刺五加叶多糖的分离纯化及免疫活性研究

研究刺五加叶水溶性多糖结构信息和免疫活性。采用热水提取、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白后得到刺五加粗多糖,粗多糖经EDAE-SepharoseFastFlow离子交换柱和SephadexG-75凝胶过滤柱2次纯化,得到均-多糖组分ASP-2—1;ASP-2—1经三氟乙酸水解、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化、毛细管区带电泳法（CZE）测定其单糖组成;高效凝胶渗透色谱法测定其纯度和分子量;体外脾淋巴细胞增值试验测定其免疫活性。从刺五加叶中分离纯化得到的均-多糖组分SPA-2—1主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、果糖、鼠李糖、木糖等6种单糖组成,摩尔比为27．33：8．92：3．03：1：7．59：20．51,其分子量为13．6KD;小鼠脾淋巴细胞增殖试验表明,SPA-2—1可显著促进脾淋巴细胞的增殖,刺五加叶多糖SPA-2—1具有较强的体外免疫活性。     

山莓叶乙醇提取物与抗生素的协同抑菌效果研究

采用K-B纸片法检测山莓叶乙醇提取物(RE)、抗生素对3种致病菌(大肠杆菌、痢疾志贺氏菌、沙门氏菌)的最低抑菌浓度(MIC),再将RE与抗生素联合使用,用棋盘法与K-B纸片法相结合进行抑菌效果评价.结果显示:对于大肠杆菌、痢疾志贺氏菌、沙门氏菌,RE的MIC分别为6.250、6.250、3.125 mg/mL;RE与金霉素协同使用的分级抑菌浓度(FIC)最小值分别为0.313、0.375和0.313,协同抑菌效果最好的配比分别为1/8MIC1∶1/2MIC2、1/4MIC1∶1/2MIC2和1/8MIC1∶ 1/2MIC2;RE与净球散协同的FIC最小值分别为0.375、0.313和0.375,协同抑菌效果最好的配比分别为1/4MIC1∶1/2MIC2、1/8MIC1∶1/2MIC2和1/4MIC1∶1/2MIC2.大肠杆菌、痢疾志贺氏菌和沙门氏菌山莓叶乙醇提取物的浓度控制在1/4～1/8MIC1,金霉素和净球散浓度均为1/2MIC2,均有较强的协同抑菌效果.     

山莓生态习性与叶的解剖结构观察

对湖南省广泛分布的山莓实地踏察和生态习性观察表明,山莓系荒地的一种先锋植物,耐贫瘠,适应性强,属阳性植物.在林缘、山谷阳坡生长,有阳叶、阴叶之分,是湖南省植被的一个广布种.叶的解剖结构为典型的双子叶植物二面叶,由表皮、栅栏组织、海绵组织和维管束组成.叶柄由表皮、基本组织和维管束组成.叶片显著特点为:第一,单细胞表皮毛的数量多于腺毛.腺毛头部大略为球形,多细胞柄部较长,由一行或两行细胞组成.第二,幼叶、阴叶栅栏组织呈“小丘”状,阳叶栅栏组织细胞体积较小,排列紧密,孔隙度小,海绵组织疏松,气下室空腔大.第三,主脉、叶柄的厚角组织和薄壁细胞内多数有晶簇,成含晶异细胞.     

桉叶提取物抑制黄嘌呤氧化酶活性成分的分离纯化及其动力学研究

为了对尾巨桉属广林9号品种桉叶提取物进行体外抑制黄嘌呤氧化酶（XOD）活性研究,并对其主要活性成分进行分离纯化、结构鉴定及抑制动力学研究。采用高效液相色谱法（HPLC）检测酶反应生成尿酸的量,以甲醇-K2HPO4缓冲液(50mmol/L,pH值7.5)(5：95)为流动相,检测波长为290nm,测定了桉叶的不同溶剂提取物及其萃取组分对XOD活性的抑制作用,确定了最佳提取条件,并采用Diaion HP-20大孔树脂、反相硅胶柱层析法和制备液相色谱仪进行分离纯化。确定桉叶中最高活性单体为鞣花酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷酸和五没食子酰葡萄糖,测得其IC50分别为22.51、32.96、31.75 μg/mL曰并通过酶抑制动力学试验比较了他们的抑制类型和Ki值,得出鞣花酸的Ki值最小、为1.048μg/mL,可知其抑制黄嘌呤氧化酶活性效果在3种活性单体中最优。     

