海带中褐藻糖胶的提取与纯化

目前 ,海带工业的综合利用除了提取褐藻酸钠、碘及少量的甘露醇外 ,很少涉及褐藻糖胶的利用 ,而褐藻糖胶存在于提取液的废液中。文献报道褐藻糖胶具有抗凝血、澄清血脂、降低胆固醇和抑杀癌细胞等作用[1,2 ] 。本文对采自浙江象山台下礁海港海带的提取和纯化作了比较研究 ,从而为如何更好地利用我国的海带资源提供依据。1　材料与方法1 .1　原料海带 (ＬａｍｉｎａｒｉａＪａｐｏｎｉｃａ) ,1 998年 5月 2 8日采于浙江象山台下礁海港 ,烘干 ,粉碎。1 .2　褐藻糖胶的提取方法海带藻粉→热水浸提→离心→取上清液 ,滤渣同样条件再提取 1次→合…     

海带中褐藻糖胶的提取与纯化

目前 ,海带工业的综合利用除了提取褐藻酸钠、碘及少量的甘露醇外 ,很少涉及褐藻糖胶的利用 ,而褐藻糖胶存在于提取液的废液中。文献报道褐藻糖胶具有抗凝血、澄清血脂、降低胆固醇和抑杀癌细胞等作用[1,2 ] 。本文对采自浙江象山台下礁海港海带的提取和纯化作了比较研究 ,从而为如何更好地利用我国的海带资源提供依据。1　材料与方法1 .1　原料海带 (ＬａｍｉｎａｒｉａＪａｐｏｎｉｃａ) ,1 998年 5月 2 8日采于浙江象山台下礁海港 ,烘干 ,粉碎。1 .2　褐藻糖胶的提取方法海带藻粉→热水浸提→离心→取上清液 ,滤渣同样条件再提取 1次→合…     

海带褐藻糖胶的药理活性

褐藻糖胶是所有褐藻固有的一种细胞间多糖 ,据报道有抗凝血、抗肿瘤、澄清血脂等药理活性[1-3 ] 。本文对采自浙江省象山县台下礁的海带中提取纯化得到的褐藻糖胶进行了抗肿瘤细胞实验与抗凝血实验 ,初步观察了褐藻糖胶对体外培养的人肝癌细胞的杀伤作用 ,并比较了其不同剂量对肿瘤细胞的影响。同时 ,还作了褐藻糖胶对小鼠体内的抗凝血实验 ,比较了其不同组分的抗凝血活性的大小。1　材料与方法1 .1　试验材料海带藻粉经稀盐酸提取 ,乙醇沉淀 ,进一步纯化得到褐藻糖胶。然后用不同酒精浓度 (2 0 % ,3 0 % ,40 % ,50 % ,6 0 %及 70 % )进行分…     

海带褐藻糖胶的药理活性

褐藻糖胶是所有褐藻固有的一种细胞间多糖 ,据报道有抗凝血、抗肿瘤、澄清血脂等药理活性[1-3 ] 。本文对采自浙江省象山县台下礁的海带中提取纯化得到的褐藻糖胶进行了抗肿瘤细胞实验与抗凝血实验 ,初步观察了褐藻糖胶对体外培养的人肝癌细胞的杀伤作用 ,并比较了其不同剂量对肿瘤细胞的影响。同时 ,还作了褐藻糖胶对小鼠体内的抗凝血实验 ,比较了其不同组分的抗凝血活性的大小。1　材料与方法1 .1　试验材料海带藻粉经稀盐酸提取 ,乙醇沉淀 ,进一步纯化得到褐藻糖胶。然后用不同酒精浓度 (2 0 % ,3 0 % ,40 % ,50 % ,6 0 %及 70 % )进行分…     

褐藻糖胶脱蛋白及脱色方法研究

采用Sevag法、三氯乙酸(TCA)法和Sevag法与三氯乙酸法相结合的方法对褐藻糖胶进行脱蛋白研究,并研究脱蛋白与未脱蛋白对褐藻糖胶脱色的影响.结果表明,Sevag法与三氯乙酸法相结合脱蛋白效果最佳,当Sevag法操作2次,TCA溶液添加量为1.3 mL/10mL多糖溶液时,蛋白脱除率为78.68%,多糖损失率为28...     

