动物卵泡液外泌体分离方法及主要生殖功能研究进展

外泌体(exosome)是一种广泛存在于各种体液环境和部分组织中的纳米级、均一性膜性囊泡,主要由蛋白质、脂质、mRNA、miRNA和lncRNA等多种生物成分构成。近年来,研究学者已从不同动物的卵泡液中分离出外泌体,并证实卵泡液外泌体参与卵泡颗粒细胞的增殖、卵子的形成及发育、动物受精、胚胎发育、以及雄性动物生殖功能等一系列生殖过程,为进一步研究卵泡液外泌体对哺乳动物生殖功能的调控提供新思路。作者重点阐述了卵泡液外泌体分离鉴定的方法、主要成分以及调控哺乳动物生殖功能的分子机制的最新进展,为全面了解外泌体结构功能、生发凋亡和作用机制提供参考,为利用外泌体探索动物生殖理论和提高动物繁殖技术并将其应用于生产实际提供相关基础信息。     

乳源外泌体研究进展

外泌体(exosomes)是一种纳米级别的细胞外囊泡,广泛存在于多种动物的组织和体液中,在各种类型的细胞外囊泡中,外泌体作为一个载体可以携带多种具有生物活性的内含物,而这些内含物的分拣是一个受调控的、非随机的过程.近年来,有研究发现,哺乳动物的乳源外泌体通过消化道被吸收后,可以促进幼畜肠道和免疫系统的发育,同时还参与一...     

外泌体在肿瘤及寄生虫病中的应用研究进展

外泌体(EVs)也称作胞外囊泡,是细胞内多泡体与细胞膜融合后释放到细胞外基质中的磷脂双分子层小囊泡。1983年,研究人员在绵羊网织红细胞中首次发现外泌体,最初认为外泌体只是细胞代谢废物,但随着对其生物来源、物质构成、运输、细胞间信号传导及在体液中分布等方面深入研究,发现外泌体具有多种功能。近年来研究发现,外泌体在肿瘤早期诊断、肿瘤转移和扩散等方面都扮演重要角色,并且有可能成为新型药物载体应用在肿瘤治疗方面。随着外泌体功能和生物学特点的深入研究,这种新型药物载体技术也有可能应用到抗寄生虫病,为寄生虫病的治疗提供新思路。     

影响黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的因素

从屠宰场收集黄牛卵巢,取皮质深层卵母细胞进行体外成熟、体外受精和早期胚胎体外培养,分析了影响其效果的因素。结果表明,在成熟培养液中添加FSH(10IU/mL)、HCG(20IU/mL)和17β-E2(1mg/L)对卵母细胞受精后早期胚胎发育能力有极显著促进作用;等量牛卵泡液(BFF)与新生牛血清(NCS)对体外受精胚胎发育效果影响不显著,以15?F为宜;颗粒细胞与输卵管上皮细胞均能显著提高卵母细胞体外成熟受精后早期胚胎的发育率,颗粒细胞 输卵管上皮细胞对克服胚胎阻滞现象效果显著。     

体内、外卵母细胞对猪体细胞克隆胚胎发育潜力的影响

为探讨猪体内、外成熟卵母细胞对核移植重组胚胎发育能力的影响,试验通过激素促排获得体内成熟卵母细胞和收集废弃卵巢获取体外成熟的卵母细胞,分别构建核移植重组胚,比较其卵裂率、囊胚率及胚胎移植受孕情况。结果显示,PGC+PMSG+HCG组的平均排卵数（27.8枚/头）显著高于PGC+HCG （12.5枚/头）、PMSG+HCG （13.7枚/头）及自然发情组（11.5枚/头）（P<0.05）,体内收集到的卵母细胞,可用于构建核移植重组胚的可用卵率均达到90%以上,与其他处理组差异不显著（P>0.05）,说明通过激素处理可获得更多的可用卵母细胞,而且卵母细胞的质量没有显著差异;以体内和体外成熟卵母细胞作为核移植受体构建的克隆胚胎,二者的胚胎融合率（80.31%和79.29%）和卵裂率（90.40%和86.51%）差异均不显著（P>0.05）,但来自体内成熟卵母细胞克隆的胚胎发育至囊胚期的比例显著升高（P<0.05）;将体内、外成熟卵母细胞构建的核移植重组胚分别移植代孕母猪,头平均移植30或60枚时,体内成熟卵母构建的克隆胚胎移植出生仔猪10头,而体外培养卵母细胞构建的克隆胚胎均未着床受孕,表明通过激素促排获得的卵母细胞质量更好,能显著提高克隆胚胎的囊胚率,减少胚胎移植数量,提高代孕母猪的怀孕率。     

