纳豆芽孢杆菌在奶牛瘤胃和十二指肠存活规律

通过体内外试验研究纳豆芽孢杆菌（Bacillus subtilisnatto,BSN）在奶牛胃肠道存活规律及停留时间。试验1：经过滤的荷斯坦奶牛瘤胃液或十二指肠液加入BSN菌液（芽孢含量为10^5cfu／mL）,对照组不添加;将处理好的发酵液于39℃厌氧培养,瘤胃液检测发酵0、6、12、24、48和72h挥发性脂肪酸浓度和芽孢数,十二指肠液检测发酵0、1、2、3、4、5和6h芽孢数。试验2：选取7头瘘管牛随机分成2组,处理组（4头）通过瘤胃瘘管投放100mL．BSN菌液（芽孢含量为10^8cfu／mL）,对照组（3头）不投放;投放后6、12、24、48和72h采集瘤胃液、十二指肠液和粪样。BSN在瘤胃液发酵过程中芽孢数呈先增高后降低的趋势,发酵24和72h的存活率分别为191．3％和175．9％,并促进了丙酸和丁酸的产生（P〈0．05）,减少了乙酸、异丁酸和异戊酸的产生（P〈0．01）。BSN在十二指肠液中发酵1h内芽孢数有上升的趋势（P〉0．05）,发酵3h后急剧降低,发酵1、3和6h的存活率分别为159．2％、121．4％和35．7％。体内试验结果表明瘤胃、十二指肠和粪便中的芽孢数均随投喂时间的延长而逐渐降低,48h后各位点均很难检测到芽孢。总之,BSN能耐受奶牛瘤胃液环境,并能影响瘤胃发酵,在十二指肠液的耐受时间约为3h,但不能在奶牛胃肠道中定植。     

一株发酵床接种用枯草芽孢杆菌的分离鉴定

从发酵床养殖垫料堆体中分离筛选到一株细菌,再次接种锯末、稻壳与鸭粪的混合物,与空白对照组相比,堆积时间缩短3天,单位发酵垫料对粪污的处理能力增加,垫料在使用28～49天间,氨气排放降低30%～50%。经16S rDNA序列比较,该菌为枯草芽孢杆菌。     

高产蛋白酶纳豆芽孢杆菌的分离筛选与鉴定

以北京、大连和日本3个产地的纳豆产品为试验材料,从中筛选可用于畜禽生产的纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)蛋向酶高产菌株.先通过酪蛋白平板初筛得到9株芽孢杆菌,再以N1型纳豆芽孢杆菌为模式菌株,对初筛得到的菌株进行菌落和菌体形态观察、生理生化鉴定,确定有5个菌株为纳豆芽孢杆菌.测定5个菌株48 h发酵液中蛋白酶活性,结果表明:菌株NB1为蛋白酶高产菌株,发酵液中蛋白酶活性为19.41 U·mL-1,产蛋白酶特性在6代内可保持稳定.     

一株枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化

通过正交优化试验对一株枯草芽孢杆菌的发酵培养基进行了优化,结果发现:当培养基中2%豆粕液浓度为15 g/L、红糖浓度为20 g/L、硫酸铵浓度为10 g/L时,在接种量为5%的情况下,采用此种配比的发酵培养基37℃培养24 h后,活菌数最高,可达4.21×1010CFU/ml。     

纳豆芽孢杆菌的分离鉴定及纳豆激酶高产菌株的筛选

分别从北京、大连和日本三个产地的纳豆食品中分离纯化得到了9个具有纳豆芽孢杆菌典型菌落特征的芽孢杆菌单菌落,与模式菌株纳豆芽孢杆菌N1株分别从菌落形态、个体形态和生理生化试验三方面进行对比鉴定,结果表明,其中5株芽孢杆菌为纳豆芽孢杆菌。将这5株纳豆芽孢杆菌分别在酪素平板上划线初选,得到了298株具有蛋白酶活力的菌株,从中筛选出活性最高的5株命名为:NB、NC、ND、NE和NF,测定各株发酵液的纳豆激酶酶活力,结果表明NB、NC和ND3株具有较高纳豆激酶活性,酶活力分别达到了1041.37、1125.13和1804.64IU·mL-1。     

产气法评价纳豆芽孢杆菌对瘤胃液体外发酵的影响

【目的】评价纳豆芽孢杆菌对瘤胃液体外发酵的影响。【方法】采用瘤胃液体外发酵产气法,以不添加纳豆芽孢杆菌为对照,动态观测基础日粮中纳豆芽孢杆菌添加量分别为1.5×108/g(处理Ⅰ)和7.5×108/g(处理Ⅱ)对瘤胃液体外发酵产气量、pH值、NH3-N质量浓度和各挥发性脂肪酸浓度的影响。【结果】与对照相比,处理Ⅱ产气量提高了11.89%(P<0.05),瘤胃pH值显著降低(P<0.05),NH3-N质量浓度提高了16.07%(P<0.05),乙酸、丙酸和总挥发性脂肪酸浓度分别提高了10.43%,50.35%和20.70%(P<0.05);处理Ⅰ除丙酸浓度显著高于对照(P<0.05)外,其他各指标均与对照无明显差异(P>0.05)。【结论】纳豆芽孢杆菌培养物在基础日粮中的添加量为7.5×108/g时,能促进瘤胃液对饲料底物的降解代谢。     

