生长猪消化道大肠杆菌、乳杆菌和双歧杆菌凝集素活性及其化学性质

 采用红细胞凝集试验 (HA)和凝集抑制试验 (HIA) ,对大肠杆菌、乳杆菌和双歧杆菌凝集素活性和化学性质进行了研究。HA结果表明 ,在 3种菌的细胞表面均存在凝集素并能够凝集猪和兔红细胞 ,且乳杆菌对 2种红细胞的凝集活性较高。细菌经化学试剂 (高碘酸钠、SDS、EDTA、LiCl)和酶 (蛋白酶、胰蛋白酶、脂酶 )处理后的HA结果表明 ,凝集素为糖蛋白类物质。HIA的结果表明 ,大肠杆菌的凝集反应可被甘露糖 (1.43mg/ml)、半乳糖(2 .5 3mg/ml)抑制 ;乳杆菌的凝集反应可被鼠李糖 (1.45mg/ml)、甲基 β 呋喃半乳糖苷 (3.75mg/ml)抑制 ;双歧杆菌的凝集反应可被鼠李糖 (2 .2mg/ml)、半乳糖 (2 .3mg/ml)、墨角藻糖 (3.14mg/ml)、阿拉伯糖 (3.44mg/ml)、甘露糖 (3.74mg/ml)和果糖 (3.98mg/ml)抑制。兔红细胞经神经氨酸酶修饰后可显著提高 3种菌的凝集素活性 ,而经 β 半乳糖苷酶修饰后大肠杆菌对其凝集活性完全丧失 ,而后二者的凝集活性不受影响。上述结果提示 ,3种菌对红细胞的凝集反应是以细菌表面的糖蛋白类物质特异性识别红细胞表面的受体的方式来介导的。     

生长猪胃肠道乳酸菌、双歧杆菌和大肠杆菌的数量和分布规律

本研究采用严格的厌氧微生物培养方法，对5头生长猪进行了测定。结果表明，在生长猪的胃肠道内容物中和粘膜上均有相当数量的乳酸菌、双歧杆菌和大肠杆菌分布，但乳酸菌的数量显著高于其他2种菌（P＜0．01）。3类菌在内容物中的分布为：乳酸菌在猪后肠内容物中的数量分布显著高于胃和小肠（P＜0．01）；双歧杆菌在盲肠内容物中数量最高（P＜0．01）；而盲肠和结构内容物中大肠杆菌的数量分布大于其他部位（P＜0．01）。粘膜的分布为：乳酸菌在结肠，双歧杆菌和大肠杆菌在盲肠粘膜上的数量分布显著高于其他各区段（P＜0．05）。猪胃肠道各区段中，除直肠内容物中双歧杆菌的数量显著高于大肠杆菌外（P＜0．01），其他各区段中2种菌的数量统计差异不显著（P＞0．05）；结肠和直肠粘膜上双歧杆菌的数量显著高于大肠杆菌（P＜0．05）。     

水貂源乳杆菌及双歧杆菌的分离鉴定

取健康水貂粪便样经过处理后用MRS、TPY选择培养基进行筛选,筛选出主要优势菌为乳杆菌和双歧杆菌。对所筛选出的乳杆菌和双歧杆菌进行分离培养、生化试验鉴定和PCR鉴定。结果表明,乳杆菌和双歧杆菌为革兰氏阳性菌,糖醇发酵试验为阳性,并能抑制大肠杆菌生长,但对沙门氏菌无抑制作用。乳杆菌PCR鉴定中,在230 bp处有特异性条带,双歧杆菌在260 bp处有特异性条带。此试验为水貂专用微生态制剂的研制奠定了基础。     

双歧杆菌发酵乳饮料的研究

对含双歧杆菌碳酸发酵乳饮料生产工艺的研究表明，采用嗜热链球菌和双歧杆菌单菌培养制生产发酵剂，混菌发酵工艺是可行的，发酵乳中的双歧杆菌活菌数达到１０＾９ｃｆｕ．ｍＬ＾－１。最佳发酵条件为：双歧杆菌：嗜热链球菌＝２：１，接种量６％，生长促进剂０．１％。发酵终点为ｐＨ≤４．７ＯＤ≥４．３，发酵时间为３－４ｈ。产品在４－５℃贮藏一周后，双歧杆菌活菌数在１０＾５ｃｆｕ．ｍＬ＾－１。     

