猪小肠黏膜上皮细胞原代培养

分别采用酶消化法和组织块培养法,建立了猪小肠黏膜上皮细胞原代培养的方法。酶消化法于37℃分为4个处理组进行。处理1以2.5 g/L的胰蛋白酶消化30 min;处理2以2.0 g/L胶原酶Ⅰ消化70 min;处理3以50 mg/L嗜热菌蛋白酶消化50 min;处理4以50 mg/L嗜热菌蛋白酶+2.0 g/L胶原酶Ⅰ消化70 min。采用柠檬酸胰酶法分离纯化细胞。结果表明,组织块法原代培养获得的细胞活性较强。     

不同浓度α-卡茄碱对仔猪小肠黏膜上皮细胞增殖率的影响

[目的]研究α-卡茄碱对仔猪小肠黏膜上皮细胞增殖率的影响。[方法]以体外培养的仔猪小肠黏膜上皮细胞系IPEC-J2为试验材料,向其中添加不同浓度的α-卡茄碱,分别于培养的24、48、72h采集细胞样品,采用MTT法测定细胞的增殖率。[结果]浓度为0.1、0.2μg/mL的α-卡茄碱处理24h后,其细胞增殖率较对照组相比差异不显著(P>0.05);而0.4、0.8、1.6μg/mL组的增殖率与对照组相比,极显著(P<0.01)降低。处理48h后,0.1μg/mL组增殖率与对照组相比差异不显著(P>0.05);而0.2、0.4、0.8、1.6μg/mL组与对照组相比,极显著(P<0.01)降低。处理72h后,各处理组增殖率与对照组相比,极显著(P<0.01)降低。[结论]α-卡茄碱可以降低仔猪小肠黏膜上皮细胞增殖率,其浓度越高对小肠黏膜上皮细胞增殖率的影响越明显(P<0.01),作用时间越长细胞增殖率降低越明显(P<0.01)。     

山羊小肠上皮细胞的培养及其对氨基酸的代谢利用研究

本试验采用组织块培养法获得原代小肠上皮细胞,联合刮除法、相差消化法纯化原代细胞,用0.05%的胰蛋白酶进行消化传代,对山羊小肠上皮细胞进行了原代分离培养、传代、纯化及鉴定,同时以山羊小肠上皮细胞为模型,体外研究山羊小肠上皮细胞对氨基酸的代谢作用。免疫组化鉴定结果表明所分离纯化的细胞为小肠上皮细胞;组氨酸、精氨酸、苏氨酸和亮氨酸是小肠上皮细胞快速利用的氨基酸,在72h内快速下降;天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸是生成的氨基酸,在72h内有所积累;其它氨基酸呈现平缓的被消耗状态。     

中华鳖肠道黏膜上皮细胞的超微结构

应用透射电镜技术，对15只正常中华鳖小肠和大肠黏膜上皮细胞的超微结构进行了研究。结果表明，中华鳖小肠黏膜上皮为单层柱状上皮，以高柱状吸收细胞为主，具有发达的微绒毛、线粒体、粗面内质网和膜包小囊泡，其结构的发达程度已接近高等哺乳动物和鸟类。吸收细胞之间可见少量低电子密度的亮细胞，其种类需进一步确定。杯状细胞明显可见，胞质内含大量黏液性颗粒，细胞游离面形成明显的微绒毛。内分泌细胞很少。大肠黏膜上皮细胞排列松散，全部由上下粗细不均的柱状细胞组成。大肠上皮内未见专门的杯状细胞，但上皮细胞顶部胞质内含大量黏液颗粒，细胞器分布于黏液颗粒团之下的胞质中。细胞间隙宽大明显，有利于黏膜免疫细胞出入上皮。小肠和大肠均未见腺体分布。     