纳豆芽孢杆菌益生菌株B2的筛选与鉴定

根据纳豆芽孢杆菌水解淀粉的生物学特性,采用稀释平板分离法,从中国传统食品豆豉中筛选出2株纳豆芽孢杆菌优势益生菌株。通过比较这2个分离菌株与实验室保存的纳豆芽孢杆菌菌株的耐受性和抑菌能力,从中选出1株最优菌株B2。     

纳豆芽孢杆菌高密度发酵条件优化

为有效提高纳豆菌的产率,达到高密度发酵培养的效果,对纳豆芽孢杆菌高密度发酵培养的培养基成分和培养条件进行了优化试验。采用单因素和正交试验方法,最终确定最佳培养基为淀粉20．0g／L,酵母粉2．0g／L,蛋白胨2．0g／L,NH4C11．0g/L,K2HPO4 2．0g／L,KH2P042．0g／L,MgSO41．0g/L。最佳培养条件为：初始pH值6．5;接人菌种的体积分数为0．05;培养温度35℃。在20L发酵罐中高密度发酵培养,纳豆芽孢杆菌活菌数达2．95×10^14 cfu／L,较优化前提高近一个数量级。     

纳豆激酶液体发酵条件的优化

以纳豆枯草芽孢杆菌（Bacillus subitilis natto）为出发菌株，对其液体发酵生产纳豆激酶（Nattokinase，NK）的培养基组成（碳源、氮源、碳氮比和金属离子组成）和培养条件（温度、pH值，发酵时间、接种量和装液量）对产酶量的影响进行了研究。结果表明：液体发酵培养基的最佳碳源为木糖，浓度为1．5％；最佳氮源为大豆蛋白胨，浓度为2．0％；添加无机盐组分为MgSO4 0．05％、CaCl2 0．02％、K2HPO4／KH2PO 40．1％／0．1％。发酵培养的最佳温度为37℃，pH7．0时有利于菌体产酶，最适装液量为100mL／250mL，接种量以2％为最佳，最适种龄为18h；发酵周期为3d。通过优化培养基和发酵条件，产酶量达到1081 U／mL。     

纳豆芽孢杆菌的分离纯化及鉴定

根据纳豆芽孢杆菌耐热耐盐的特征分离纳豆芽孢杆菌菌株.由纳豆粉中分离纯化出1株纳豆菌株,由家庭自制纳豆中分离纯化出5株纳豆菌株,并对这6株纳豆芽孢杆菌的细胞、菌落形态及生理特性进行研究.结果表明,这6株纳豆菌均属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

纳豆芽孢杆菌脲酶酶学性质的研究

为了研究不同的碳源、氮源和不同的培养条件对纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)脲酶产量的影响,以及不同温度、pH和几种金属离子对脲酶活性的影响,采用了滴定法(国标法,标准号GB/T 1356787-1997)和Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定不同碳源、氮源和不同培养条件培养的纳豆芽孢杆菌(CGMCC No.2801)脲酶总活性和浓度,以及不同温度、pH和金属离子条件下的脲酶活性。结果表明,当以谷氨酸为氮源、蔗糖为碳源、pH7、37℃条件下培养12h时脲酶的浓度最高,为57.2μg/mL。脲酶催化反应的最适条件为35℃、pH 7。实验选用的5种金属离子对脲酶活性均有抑制作用,抑制强度为Cu2+Zn2+Fe2+Mg2+Mn2+,最大抑制率为36.4%。这些结果为纳豆芽孢杆菌脲酶的进一步研究及低产氨纳豆芽孢杆菌的构建奠定了基础。     

纳豆生产优良菌株的筛选研究

[目的]筛选出最优的纳豆生产菌株。[方法]以实验室现有的16株纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)为出发菌株,通过蛋白酶、纳豆激酶及产黏(r-PGA)性能的综合指标,筛选出适合纳豆生产的纳豆芽孢杆菌。[结果]综合考虑,菌株DL-1521具有最高的蛋白酶、纳豆激酶和较高的产黏特性,具备作为纳豆生产优良菌种的特性。[结论]筛选结果可为纳豆直投式菌剂的制备提供优良菌株。     

纳豆菌的发酵条件优化及纳豆制备方法改良

对实验室分离到的纳豆菌Y-07进行了发酵条件的优化,确定了最佳碳源、氮源分别为葡萄糖和大豆蛋白胨,最佳发酵温度为35℃。通过制备方法的改良得出,添加适当比例的大豆蛋白胨和葡萄糖,可以提高纳豆制品的质量。     