山莓叶三萜对大鼠免疫功能的影响

为探明山莓叶三萜的免疫调节作用,腹腔注射环磷酰胺诱导大鼠免疫低下.将成模后大鼠分别连续灌服生理盐水和0.25、0.50、1.00 mg/mL山莓叶三萜精提物(以下简称模型对照组(CK2)、低浓度组、中浓度组和高浓度组),每天灌服1次,1 mL/次,连续15d.试验结果:各模型组大鼠的廓清指数和吞噬指数均随山莓叶三萜精提物浓度的升高呈上升趋势,但廓清指数各组间的差异不显著.中浓度组大鼠血清中的白细胞介素-2 (IL-2)含量显著低于CK2,高浓度组的极显著低于CK2.低浓度组大鼠血清中的IL-6含量低于CK2,但二者差异不显著;中浓度组和高浓度组均极显著低于低浓度组和CK2,高浓度组极显著低于除中浓度组外的其他模型组.结果表明,山莓叶三萜具有一定的免疫调节作用(山莓叶三萜提取物能提高大鼠巨噬细胞的吞噬能力;对大鼠IL-2、IL-6分泌具有抑制作用).     

甘蔗叶多糖的分离纯化及其体外活性分析

以甘蔗叶为原料,采用机械力辅助超声法提取甘蔗叶粗多糖。经除蛋白、除色素、除小分子杂质等预处理后,用DEAE-52纤维素离子柱及DEAE-琼脂糖凝胶FF离子柱对甘蔗叶粗多糖进行分离纯化,得到SCLP-1和SCLP-5两种甘蔗叶纯多糖,并对其红外吸收特征、抑菌性能和抗氧化性能进行进一步研究。结果表明：甘蔗叶粗多糖提取率为1.8%,除蛋白率为39.8%,除蛋白过程多糖保留率为58.6%,除色素率为67.9%;除色素过程的多糖保留率为60.2%,除小分子杂质过程的多糖保留率为96.8%。红外光谱扫描结果显示, SCLP-1和SCLP-5这两种甘蔗叶纯多糖均具有多糖特征吸收峰;抗氧化试验结果显示,SCLP-5的抗氧化能力略高于SCLP-1的抗氧化性但均低于V_C;抑菌试验结果显示,两种纯化组分对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有良好的抑制作用,且对大肠杆菌的抑制效果优于金黄色葡萄球菌。     

水稻离体叶抗稻瘟病鉴定方法研究

[目的]筛选一套较为完善的适宜于水稻稻瘟病抗性叶片离体鉴定的方法。[方法]从保绿剂对离体叶保绿效果的影响、保绿剂对孢子在离体叶上萌发率的影响、不同孢子接种方法对叶片发病的影响和孢子悬浮液浓度、温度对稻瘟病病原菌染叶片效果的影响几方面对水稻稻瘟病抗性叶片离体鉴定方法的影响因素进行了研究。[结果]以6-BA作为保绿剂,浓度在50-75mg／ml范围内保绿效果较好,叶片几乎全部保绿。接种方法以喷雾法与液滴法较好,孢子萌发率较高,分别达到了84．7％、86．5％,浸泡法不适合叶片离体鉴定。温度为28℃时,接种用孢子悬浮液的浓度1×10^5～2×10^5个／ml较为合适。叶片发病期间温度低于28℃,潜育期有所延长。[结论]得到了行之有效的水稻抗瘟性叶片离体鉴定方法。     