复方参术汤通过线粒体通路抑制TGEV诱导猪小肠黏膜上皮细胞凋亡的研究

为探讨中药复方参术汤干预猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)诱导猪小肠黏膜上皮细胞(SIEC)凋亡的机制。本试验用TGEV感染SIEC进行体外试验。试验分为复方参术汤组、对照组、TGEV组、苦参碱组,分别于加药后2,4,8,12,24,48,72h收集样本,应用qRT-PCR检测Bcl-2与Bax mRNA转录水平,Western blot检测Bcl-2、Bax、Bid、Cyt-c、Caspase-9和Caspase-3的蛋白表达水平。结果显示,与TGEV组相比,复方参术汤下调TGEV感染SIEC的Bax、Caspase-9、Caspase-3、Cyt c及Bid蛋白表达;复方参术汤极显著上调Bcl-2mRNA的转录(P<0.01),极显著下调Bax mRNA的转录(P<0.01)。结果表明,复方参术汤能够抑制引起细胞凋亡的线粒体通路,从而预防TGEV引起的SIEC凋亡。     

小肠上皮细胞分离纯化方法的研究进展

小肠是消化吸收的重要部位,用获取的小肠上皮细胞来研究小肠功能、营养物质吸收机制等具有重要意义,而成功分离小肠上皮细胞则是前提,可以用组织块培养法、非酶学消化法、酶消化分离法等来分离小肠上皮细胞。本文就目前国内外分离小肠上皮细胞的方法进行了综述。     

猪源乳酸杆菌对永生化猪小肠上皮细胞的黏附性能

以永生化猪小肠上皮细胞ZYM—SIEC02为体外模型,通过革兰染色法、平板计数法等检测发酵乳杆菌Y091231（Lactobacillus fermentation）、乳酸乳杆菌Y091221（Lactobacillus lactis）,嗜酸乳杆菌Y224031（Lactoba-cillusacidophilus）的黏附性能及对大肠杆菌C83921、致病性沙门菌、金黄色葡萄球菌CVCC2258的黏附抑制作用。结果显示,3株菌对永生化猪小肠上皮细胞的黏附性均较强,黏附指数平均为：Y091231（2903．25±83．33）个／100cells、Y091221（2320．37±81．02）个／100ceils、Y224031（I965．43±37．72）个／100cells,菌株之间差异不显著（P〉0．05）。黏附抑制试验结果显示,Y091231对大肠埃希菌C83921和金黄色葡萄球菌CVCC2258的黏附抑菌能力最强（（99．4±3．17）％和（98．0±2．31）％）,Y091221对沙门菌的抑菌能力最强（（97．1±2．04）％）,Y224031对大肠埃希菌C83921比对另外2种致病菌的黏附抑制能力高,但又显著低于Y091231和Y091221（P〈0．05）,表明不同种乳酸菌对致病菌的黏附抑制作用具有菌种特异性。     

大豆凝集素对小肠上皮细胞和红细胞凝集能力的研究

本文旨在测定纯化的大豆凝集素对兔和鸡小肠上皮细胞和红细胞的凝集活性。测定大豆凝集素对红细胞的凝集能力时,采用2%兔红细胞悬液,测定了使兔红细胞50%凝集的蛋白质浓度。测定对兔小肠上皮细胞的凝集能力时,采用荧光标记SBA与新鲜小肠上皮细胞结合后,观察荧光显微镜下荧光结合细胞比例的方法定量。经血凝试验结果表明,使兔红细胞50%凝集的SBA蛋白质浓度为2.50~3.69μg/mL,而SBA对鸡的红细胞没有凝集作用。SBA对兔小肠上皮细胞有结合能力,结合率为30%左右。试验结果说明大豆凝集素的血凝活性具种属特异性,用SBA与小肠上皮细胞的结合率作为评价其抗营养活性的指标具一定可行性。     

不同浓度的大蒜溶液对小鼠小肠黏膜结构的影响

应用组织学和组织化学方法研究不同浓度(0、1%、2%、5%和10%)的大蒜对小鼠小肠黏膜结构的影响及部分黏膜免疫相关细胞的分布与数量变化规律.结果发现,1%大蒜对小鼠小肠黏膜结构影响较好,肠绒毛长度最长、V/C比值最大、黏膜厚度最厚,1%大蒜对改善和增强小鼠小肠的消化吸收功能效果较好.     

