。L组鸡胸腺组织淋巴细胞间出现裂隙,体积缩小,细胞碎裂,核染色质边集,线粒体肿胀,嵴断裂。2）与15日龄C组相比,L组鸡胸腺中TLR4、MyD88、NF-κB、Caspase-3、Caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达水平在15~55日龄中均显著上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平呈相反趋势。3）与C组相比,L组MSB1细胞活力显著下降、细胞凋亡数量明显增加、TLR4、MyD88、NF-κB、Caspase-3、Caspase-9、Bax mRNA和蛋白的表达均显著增加、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平极显著降低;与L组相比,L+siChTLR4组细胞活力明显增强、细胞凋亡数量明显减少、相关因子mRNA和蛋白表达显著下降,而L+pCMV-HA-TLR4组细胞活力明显降低、细胞凋亡数量明显增加、相关因子mRNA和蛋白表达均明显增加。综上所述,硒缺乏通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导鸡胸腺细胞凋亡,并进一步诱导鸡胸腺损伤。     

高铜对雏鸡脑组织细胞凋亡影响的研究

360羽1日龄艾维茵肉鸡随机分为6组,分别喂以对照日粮（Cu 10.89 mg.kg-1）和高铜日粮（Cu 100mg.kg-1,高铜I组;Cu 200 mg.kg-1,高铜Ⅱ组;Cu 400 mg.kg-1,高铜Ⅲ组;Cu 600 mg.kg-1,高铜Ⅳ组;Cu800 mg.kg-1,高铜V组）6周,以流式细胞术和免疫组化染色检测高铜对脑组织细胞凋亡的影响。流式细胞仪检测,高铜Ⅲ组、高铜Ⅳ组和高铜V组脑组织细胞凋亡比例升高,与对照组比较差异显著或极显著（P〈0.05或P〈0.01）。免疫组化染色检测脑组织Bax和Bcl-2蛋白表达显示,高铜Ⅲ组、高铜Ⅳ组和高铜V组Bax表达阳性细胞比例较对照组极显著升高（P〈0.01）,而Bcl-2表达阳性细胞比例较对照组显著或极显著降低（P〈0.05或P〈0.01）。同时,高铜Ⅲ组、高铜Ⅳ组和高铜V组脑组织铜锌超氧化物歧化酶活性显著降低（P〈0.05或P〈0.01）和丙二醛含量显著升高（P〈0.05或P〈0.01）。结果表明,日粮铜含量达到或超过400 mg.kg-1可诱导雏鸡脑组织细胞凋亡。     

饲喂蚯蚓液对番鸭屠宰性能的影响

本试验旨在探索蚯蚓液对番鸭屠宰性能的影响。选用180只1日龄公番鸭,用单因子试验设计,随机分成3组,每组3个重复,每个重复20只,各组分别饲喂添加含蚯蚓液0%、1.5%、2.5%的基础饲粮,试验期70 d。结果显示:在日粮中添加2.5%以下的蚯蚓液能提高番鸭的部分屠宰性能和免疫器官指数,但均无统计学差异。     

锌水平对鹅血液免疫功能的影响

锌作为动物体内必需的微量元素对免疫功能具有增强作用。以往学者对于哺乳动物和鸡与锌的关系有一定研究,然而关于锌对鹅免疫功能的影响则罕见报道。试验通过设置不同锌水平的饲粮,探讨雏鹅阶段能发挥最佳免疫力的锌需要量,为锌在雏鹅阶段应用提供依据。1材料与方法1.1试验动物选用1日龄雏鹅120只,雌雄兼有,随机分为4组,每组30只,平均体重70.4 g/只。前2周饲养于木笼中,15日龄后分组地面饲养,自由采食,保证充足的饮水。试验A、B、C、D组添加ZnSO4·H2O,使锌添加水平分别为0,40,110,2 000 mg/kg。试验期为55 d。1.2试验日粮采用以玉米-豆…     

益生素对左家雉鸡免疫器官及血液指标的影响

选取150只1日龄健康的雏左家雉鸡,随机分为5组,分别为对照Ⅰ组、抗生素Ⅱ组、益生素Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组,每组30只鸡,分3个重复,每重复10只鸡,雏雉鸡自由采食和饮水,按常规程序免疫。对照组饲喂基础日粮,抗生素组在基础日粮中添加抗生素,益生素Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组在基础日粮中分别添加0.1%、0.2%和0.3%的益生素,试验期为4周,研究益生素对左家雉鸡免疫器官及血液指标的影响,进一步研究适合左家雉鸡最佳的益生素添加剂量。结果表明:添加益生素组的左家雉鸡其免疫器官指数均比对照组高,同时,益生素组血清总蛋白升高,尿素氮含量降低,红细胞数量增加,白细胞数量有所降低。其中益生素的添加量为0.2%时,效果最好,因此,益生素能代替常规抗生素并对左家雉鸡免疫器官功能有增强的作用。     