不同品种牛卵泡液对水牛卵母细胞体外受精效果的影响

试验利用水牛卵泡液(BuFF)和黄牛卵泡液(BoFF)对不同来源水牛卵母细胞体外受精效果的影响进行了探讨,以完善水牛体外受精培养系统,进一步提高水牛胚胎体外生产效率。试验按成熟培养液中添加卵泡液替代胎牛血清量共分4个组。不添加卵泡液(0%+10%胎牛血清)为Ⅰ组(对照组);添加5%卵泡液+5%胎牛血清为Ⅱ组;添加10%卵泡液+0%胎牛血清为Ⅲ组;添加15%卵泡液+0%胎牛血清为Ⅳ组。结果表明,添加BuFF对活体采集卵母细胞和屠宰场收集卵母细胞的体外受精卵分裂率无显著影响(P0.05),但添加5%和10%BuFF对卵母细胞体外受精后的胚胎发育有明显促进作用,囊胚率均极显著高于对照组和15%BuFF组(P0.01),5%和10%BuFF组间无显著差异(P0.05);添加15%BuFF囊胚率有降低的趋势,但与对照组相比差异不显著(P0.05)。而添加10%BoFF组活体采集卵母细胞体外受精的受精卵分裂率和囊胚率均极显著高于对照组和5%BoFF组(P0.01),添加5%BoFF组的受精卵分裂率和囊胚率与对照组无显著差异(P0.05);添加BoFF对屠宰场收集水牛卵母细胞体外受精卵分裂率无显著差异(P0.05),但添加5%和10%BoFF组的囊胚率均显著高于对照组和15%组(P0.05),添加15%BoFF组与对照组相比,囊胚率显著降低(P0.05),5%和10%BoFF组间囊胚率无显著差异(P0.05)。综合以上结果,在水牛卵母细胞成熟培养液中添加5%～10%的BuFF或BoFF代替牛血清,可明显提高水牛体外胚胎生产效率,且以添加同种的BuFF效果略好。     

寄生虫来源的外泌体研究进展

外泌体是体内多种细胞分泌的一种囊泡,包含蛋白质、脂质和核酸等物质,发挥信号传导、免疫调控、代谢物清除及凝血等功能。外泌体可能是细胞间信息传递的重要纽带,寄生虫与宿主间存在复杂的信息交流,寄生虫可以通过分泌外泌体将生物活性物质转移到宿主细胞中,调控宿主免疫,介导寄生虫的免疫逃逸。以外泌体作为药物载体,可以阻断寄生虫在宿主细胞内的转移或增强宿主的免疫能力,为寄生虫病的预防和治疗提供新的契机,进而打破目前化学合成药物在畜禽生产中滥用的现状,减少药物残留,提高畜产品质量安全。笔者综述了外泌体的形成、组分以及不同寄生虫来源外泌体的生物学作用,以期为畜禽养殖业中以外泌体作为研究切入点的寄生虫病的诊断和治疗奠定基础。     