热应激对动物小肠黏膜影响的研究进展

热应激在现在的集约化养殖模式中已成为常见的应激原之一,而动物的小肠黏膜在经受热应激时十分容易受到损伤,导致其机体代谢和生产性能受到严重的不良影响。本文主要就热应激对动物小肠黏膜形态结构、吸收功能、屏障功能和肠道微生态等方面影响的近阶段研究进展进行了阐述。     

猪小肠上皮细胞分离培养与鉴定

为建立功能性永生化的猪小肠上皮细胞系,并为猪肠道营养吸收与免疫调控以及仔猪肠道疾病发病机制的研究提供细胞模型,本试验采用组织块培养法来分离纯化猪小肠上皮细胞,并通过细胞角蛋白18、细胞增殖曲线、核型分析来鉴定猪小肠上皮细胞。结果表明:1)采用组织块培养法能够成功培养猪小肠上皮细胞并稳定传11代。2)本试验获得的猪小肠上皮细胞角蛋白18抗原鉴定为阳性,染色体核型为二倍体。3)倒置显微镜下观察培养至第11代的猪小肠上皮细胞仍然保持着上皮细胞的特征,呈现"铺路石"和上皮样形态。培养11代后的猪小肠上皮细胞间隙开始变大,规则不明显,细胞开始凋亡。第15代的猪小肠上皮细胞则出现大量凋亡并从瓶底脱落,仅有很少细胞贴壁生长。综上所述,采用组织块培养法能够获得生物学功能稳定的猪小肠上皮细胞系并能正常传11代,可为细胞的永生化提供试验素材。     

猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA(ds-cDNA),通过同源重组的方法构建猪IEC酵母双杂交cDNA文库。结果显示,文库的滴度为8.4×10⁸ CFU/mL,插入的ds-cDNA片段大小为0.5~2.0 kb,平均长度约为1.1 kb,文库重组率为100%。此文库为筛选与猪腹泻病毒相互作用的宿主蛋白及进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础,为研制有效的药物或疫苗提供了依据。     

槲皮素对猪肠上皮细胞利用蛋白质的作用机制

本试验旨在研究槲皮素促进猪肠上皮细胞利用蛋白质的作用及机制.猪肠上皮细胞孵育48 h后试验组分别用含0.1、0.2、0.4、0.8和1.6 mg/L槲皮素的二甲基亚砜(DMSO)溶液处理72 h,对照组采用0.2％DMSO处理.采用二喹啉甲酸(BCA)测定受试细胞中蛋白质的含量;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)...     

肠上皮细胞中内质网应激与动物肠道炎症机制的研究进展

近年来,内质网应激参与动物炎症性肠病发病机制的研究引起了广泛关注,未折叠或错误折叠的蛋白质在内质网腔中过量积累而引发内质网应激,持续的内质网应激则会导致动物肠黏膜屏障损伤并诱发肠道炎症。本文就内质网应激发生机制、未折叠蛋白质反应及内质网应激与肠道炎症互作机制进行了综述,旨在为防治动物肠道炎症提出新的治疗策略。     

姜黄素抑制轮状病毒感染猪肠上皮细胞的作用研究

本研究旨在探讨姜黄素对猪轮状病毒(PRV)感染猪肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)的抗病毒作用。以IPEC-J2细胞为试验对象,分别设置阴性对照组、感染PRV(感染复数=0.1)组和感染PRV后姜黄素(20μmol/L)处理组。在感染PRV后观察细胞病变,利用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和病毒滴度测定法检测PRV在IPEC-J2细胞内的复制与增殖。结果表明：与阴性对照组相比,1)PRV感染导致IPEC-J2细胞病变,显著降低细胞活力(P<0.05),极显著上调细胞内ROS含量(P<0.01);2)姜黄素可显著抑制PRV在细胞内的复制与增殖(P<0.05);3)在PRV吸附细胞阶段添加姜黄素显著抑制了病毒的复制与增殖(P<0.05);4)姜黄素在感染前与PRV直接孵育能显著降低感染后病毒的滴度(P<0.05);5)PRV感染显著提高了细胞内黑色素瘤分化相关基因5、干扰素诱导蛋白44样蛋白抗体和干扰素β的mRNA相对表达量(P<0.05),显著降低了细胞内Toll样受体适配器分子1、线粒体抗病毒信...     