嗜酸乳杆菌和婴儿双歧杆菌对肠道致病菌的抑制性

通过实验菌株发酵液对三种肠道致病菌生长抑制的研究 ,得出嗜酸乳杆菌 PB1、A878和婴儿双歧杆菌 PBa对致病菌的抑制性较强 ,形成明显的抑菌圈。 PB1、A878、PBa的抑菌机理主要是有机酸 ,其他抗菌类物质作用不明显     

双歧杆菌对病原菌粘附肉鸡肠粘液的影响

研究两歧双歧杆菌、禽大肠杆菌O78、大肠杆菌ATCC25922、鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌与肉鸡不同肠段粘液糖蛋白的粘附性能，探讨两歧双歧杆菌对四种病原菌的粘附排斥作用。结果表明，在不同的肠道部位，两歧双歧杆菌、鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌与肠粘液糖蛋白的粘附能力不同，而禽大肠杆菌O78、大肠杆菌ATCC25922在各肠段粘液上的粘附性能相近；在相同的肠道部位，所试菌与肠粘液糖蛋白的粘附能力有差异，其中两歧双歧杆菌的粘附作用最强；肠粘液糖蛋白经两歧双歧杆菌处理后，禽大肠杆菌O78、大肠杆菌ATCC25922和鸡白痢沙门氏菌的粘附作用受到抑制，而鼠伤寒沙门氏菌在十二指肠、空肠粘液上的粘附率未见下降。     

一种双歧杆菌发酵乳的研制

双歧杆菌作为一种典型的益生菌,其促进人体健康的有益作用越来越受到人们的重视。双歧杆菌乳制品利用双歧杆菌的益生作用在功能性乳制品的研发过程中也占有重要的一席之地。在一种双歧杆菌发酵乳的研制过程中,利用正交试验优化了这种双歧杆菌发酵乳的发酵条件:接种量4%、发酵温度40℃、菌种配比(保加利亚乳杆菌∶嗜热链球菌∶双歧杆菌)为3∶2∶1。     

猪巴氏杆菌大肠杆菌和葡萄球菌混合感染的诊治

对广西某猪场发病和死亡猪进行临床和实验室检验，诊断为猪巴氏杆菌、大肠杆菌和葡萄球菌混合感染所致。根据药敏试验结果，头孢三嗪、头孢哌酮、丁胺卡那、环丙沙星均对分离到的巴氏杆菌、大肠杆菌和葡萄球菌敏感，而对复方磺胺、青霉素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、氯霉素等常用抗菌素产生耐药。     

两歧双歧杆菌发酵榛子乳及其发酵特性的研究

用驯化后的两歧双歧杆菌对榛子乳进行发酵并研究了其发酵特性。结果表明:两歧双歧杆菌在榛子乳中具有良好的发酵特性。两歧双歧杆菌在添加5％乳糖的榛子乳中,37℃发酵8～12h,发酵酸度可达到80～93°T,活菌数达到10cfu/mL。     

双歧杆菌在仔猪肠道的粘附特性研究

用扫描电镜观察了１０株猪源双歧杆菌对仔猪不同肠段的粘附情况。结果表明：不同双歧杆菌菌株对肠道的粘附情况差异较大,其中有４株双歧杆菌粘附性较好,有粘附特性的以杆菌粘附能力与所作用肠段有关;异物可增增双歧杆菌的粘附;观察到１株未见报道的形态变异菌,杆状菌体上有多突起。     

二甲酸钾对断奶仔猪大肠杆菌和乳酸杆菌的影响

选择21日龄体况良好的三元杂交(杜洛克×长白×大约)断奶仔猪36头,按窝别分为4个处理,每个处理3个重复,每个重复3头.分别饲喂A(不添加二甲酸钾)、B(添加0.7％二甲酸钾)、C(添加1.1％二甲酸钾)和D(添加1.5％二甲酸钾)4种日粮,探讨二甲酸钾对断奶仔猪肠道大肠杆菌和乳酸杆菌的影响.试验期为25 d.在第13、25天收集仔猪早晨的粪便测定其肠道大肠杆菌和乳酸杆菌的含量.结果显示,与日粮中没有添加二甲酸钾相比,(1)日粮中二甲酸钾添加量为0.7％、1.1％和1.5％时,断奶仔猪肠道乳酸杆菌分别提高了32％ (P＜ 0.05)、24％和21％;(2)日粮中二甲酸钾添加量为1.5％时,断奶仔猪肠道中大肠杆菌数降低了34％(P＜ 0.01),且乳酸杆菌与大肠杆菌数比值明显提高.表明日粮中添加1.5％的二甲酸钾可以优化断奶仔猪肠道中菌群,提高仔猪的抗病能力,减少抗生素的用量.     