乳外泌体对机体免疫调节作用的研究进展

外泌体（EVs）是直径为30～150 nm的细胞外磷脂双层囊泡,多种类型细胞、组织和生物液体均可分泌外泌体,包括血液、尿液、牛奶、眼泪和脑脊液等。母乳是哺乳动物生长发育不可替代的营养来源。除此之外,母乳喂养还能有效降低患病率,减少患各种疾病的风险,如坏死性小肠结肠炎（NEC）、肠胃炎、急性淋巴细胞白血病和急性髓系白血病等。母乳中富含乳铁蛋白、免疫球蛋白、生长因子、寡糖、多不饱和脂肪酸等生物活性成分,近年来还发现母乳中富含外泌体。有研究显示,乳外泌体（MEVs）具有一定的生物活性、miRNAs序列同源性和稳定性,可以直接被机体吸收并发挥免疫调节作用,本文着重对乳外泌体在炎症、肿瘤或通过直接或间接作用发挥免疫调节作用的研究进行综述,为丰富乳外泌体的生物学功能提供参考依据。     

外泌体在哺乳动物胚胎附植中的作用研究进展

外泌体的分泌是不同类型的细胞间信息交流的一种重要方法,近几年发现外泌体在胚胎附植中介导胚胎与母体的信息交流起重要作用。本文综述了外泌体的主要释放机制和分离鉴定方法、子宫内膜细胞和胚胎来源的外泌体在哺乳动物中调节胚胎附植的重要作用,为提高动物胚胎附植的成功率提供新依据,也为人类体外受精、辅助生殖技术的改进提供参考资料。     

哺乳动物腔前卵泡卵母细胞的研究进展

本文简要回顾了哺乳动物腔前卵泡卵母细胞的研究历史,重点讨论了有关理论及方法学问题。     

长链非编码RNA在精子发生与卵泡发育中的研究进展

长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)是一类长度大于200 nt,对基因表达起调控作用的非蛋白质编码RNA,其中很多已经被证明在动物生理、病理方面起到重要作用,目前lncRNA在动物繁殖方面的生物学研究较少。本文主要对lncRNA作用机制及其在精子发生和卵泡发育中的作用展开论述,为深入探究动物繁殖调控机制提供参考。     

羔羊诱导卵泡发育及其应用的研究进展

幼畜体外胚胎移植(Juvenile In Vitro Embryo Transfer,JIVET)技术是利用幼畜对外源激素敏感的生理特点,采用外源促性腺素诱导幼畜卵泡超数发育,结合卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎移植等技术生产后代,该技术体系的研究与应用可以充分发挥优秀母畜繁殖潜能,快速扩繁良种畜群。近年来,国内外对绵羊JIVET技术研究比较多,但应用JIVET技术生产体外胚胎的效率低下、效果不稳定仍然是一个普遍问题。迄今为止,大多数的研究致力于加强供体羔羊选择、优化激素处理方案以及提高羔羊卵母细胞体外发育能力等方面。本文综述了羊JIVET技术的原理与最新研究进展以及影响JIVET技术效率所存在的内因和外因,旨在为深层次探索羔羊卵子发生和卵泡发育调控机制提供理论依据,促进JIVET技术的研究与应用。     

体外成熟对牛卵母细胞孤雌激活后发育潜力的影响

本试验在卵母细胞体外成熟的研究基础上,研究了培养用水、卵泡液和成熟时间对卵母细胞体外成熟及孤雌激活后发育潜力的影响.结果表明(1)将卵母细胞分别于蒸馏水和Milli-Q超纯水配制的成熟培养液中培养22～24 h, 孤雌激活后, 卵裂率无显著差异(P>0.05); 但孤雌卵在超纯水配制的胚胎培养液中培养,囊胚发育率为22.3%, 明显高于在蒸馏水配制的培养液中的囊胚发育率14.1%(P<0.05).(2)在成熟培养液中添加10%、20%卵泡液,成熟卵母细胞孤雌激活后的囊胚发育率(32.3%, 30.9%)明显高于添加5%和0%卵泡液组的囊胚发育率(21.8%, 22.7%,P<0.05).卵母细胞在添加20%卵泡液的培养液中成熟培养,孤雌激活后囊胚孵化率明显低于添加0、5%、10%卵泡液组的囊胚孵化率(P<0.05).(3)成熟28 h或30 h的卵母细胞孤雌激活后,其囊胚发育率(30.5%或29.4%)明显高于成熟24 h或26 h组的囊胚发育率(20.5%或22.1%,P<0.05).     