大孔树脂分离纯化柞树叶总黄酮及其抗氧化活性研究

[目的]研究柞树叶总黄酮的纯化工艺及抗氧化活性.[方法]采用静态吸附与解析的方法,通过比较6种大孔树脂的吸附和解析性能,优选适宜的大孔树脂,并优化适合分离柞树叶总黄酮的解析条件.以VC为对照,对其还原力、DPPH自由基(DPPH·)和超氧阴离子自由基(O2-·)的清除能力进行研究.[结果]D101型大孔树脂纯化柞树叶总黄酮吸附与洗脱效果最好,其纯化最佳工艺条件为粗提液浓度0.55 mg/mL、上样流速1.5 mL/min、洗脱剂40％乙醇(V/V)、洗脱流速1.5 mL/min,柞树叶总黄酮纯度可达65.5％;分离纯化后柞树叶总黄酮具有良好的总还原能力以及清除DPPH自由基和抗超氧阴离子自由基活性,其总还原力大于VC的还原力,当质量浓度为0.03 mg/mL时,对DPPH自由基和抗超氧阴离子自由基的清除率分别为85.9％和65.9％.[结论]D101大孔树脂可用于柞树叶总黄酮的分离纯化,柞树叶总黄酮具有较强的抗氧化活性.     

柑桔溃疡病菌离体叶接种检验法的研究

对柑桔溃疡菌的离体叶接种检验法进行了研究和技术规范。结果表明 ,离体叶接种法是一种效果直观可靠、操作简便易行的检验溃疡病菌的方法 ,其检测水平可达到 1.5 5× 10 3 -4 cfu/ml;其技术规范为 :供接种的柑桔品种应为甜橙类感病品种 (如脐橙 ) ,供接种的离体叶片以达到定型大小的新梢成叶最佳 ;采用针刺后滤纸片贴敷菌液接种 ,最适孵育温度为 2 8～ 32℃ ,最佳保湿方法为吸水纸保湿法。     

辣椒疫病抗性离体叶鉴定法研究

通过比较疫病抗性不同的2个辣椒Capsicum annuum L.品种的离体叶接种浓度、发病温光条件及叶位对抗性鉴定结果的影响,确定了辣椒疫病抗性离体叶鉴定技术,即在辣椒初花期至始果期以自生长点倒数的第4～6展开叶作为测定叶,用0.1 mL游动孢子2×104～3×104 mL-1接种,在25 ℃、光照(3 000 lx)12 h/d的发病条件下,可获得理想的抗性鉴定效果.利用该鉴定法对38份辣椒材料进行了抗性鉴定,并与喷雾法和灌根法的鉴定结果进行了比较,结果表明离体叶法能有效地区分出辣椒品种对疫病的抗性.根据抗级划分,离体叶法的鉴定结果与两者的吻合率分别为76.3%和68.4%.     

竹叶多糖分离纯化及抗氧化能力的研究

对超临界CO2流体萃取技术提取的竹叶粗多糖采用分级醇沉、脱蛋白质及纤维素柱层析等技术分离纯化,研究分离纯化后的竹叶多糖产物的物化指标。研究结果表明:经超临界CO2流体萃取技术提取得到的毛竹叶粗多糖,采用体积分数为70%的乙醇沉淀,得到预纯化产物,预纯化产物得率17.75%,多糖含量9.586 mgg,总抗氧化能力2.556 mgg VC;预纯化产物再经Sevag法脱蛋白质及DEAE-52纤维素层析柱层析,获得一种中性竹叶多糖,其平均分子量为5.051×104,IC50值为0.178 mgg竹叶多糖,与VC(IC50值为0.158 mgg)相比,具有较好的DPPH清除能力。      