天蚕素和合生素对AA肉鸡小肠黏膜形态和小肠免疫细胞的影响

为研究日粮中添加天蚕素、合生素对AA肉鸡小肠黏膜形态及免疫细胞的影响,试验选用480只1日龄健康AA肉鸡,随机分为4组,每组4个重复,每个重复30只鸡。对照组（Ⅰ组）饲喂基础日粮,试验组（Ⅱ~Ⅳ组）分别在基础日粮中添加0.5%天蚕素、0.3%合生素、0.5%天蚕素+0.3%合生素。试验期42 d。结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅳ组十二指肠、回肠绒毛高度极显著升高（P<0.01）;Ⅱ组空肠和回肠、Ⅲ组小肠各段隐窝深度显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）;Ⅱ、Ⅲ组小肠各段和Ⅳ组十二指肠、回肠绒毛高度/隐窝深度显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）;Ⅱ组空肠绒毛宽度显著降低（P<0.05）,Ⅲ组十二指肠和空肠、Ⅳ组空肠和回肠绒毛宽度均极显著降低（P<0.01）;Ⅱ、Ⅲ组空肠黏膜厚度显著升高（P<0.05）,Ⅳ组小肠各段黏膜厚度均极显著升高（P<0.01）。Ⅱ组回肠上皮内淋巴细胞数量显著升高（P<0.05）,Ⅲ组十二指肠、Ⅳ组小肠各段上皮内淋巴细胞数量极显著升高（P<0.01）;Ⅲ组十二指肠、Ⅳ组十二指肠和回肠杯状细胞数量极显著升高（P<0.01）;Ⅳ组空肠肥大细胞数量显著升高（P<0.05）。综上所述,天蚕素、合生素单独或联合添加均能改善AA肉鸡小肠黏膜结构,促进小肠黏膜免疫细胞增殖,联合添加效果最佳。     

Effects of Cecropin and Synbiotics on the Intestinal Mucosal Morphology and Intestinal Mucosal Immune Cells of AA Broilers

In order to investigate the effects of cecropin and synbiotics on the intestinal mucosal morphology and intestinal mucosal immune cells of AA broilers. 480 of 1-day-old healthy AA broilers were chosen and randomly divided into 4 groups with 4 replicates per group and 30 broilers per replicate. The broilers in group Ⅰ(control group) were fed basal diet,while that in groups Ⅱ to Ⅳ were fed the basal diet supplemented with 0.5% cecropin,0.3% synbiotics,0.5% cecropin+0.3% synbiotics,respectively. The trial lasted for 42 days. The result showed that compared with group Ⅰ,the villus height of duodenum and ileum in group Ⅳ were extremely significantly increased (P<0.01).The crypt depth of jejunum and ileum in group Ⅱ,and that of small intestine in group Ⅲ were significantly or extremely significantly decreased (P<0.05;P<0.01).The villus height/crypt depth of small intestine in groups Ⅱ and Ⅲ,and that of duodenum and ileum in group Ⅳ were significantly or extremely significantly increased (P<0.05;P<0.01).The villus width of jejunum in group Ⅱ was significantly decreased (P<0.05),while the villus width of duodenum and jejunum in group Ⅲ,that of jejunum and ileum in group Ⅳ were extremely significantly decreased (P<0.01).The mucous thickness of jejunum in groups Ⅱ and Ⅲ were significantly increased (P<0.05),while that of small intestine in group Ⅳ was extremely significantly increased (P<0.01).The number of the intraepithelial lymphocyte of ileum in group Ⅱ was significantly increased (P<0.05),and that of duodenum in group Ⅲ and small intestine in group Ⅳ were extremely significantly increased (P<0.01).The number of the goblet cell of duodenum in group Ⅲ,duodenum and ileum in group Ⅳ were extremely significantly increased (P<0.01).The mast cell of jejunum in group Ⅳ was significantly increased (P<0.05).In conclusion,both the cecropin and synbiotics could improve the small intestine mucosal structure and promote the small intestine mucosal immunocompetent cells proliferation in AA broiler, and the effect of combined utilization would be better.     