卵泡闭锁的研究新进展

卵泡闭锁是雌性动物重要的生理过程 ,通过内分泌、自分泌和旁分泌等途径 ,受激素 ( Gn RH、FSH、LH、GH、雌激素和雄激素等 )和细胞因子 ( IGFs、TGFs、EGF和 IL-1等 )等多种因素的综合调节。     

DNA甲基化在哺乳动物卵母细胞和早期胚胎发育中的研究进展

DNA甲基化(DNA methylation)是一种动态、可逆并可以遗传的表观遗传修饰模式,主要发生在哺乳动物原始生殖细胞和早期胚胎发育过程中,能够通过高动态和协同的核酶网络附着在DNA的CpG区域,同时还通过改变调控区域的功能状态进而调控基因表达且不影响DNA序列所携带的遗传信息。DNA甲基化主要涉及基因组印迹、转座元件沉默、X染色体失活和衰老等多种关键生理过程,在哺乳动物卵母细胞和胚胎发育中发挥着重要作用。本文介绍了DNA甲基化的建立与去除机制及其生物学功能,重点阐述了DNA甲基化在哺乳动物卵母细胞和胚胎发育过程中精准生成、维持、读取和删除等动态变化过程,为进一步研究哺乳动物表观遗传调控提供参考依据。     

牛胚胎玻璃化冷冻技术研究进展

胚胎冷冻保存是保存和繁殖遗传优势动物的主要工具,是胚胎移植产业的重要组成部分。目前广泛使用的冷冻方法主要有慢速冷冻和玻璃化冷冻2种。由于玻璃化冷冻具有成本低、效率高、操作简单等优点,玻璃化冷冻法越来越受到人们的重视。经过多年研究,研究人员已经在玻璃化冷冻方法、冷冻液等方面取得了大量进展,玻璃化冷冻法已经开始进入商业化应用。本文综述了牛胚胎冷冻保存技术的研究进展,旨在为相关从业人员提供一定借鉴和参考。     

奶牛胚胎移植的研究进展

胚胎移植技术作为一项实用的繁殖技术，在奶牛改良和繁殖育种中广泛应用。本文就奶牛胚胎移植的研究现状以及对包括胚胎冷冻保存、胚胎分割与融合、核移植、性别控制技术、体外受精技术、转基因技术等胚胎移植相关技术进行阐述。     

绵羊卵泡的发育及其调控研究

卵泡是绵羊卵巢上的基本发育单位,卵子发生是在卵泡内进行的,即卵泡为卵子发生提供了一个最佳的微环境。卵泡的发生受内分泌、旁分泌和自分泌调控,本文就对绵羊卵泡的发育及其调控机理进行了概述。     

母马大、小卵泡的卵泡液代谢组学分析及其对卵泡发育的影响

本实验旨在研究母马大、小卵泡液代谢物的差异,从卵泡液代谢组层面初步探讨差异物对卵泡发育的影响及卵泡发育机制。选用8匹山东即墨地区母马的卵泡液进行代谢组学分析,大卵泡直径设为45～60 mm、小卵泡直径设为20～30 mm,采用超高液相色谱-高分辨质谱联用技术,通过主成分分析法(PCA)、偏最小二乘法-判别分析法(PLS-DA)得到大小卵泡液差异性物质质荷比。结果表明:在大卵泡液中含量多的代谢物有睾酮、1-棕榈酰溶血磷脂酸、β-硫酸雌醇、硫酸雌酮,小卵泡液中含量多的代谢物有硫酸吲哚酚、木子塘、水苏糖和3-脲基丙酸酯。综上可知,在大卵泡液中,上调物质主要是类固醇,比较单一集中,但小卵泡中不存在上调的类固醇物质,说明在母马中类固醇激素是促使卵泡发育的主要代谢物;在小卵泡液中,上调物质种类复杂,当优势卵泡出现时,可能有一些代谢物会抑制其余的小卵泡继续发育。