菲律宾蛤仔凝集素的分离纯化及抑菌活性研究

采用Cellulose DE52离子交换层析、Sephadex G- 100分子筛层析及TSK G3000PWXL凝胶色谱柱HPLC从菲律宾蛤仔Ruditapes philippinarum中分离纯化出具有N-乙酰半乳糖酰胺(N- acetyl- D- galactosamine,GaINAc)和猪胃黏蛋白(Mucin from porcine stomach,PSM)特异性的菲律宾蛤仔凝集素(简称为MCL-T).SDS-PAGE分析结果表明,MCL-T的相对分子量为148000,含有62000和36000的亚基.抑菌试验结果表明,MCL-T对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis有较高的抑菌活性.对MCL-T中Trp残基、-S-S-、-SH以及Tyr残基进行化学修饰后,MCL-T对金黄色葡萄球菌的抑菌活性丧失;对其-S-S-进行化学修饰后,MCL-T对枯草芽孢杆菌的抑菌活性影响不大,而对其-SH、Trp残基和Tyr残基进行化学修饰后,MCL-T对枯草芽孢杆菌的抑菌活性丧失.研究表明,MCL-T 肽链上的氨基酸残基状态与其抑菌活性有关.     

牛红细胞源抗菌肽的分离纯化与活性鉴定

【目的】分离纯化牛红细胞中的抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs),并对其体外抗菌活性进行初步检测。【方法】以中国荷斯坦奶牛血液为材料,通过离子交换层析法和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)纯化抗菌肽,用琼脂糖平板扩散法测定其抗菌活性,并用质谱法测定其分子质量。【结果】牛血液红细胞粗提物经离子交换层析获得的阳离子峰有抗菌活性;阳离子峰经RP-HPLC纯化后,共得到4个峰(F1、F2、F3和F4),其对大肠杆菌均具有抗菌活性,F1峰和F3峰对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性,仅F1峰对白色念珠菌具有抗菌活性;经质谱分析,F1峰纯化肽的分子质量为2 562.40 u。【结论】成功地从牛红细胞中分离纯化到了AMPs;F1峰中AMPs的抗菌谱较广,抗菌活性较强。     

鲍鱼内脏多糖分离纯化与抗氧化活性评价

[目的]分离纯化鲍鱼内脏多糖(Abalone viscera polysaccharide,AVP),并评价其抗氧化活性,为AVP的高值化利用提供参考依据.[方法]以鲍鱼内脏为原料,采用酶法提取并初步纯化出AVP,测定其DPPH自由基清除率、羟自由基(OH自由基)清除率和还原力3个抗氧化指标,评价AVP抗氧化能力;同时用葡聚糖凝胶G-100柱层析分离AVP,并对分离出的组分进行抗氧化能力比较.[结果]AVP质量浓度在1~10 mg/mL时,DPPH自由基清除率线性方程为y=9.715x+1.0182(R2=0.9958),半抑制浓度(IC50)为5.04 mg/mL;OH自由基清除率线性方程为y=6.2778x-8.5275(R2=0.9603),IC50为9.32 mg/mL;还原力线性方程为y=0.0782x+0.0045(R2=0.9989),A700,0.2为2.50 mg/mL.AVP具有一定的抗氧化能力,但与抗坏血酸(Vc)相比,其抗氧化能力较弱.AVP经葡聚糖凝胶G-100柱层析可分离出两个组分(AVP1和AVP2),AVP1和AVP2均具有一定的抗氧化活性,且AVP1抗氧化能力强于AVP2.[结论]通过葡聚糖凝胶柱层析可从AVP中有效分离出AVP1和AVP2两个组分,其中AVP1的抗氧化能力更强,在抗氧化添加剂及保健品等领域具有较好的开发利用前景.     