重组A型FMDV VP1基因乳酸杆菌穿梭表达质粒的构建及在大肠杆菌BL21中的表达

[目的]构建FMDV乳酸杆菌穿梭表达载体.[方法]从A型FMDV中克隆出VP1基因后,根据乳酸杆菌密码子偏好性对VP1进行优化,与表达载体pSIP411进行连接,并将连接产物转化到DH5α中筛选出阳性克隆菌,重组质粒酶切和PCR鉴定成功后再转化到BL21中,采用杆菌肽进行诱导表达.[结果]表达产物经SDS-PAGE和Western blottmy检测在24 kD处有明显的条带,证明VPl-pSIP411重组表达载体构建成功并在BL21中成功表达.[结论]为后续乳酸杆菌表达VP1蛋白研究奠定了基础.     

BBDL菌种制剂预防仔猪大肠杆菌病的效果

为探讨ＢＢＤＬ菌种制剂对仔猪大肠杆菌病的防治效果,给初生仔猪每天每头口服６３亿个ＢＢＤＬ菌为试验Ａ组,不给口服菌或药物的仔猪为空白对照。给断奶仔猪每天每头口服３１．５亿个菌为试验Ｂ组,以每天每头口服０．１ｇ痢特灵的断奶仔猪为对照。试验期７ｄ,观察ＢＢ－ＤＬ菌制剂对仔猪大肠杆菌病的预防效果。结果：初生仔猪服用ＢＢＤＬ菌制剂的仔猪保护率为１００％,空白对照发生大肠杆菌病２０％（Ｐ＜０．０１）。断奶仔猪的试验组保护率为１００％,痢特灵药物对照发病率１０％（Ｐ＜０．０１）,差异均极显著。从而得出结论：用ＢＢＤＬ菌制剂预防仔猪大肠杆菌病有良好的效果,可替代部分抗生药物。     

致病性大肠埃希菌对头孢噻呋的耐药性研究

[目的]以头孢噻呋为底物将大肠埃希菌标准菌株诱导为耐药菌株,研究诱导的耐药菌株对头孢噻呋产生耐药性的机制。[方法]用亚抑菌浓度法对标准菌株C83907和C83845进行诱导,诱导10代后用双纸片法和PCR扩增法,进行超广谱β-内酰胺酶（Extendspectrumβ-lactamses,ESBLs）检测;用试管2倍稀释法测定头孢噻呋对产ESBLs菌株的最小抑菌浓度值;对产生ESBLs的耐药菌株,用试管2倍稀释法测定了头孢噻呋与他唑巴坦钠以不同配比对产生ESBLs大肠埃希菌的最小抑菌浓度。[结果]诱导15代后,头孢噻呋对诱导菌的MIC值8～10μg/ml,且均检测出ESBLs;头孢噻呋与他唑巴坦钠质量比（1∶1～8∶1）联合使用对产生ESBLs的大肠埃希菌的最小抑菌浓度较头孢噻呋单独使用降低20～22倍。[结论]致病性大肠埃希菌对头孢噻呋产生耐药性的主要机制是产生了ESBLs。     

仔猪大肠杆菌·C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺

[目的]研究仔猪大肠杆菌、C型产气荚膜梭菌菌液的培养工艺。[方法]分别试验不同的培养时间、培养温度和接种剂量对大肠杆菌纤毛表达量和C型产气荚膜梭菌产生毒素的影响。[结果]大肠杆菌在接种剂量为3%～5%,在36～37℃条件下培养7 h,可产生较高含量的纤毛抗原;当接种剂量为1%～2%,C型产气荚膜梭菌C59-2菌株在35℃条件下培养16～20 h,可产生大量致死性毒素。[结论]该研究为研制具有较好效果的仔猪红痢、黄痢预防疫苗提供了依据。     

大肠杆菌感受态细胞转化能力影响因素的研究

探讨了大肠杆菌生长状态、转化溶液浓度、保存温度、冰上放置时间对感受态细胞转化能力的影响.结果表明,以100 mmol/L CaCl2为缓冲液,采用经活化培养的A6000.56的大肠杆菌JM109制备的感受态细胞,在冰上放置6h后转化,所得转化率最高.若感受态细胞要保存备用,液氮保存最好,其次-70℃,添加20%甘油利于冷冻保存,但添加保护剂对转化率有抑制作用.     