高铜对大鼠肾细胞炎性因子和细胞增殖的影响

旨在探讨铜中毒对大鼠肾组织炎性因子的表达和细胞增殖功能的影响。本研究选用32只20日龄健康大鼠随机分为4组,每组8只,其中,对照组日粮的铜（Cu）浓度为15 mg·kg^-1;高铜Ⅰ组日粮Cu浓度为30 mg·kg^-1;高铜Ⅱ组日粮Cu浓度为60 mg·kg^-1;高铜Ⅲ组日粮Cu浓度为120 mg· kg^-1。连续饲喂6个月,检测肾组织Ki-67、PCNA、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-18、NF-κB、TNF-α的mRNA及其蛋白的表达。随着日粮中铜含量增高,肾组织中Ki-67、PCNA mRNA及其蛋白表达量显著降低（P<0.05）。炎性因子IL-1β、IL-2、IL-6、IL-18、NF-κB、TNF-α mRNA的表达水平显著升高（P<0.05）,IL-1β蛋白的表达水平呈剂量依赖性上升,IL-6和IL-18蛋白表达水平先上升,后下降。结果表明,日粮铜含量高于30 mg·kg^-1时,将不同程度地抑制大鼠肾组织的细胞增殖,促进炎性因子的表达,造成炎性损伤。     

纳米硒对氟化钠诱导小鼠肝组织细胞凋亡的影响

旨在探究纳米硒对氟化钠诱导肝细胞凋亡的影响，40只28日龄昆明小鼠（25 g±2 g）适应性饲养7 d后，随机分为对照组（Control，生理盐水）、氟化钠组（NaF，24 mg·kg^-1）、纳米硒组（Nano-Se，1 mg·kg^-1）、纳米硒治疗组（NaF+Nano-Se，24 mg·kg^-1 NaF+1 mg·kg^-1Nano-Se），每组10只，灌胃给药，试验周期为28 d。通过HE染色评价小鼠肝细胞的病理损伤，Tunel染色评估肝细胞凋亡水平，免疫荧光，Western blot，RT-qPCR检测凋亡相关基因蛋白的表达水平。结果表明：1）纳米硒有效缓解了氟化钠处理引起的肝细胞肿胀、空泡变性以及核碎裂等现象，下调Bax、Caspase3/9及蛋白P53、Caspase3等凋亡发生相关基因的表达，提高了Bcl-2/Bax的表达水平（P<0.05）；2）Tunel染色结果显示，氟化钠处理显著提高了细胞的凋亡率（P<0.01），纳米硒可有效减少细胞凋亡的发生（P<0.05）；3）Cyt-C在氟化钠组表达水平较对照组显著升高（P<0.05），而在纳米硒治疗组的表达呈下降趋势。综上所述，纳米硒通过调控凋亡相关因子的表达能有效缓解氟化钠诱导的小鼠肝细胞凋亡。     

铜中毒对雏鸡淋巴细胞凋亡的影响

选用1日龄艾维菌肉鸡健雏180只，随机分为3组，分别喂以对照日（Cu 11．97mg／kg）、中毒Ⅰ日（Cu 650mg／kg）和中毒Ⅱ日粮（Cu 850mg／kg），为期6周，以流式细胞术的5r法观察研究了铜中毒对雏鸡免疫器官淋巴细胞凋亡的影响。研究结果表明，铜中毒可诱导淋巴细胞凋亡，2个中毒组免疫器官淋巴细胞凋亡百分率显著高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）。     

锌对鹅淋巴细胞凋亡和细胞增殖周期影响的研究

试验选用120只1日龄鹅随机分成4组，A组喂以玉米大豆为基础日粮未加锌的饲料，另3组在基础日粮中添加ZnSO₄·H₂O，使锌含量分别为40(B组)、110(C组) 和2000 mg/kg(D组)。应用流式细胞仪观测锌对鹅细胞周期和细胞凋亡的影响。结果显示锌添加量为110 mg/kg时，鹅血液淋巴细胞、胸腺、脾脏细胞的增殖指数和DNA含量最高。低锌和高锌饲料可以引起血液淋巴细胞的凋亡。     

高锌对雏鸡免疫功能影响的研究

1日龄艾维茵肉鸡健雏200只随机分为4组，Ⅰ组(基础日粮，Zn100mg／kg)、Ⅱ组(基础日粮 Zn1400mg／kg)、Ⅲ组(基础日粮 Zn1900mg／k)和Ⅳ组(基础日粮 Zn2400mg／k)，试验期7周。病理组织学观察可见免疫器官的淋巴细胞减少，淋巴滤泡形成较少，其皮质变薄、髓质增宽并可见髓质部淋巴细胞减少。淋巴器官发育和外周血淋巴细胞的分裂增殖受抑，外周血T淋巴细胞的成熟率显著降低并引起其亚群CD4、CD8数量和组成的变化，导致机体细胞免疫和体液免疫功能的降低；雏鸡红细胞C3b受体花环率下降和免疫复合物花环率升高，引起红细胞免疫黏附功能降低。结果表明，日粮高锌可致雏鸡免疫功能受损。