昆仑雪菊中血管紧张素转化酶活性抑制成分的分离鉴定

[目的]从昆仑雪菊中分离纯化抑制血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)活性成分,鉴定其化学结构,并评价其对ACE的抑制活性.[方法]以抑制ACE活性为指标,筛选出最佳的昆仑雪菊萃取溶剂,提取得到粗提物,活性跟踪分离纯化粗提物中的单体化合物,并对单体化合物的活性进行评价.[结果]最佳的提取溶剂为甲醇,利用常压硅胶柱层析和Sephedex LH-20柱层析从粗提物中分离得到5个单体化合物,采用核磁共振(NMR)和电喷雾质谱(ESIMS)鉴定其化学结构:化合物1为咖啡酸甲酯;化合物2为脱镁叶绿素a;化合物3为β-香树脂;化合物4为异奥卡宁-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷;化合物5为对香豆酸甲酯.活性测试结果表明:化合物1、4和5都表现出了较强的抑制ACE活性,其中化合物4对ACE的抑制活性最强,IC50为(167.02±4.32) μmol·L-1,其次为化合物1和5,IC50分别为(237.74±5.82) μmol·L-1和(331.57±4.69) μmol ·L-1,提示这些化合物可能为昆仑雪菊中潜在的降血压物质.[结论]本研究结果为深入研究昆仑雪菊的降血压作用机制提供了物质基础.     

油茶叶多酚纯化工艺优化及其对油脂的抗氧化作用

[目的]探究适宜纯化油茶叶多酚的大孔树脂及工艺,以获得活性更强的油茶叶多酚,为提高其产品附加值提供参考依据.[方法]以油茶叶多酚粗提液为原料,采用8种不同型号大孔树脂对油茶叶多酚进行静态吸附和解吸,从中筛选出效果较好的树脂,确定纯化油茶叶多酚的最佳工艺,并考察纯化前后的油茶叶多酚对油茶籽油和花生油的抗氧化效果.[结果]大孔树脂HPD-600适宜用于纯化油茶叶多酚,吸附量为49.77 mg/g,解吸量为40.38 mg/g;纯化油茶叶多酚的最佳工艺为:上样质量浓度2 mg/mL,上样流速2 mL/min,洗脱液为60%乙醇溶液,洗脱流速3 mL/min,洗脱体积60 mL;纯化油茶叶多酚的纯度为40.05%,可有效延缓油脂氧化,呈剂量—效应关系,且活性强于粗提油茶叶多酚.[结论]纯化后的油茶叶多酚活性更强,是一种具有发展前景的新型天然抗氧化剂.     

Isolation, purification and identification of three peptaibols from Trichoderma koningii with antibiotic activity against Ralstonia solancearum

The use of microorganisms for biological purposes has become an effective alternative to control plant pathogens. Trichoderma koningii Smf2 was chosen from eight Trichoderma strains for its thermostatic metabolites with antibiotic activity against Ralstonia solancearum Smith. Exclusion chromatography (LH20) was used twice to partially purify targeted metabolites combined with biological test. LC/ESI-MS, a powerful tool for rapid identification and sequence determination of peptides,…     

不同品种嘉宝果叶提取物的酚类成分及生物活性分析

【目的】研究3个品种嘉宝果叶提取物的酚类成分和生物活性,为嘉宝果叶的开发利用提供参考依据。【方法】测定大红钻、保利斯塔和乔尼尔3个嘉宝果品种的叶片提取物总酚和黄酮含量,利用超高效液相色谱—串联质谱法(UPLC-MS/MS)分析提取物的酚类成分,并测定提取物的抗氧化活性[1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)、2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS⁺)、超氧阴离子自由基(O₂^-·)清除能力及总抗氧化能力]和降糖活性(α-葡萄糖苷酶抑制活性、α-淀粉酶抑制活性),对总酚含量与生物活性的相关性进行分析。【结果】3个品种嘉宝果叶提取物的总酚和黄酮含量分别为458.78～535.51 mg GAE/g和99.46～233.42 mg RE/g,总酚含量以乔尼尔最高,黄酮则以大红钻最高。大红钻和保利斯塔叶片的酚类成分以没食子酸、鞣花酸、儿茶素和表儿茶素含量较高,乔尼尔则以没食子酸、鞣花酸和槲皮素-3-O-葡萄糖苷含量较高。乔尼尔叶提取物的DPPH·和ABTS+清除能力最强,半数清除浓度(...