泰州地区仔猪大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性

为有效防治大肠杆菌病及控制其耐药性,从江苏泰州地区不同猪场腹泻猪粪便中分离细菌,经镜检、培养特性、生化试验和血清型鉴定,采用攻菌试验确定其致病性,获得6株致病性大肠杆菌,并进行药敏试验。结果表明:6株致病性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、羧苄西林、氟苯尼考和四环素全部耐药;对头孢呋辛、头孢曲松、红霉素、复方新诺明、链霉素、阿奇霉素普遍不敏感;对头孢他啶、头孢噻肟、多西环素、庆大霉素敏感性差异明显,部分耐药,部分敏感;对头孢吡肟、丁胺卡那霉素、环丙沙星和氧氟沙星均表现敏感;对氨苄西林、阿莫西林和阿奇霉素等20种常用抗菌药均表现6~15耐的多重耐药。     

猪致病性大肠杆菌致病机制及综合防治研究进展

肠致病性大肠杆菌感染是重要的猪肠道传染病,能引起肠上皮细胞特征性的A/E损伤,给养猪业造成了严重的经济损失。笔者简要概述了近几年来国内外对猪大肠杆菌病病原学及其防治等方面的研究进展,并对当前存在的问题进行了讨论。     

In Vitro Assessment of Probiotic Potential of Lactobacillus acidophilus and Antagonistic Activity Against Escherichia coli O157:H7

The antagonistic activity of Lactobacillus acidophilus KLDS1.0901, KLDS1.0902, KLDS1.1003 and NCFM against Escherichia coli O157: H7 were investigated in this study. The culture supernatants of all the L. acidophilus stains showed high bacteriostatic activities against E. coli O157: H7 and the bacteriostatic substances of their Cell-Free Supernatants (CFS) were preliminarily determined from organic acids. The bacteriostatic activity from CFS or viable L. acidophilus against E. coli O157: H7 was also assessed by using co-incubation methods, CFS had high bactericidal activity against E. coli O157: H7, no viable E. coli O157: H7 was detected when 5×107 cfu of E. coli O157: H7 was added to 5 mL of CFS and incubated at 37℃ for 2 h. However, L. acidophilus themselves had no bacteriostatic activity after directly contacted with E. coli O157: H7. The inhibition E. coli O157: H7 adhesion and colonization of L. acidophilus were also investigated based on competition, exclusion and displacement assays. L. acidophilus KLDS1.0901, KLDS1.1003 and NCFM strains were effective to displace E. coli O157: H7 from a Caco-2 cell layer in competition and exclusion assays. However, in displacement assay, all of the strains showed no significant antagonistic activities. Meanwhile, the probiotic potential of L. acidophilus strains was investigated based on adhesion assay to Caco-2 cells and anti-inflammatory effects by IL-8 produced in Caco-2 cells. The adhesion ability and anti-inflammatory effects of L. acidophilus strains showed a strain-dependent manner. In general,L. acidophilus KLDS1.0901 and NCFM showed better probiotic potential than KLDS1.0902 and KLDS1.1003. Thus, the use of L. acidophilus KLDS1.0901 and NCFM to prevent or treat of diseases associated induced E. coli O157: H7 in vivo was suggested.     

乳酸链球菌和干酪乳杆菌混合培养抑菌性的研究

采用牛津杯法对抑菌性进行测定,并对菌液的酸度、活菌数进行了检测。结果表明:混合培养乳酸链球菌和干酪乳杆菌36 h对大肠杆菌的抑制作用最强,抑菌圈直径达32.3 mm,活菌数对数值最高达到9.1。活菌数与抑菌性都较优的比例为乳酸链球菌∶干酪乳杆菌=1∶2,2种乳酸菌混合培养后比单独培养产酸能力、活菌数及抑菌性均得到提高。