纳豆芽孢菌剂消除小天鹅转群应激的研究

[目的]在小天鹅放养初期饲喂纳豆芽孢菌剂,研究纳豆芽孢菌剂消除小天鹅转群应激的临床效果。[方法]在转群小天鹅精饲料中加入纳豆芽孢菌剂,纳豆芽孢菌剂为精料量的10%,观察小天鹅的精神状态、体态行动、喙的颜色、羽毛色泽及成活率等。[结果]饲喂纳豆芽孢菌剂16 d后,小天鹅的体质、粪便、采食量等指标显著改善,圈养及外放后未见死亡。[结论]纳豆芽孢菌剂能起到改善小天鹅转群应激反应和降低死亡率的作用。     

纳豆芽胞杆菌KX株纳豆激酶基因的克隆及序列分析

设计引物进行PCR反应,从纳豆芽孢杆菌基因组DNA中扩增和克隆纳豆激酶基因.序列分析表明,所克隆的纳豆激酶基因序列全长1 473 bp,其中阅读框架1 143 bp,阅读框架以GTG为起始密码子,编码包括信号肽、前导肽、成熟肽在内的381个氨基酸;表达产物为前纳豆激酶原,其中N端29个氨基酸组成信号肽,随后的77个氨基酸组成前导肽,最后的275个氨基酸组成成熟肽.     

纳豆芽孢杆菌对泌乳期奶牛产奶量、牛奶品质的影响

文章旨在研究纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis Natto)对泌乳期奶牛生产性能、牛奶品质与机体免疫的影响。选用泌乳期、胎次、产奶量、体重相似的荷斯坦奶牛36头,采用完全随机分组原则分成3组,每组12头。试验期为60d,预饲期10d,分别在试验期的0、30、60d采集奶样,每周测定1次产奶量。试验结果表明,添加芽孢杆菌能显著提高产奶量(P<0.05)、改善乳脂率、提高乳蛋白率(P<0.05)、增加牛奶中干物质含量和降低牛奶中体细胞数。     

纳豆芽孢杆菌rocG基因和ure基因敲除载体的构建

rocG基因和ure基因分别编码纳豆芽孢杆菌中2个与产氨相关的酶--谷氨酸脱氢酶编码和尿素酶。为构建这2个基因的敲除载体,通过PCR分别获得了2个靶基因的上下游旁邻片段和抗性筛选基因nisI。将上游旁邻片段、nisI和下游旁邻片段按次序克隆到革兰氏阳性菌基因组整合质粒pMUTIN4中。限制性内切酶酶切图谱分析及测序结果显示成功构建了纳豆芽孢杆菌rocG基因和ut＇e基因的敲除载体pMUTIN4-rocG：nisI和pMUTIN4-“M：：nisI。该质粒的构建,为同源重组获得低产氨纳豆芽孢杆菌工程菌株奠定了基础。     

Effect of supplemental Bacillus culture on rumen fermentation and performance in dairy cattle

Two parts were involved in this experiment.In experiment 1,32 Chinese Holstein cows with relatively similar body condition,lactation number and days in milk were selected.The cows were assigned in a randomized complete block design trial to determine the effect of supplemental Bacillus cultures to diet on production performance in dairy cattle.Four treatments,i.e., Bacillus licheniformis(strain number 1.813)group,Bacillus subtilis(strain number 1.1086)group,Bacillus cereus var.mvcoides (strain number 1.260)group and control group.Each treatment had eight replicates,each replicate had one cow,50 g per head per day.Results showed that Bacillus licheniformis group increased the milk yield(P<0.05).The other two groups didn’t have significant effect on milk yield than the control group(P>0.05).In experiment 2,3 Chinese Holstein cows with permanent fistulas were used.3×3 Latin squares were assigned to three diets:Bacillus lincheniformis culture,Bacillus subtilis culture and control.Bacillus licheniformis culture increased total rumen microorganism(P<0.05),decreased the ammonia N concentration at 2,4 h(P<0.05). Bacillus licheniformis culture increased the total volatile fatty(P>0.05),increased the rate of acetic acid to propionic acid(P>0.05). Bacillus licheniformis culture decreased the methane production(P<0.05).     

猪源枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其特性研究

为筛选高生物活性的益生菌菌株,通过热处理从健康猪肠道内容物、粪便、土壤等来源筛选具有较高抗逆性的菌株,综合形态特征、生理生化特性及16S r DNA序列分析进行鉴定;通过耐人工胃液、耐人工肠液、耐胆盐、耐高温、产酶试验、药敏试验、抑菌试验来研究菌株的特性。综合鉴定菌株ZZS16-3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其在p H为2.0的人工胃液中,存活率可达到65.8%,在胆盐浓度为0.3%时存活率为51.2%,在100℃处理3 min后其存活率达到11.2%,可产生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等,对于绝大多数的药物是敏感的,对金黄色葡萄球菌则有明显的抑菌效果。枯草芽孢杆菌ZZS16-3具有较强的抗逆性和潜在的益生性能,为研制微生态制剂提供了优良的菌种参考。