天蚕素A-马盖宁杂合肽对小鼠小肠黏膜结构、小肠黏膜免疫功能和肠道菌群的影响

本试验旨在研究天蚕素A-马盖宁杂合肽对小鼠小肠黏膜结构、黏膜免疫功能和肠道菌群的影响。选取18只健康且体重相近的BALB/c小鼠随机分成3组:对照组(生理盐水0.75 m L/d灌胃)、低剂量杂合肽组(0.26 mg/m L的杂合肽0.75 m L/d灌胃)、高剂量杂合肽组(0.52 mg/m L的杂合肽0.75 m L/d灌胃)。试验期为6周。结果表明:1)2个杂合肽组十二指肠绒毛长度均显著大于对照组(P<0.05),各段小肠的隐窝深度均显著低于对照组(P<0.05),各段小肠绒毛长度/隐窝深度均显著高于对照组(P<0.05)。2)与对照组相比,2个杂合肽组各段小肠黏膜内免疫球蛋白A阳性表达水平均显著升高(P<0.05)。3)2个杂合肽组小肠黏膜内白细胞介素(IL)-2、干扰素-γ(IFN-γ)及IL-4含量均显著高于对照组(P<0.05),而IFN-γ/IL-4各组之间差异不显著(P>0.05)。4)2个杂合肽组盲肠内容物中的大肠杆菌数量均显著低于对照组(P<0.05),双歧杆菌与乳酸杆菌数量均显著高于对照组(P<0.05)。由此得出,天蚕素A-马盖宁杂合肽灌胃能改善机体小肠黏膜结构;可促进免疫球蛋白A的表达来提高小肠黏膜免疫防御功能;可促进IL-2及IFN-γ的分泌来提高肠道细胞免疫水平,促进IL-4的分泌以提高肠道体液免疫水平并能够保持辅助性T细胞(Th)1/Th2的平衡状态;可有效降低肠道致病菌大肠杆菌的数量并显著增加肠道益生菌双歧杆菌和乳酸杆菌的数量。     

肠黏膜上皮组织紧密连接的生物学功能和作用机理

紧密连接(TJ)是肠黏膜上皮细胞间的主要连接方式,对维持黏膜上皮细胞极性及调节肠屏障的通透性发挥着重要的作用。TJ在黏膜上皮细胞间形成限制溶质和物质运动的细胞屏障。总的来说,TJ的结构可以概括为跨膜屏障蛋白与周围的脚手架蛋白组成的间隔。在这个复杂的网络中有许多相关的信号蛋白,影响屏障和更广泛的细胞功能。本文从TJ在肠黏膜上皮中的生物学功能、分子调控机制及当前研究现状等作综合阐述。     

Culture of Piglet Intestinal Epithelial Cells in vitro and the Infectivity of Porcine Epidemic Diarrhea Virus on the Cells

The study was aimed to establish a simple in vitro culture system for piglet small intestinal epithelial cells,and to provide materials for researches on porcine epidemic diarrhea virus (PEDV).In this study,newborn piglets that did not eat colostrum were used as the initial donors,and the primary cells were separated in vitro by scraping the intestinal mucosa from the intestinal lumen and mechanical separation and dispersion.The piglet intestinal epithelial cells were purified using 0.1% trypsin differential digestion method.Compared the effects of newborn weak piglets and normal piglets as donors on the activity of primary intestinal epithelial cells.MTT method was used to compare the proliferation activity of primary cells of different generations.Immunofluorescence and Real-time RT-PCR were used to detect the infection and proliferation of PEDV strain CV777 in primary intestinal epithelial cells.The results showed that the isolation and culture method in vitro used in this study could obtain primary intestinal epithelial cells with good proliferation activity,with obvious S-type cell proliferation curves.The cells with high purity and single morphology could be obtained by differential digestion,and had good proliferation activity after five consecutive passages.The proliferative activity of intestinal epithelial cells isolated from weak piglets and normal piglets had no obvious difference,and provided new way for reducing the cost of primary cell culture.The results of immunofluorescence and Real-time RT-PCR showed that PEDV could infect the primary intestinal epithelial cells,and replicated and proliferated in them.In this study,we established a simple,practical and low-cost method for in vitro culture of piglet primary small intestinal epithelial cells.The primary cells cultured by this method could be used as basic materials for the isolation and culture of PEDV and related research.