微波辅助酸水解褐藻糖胶的研究

[目的]研究微波辅助酸解在低分子量海带褐藻糖胶制备中的可行性。[方法]采用酸提取法制备海带褐藻糖胶,测定在不同HCl浓度(0、1、2 mol/L)、不同降解时间(40、50、60 min)、不同降解温度(70、80、90℃)条件下微波辅助酸解得到的褐藻糖胶的分子量,分析不同降解条件对褐藻糖胶分子量的影响,并与水浴辅助酸解的结果进行对比分析。[结果]随着HCl浓度、降解时间、降解温度的升高,酸解产物的分子量降低,且温度对降解产物分子量的影响最大。与水浴加热相比,微波辅助酸解降解产物的分子量更低。在80℃,HCl浓度为1 mol/L,降解40 min以上,比较容易制备低分子量褐藻糖胶。微波比水浴加热更容易对褐藻糖胶的硫酸基造成破坏。在2 mol/L HCl条件下,微波和水浴辅助酸解60 min,分别在70和90℃观察到明显的硫酸基脱除现象。[结论]采用微波辅助酸解法制备低分子量褐藻糖胶时,要注意硫酸基脱除的问题。     

动物抗凝血酶Ⅲ和褐藻糖胶结合的结构模拟

褐藻糖胶是一种含有硫酸基的水溶性杂多糖,其抗凝血与抗血栓等生理机能与肝素类似。用分子动力学计算,模拟抗凝血酶Ⅲ结合褐藻糖胶的结构变化。抗凝血酶Ⅲ和褐藻糖胶结合时Arg393从抗凝血酶Ⅲ的内部激发到了分子表面,Arg393与凝血酶活性中心的Asp、His、Ser结合,继而进入到四面体的过渡状态。     

海带褐藻多糖提取方法改进及抗凝血探究

探讨在低温低酸度条件下,采用KAl(SO4)2·12H2O(明矾)沉淀剂法从海带中提取褐藻多糖.结果表明,本方法下褐藻多糖回收率明显高于70%乙醇沉淀法,同时可以较大程度提高产物中硫酸基团的含量,褐藻多糖抗凝效果远高于柠檬酸钠,重新添加钙离子并不能使血液重新凝固,褐藻多糖的抗凝血机制与血钙离子的结合无关.     

人参可溶性糖提取过程中两种除蛋白质方法的比较

采用Sevage法和乙醇沉淀法分别处理人参可溶性糖粗提液,以人参可溶性糖保留率和蛋白质去除率为参数通过正交试验和单因素试验优化两种方法的除蛋白反应条件.结果表明,Sevage法去除人参可溶性糖粗提液中蛋白质的最优条件为:溶液配比1:4,反应时间40 min,Sevage溶液与样品液比例为1:3,处理样品液1次;乙醇沉淀法去除人参可溶性糖粗提液中蛋白质的最优条件为:乙醇浓度30％,加热温度70℃,加热时间1.5 h.在去除人参可溶性糖粗提液中蛋白质的试验过程中,Sevage法优于乙醇沉淀法,适用于实验室中纯化人参中的糖类,但乙醇沉淀法在大量处理人参可溶性糖溶液时更便于操作.     

柚子皮中果胶的提取工艺研究

本文采用酸提取乙醇沉淀法从柚皮中提取果胶,分别对水科比、pH值、提取温度、提取时间、乙醇浓度等因素进行了单因素试验,研究这几个因素对果胶提取效果的影响,通过对结果的分析确定酸提取果胶的最佳工艺条件为水料比20∶1,酸度控制在pH值2.0,温度控制在80℃,提取果胶时间为75min,用粉末状的活性炭进行脱色,乙醇浓度为95％.实验结果表明:设计的优化工艺条件生产果胶是可行的,果胶质量是符合要求的,其产率也是理想的.     

不同方法提取乳清浓缩蛋白的研究

[目的]探索一条经济、简单易行的乳清浓缩蛋白提取工艺。[方法]以乳清废液为原料,分别采用醇沉法、碱沉法、醇＋碱沉法提取其中的乳清浓缩蛋白,比较不同方法的提取效果。[结果]影响醇沉法提取乳清蛋白产量的因素依次为：沉淀时间〉乙醇浓度〉沉淀温度,最佳醇提条件为：乙醇浓度100%,沉淀温度50℃,沉淀时间1.5 h;影响碱沉法提取乳清蛋白产量的因素依次为：沉淀时间〉pH值〉沉淀温度,最佳碱提条件为：pH值10,沉淀温度30℃,沉淀时间1.5 h;影响醇＋碱沉法提取乳清蛋白产量的因素依次为：沉淀时间〉沉淀温度〉pH值〉乙醇浓度,最佳提取条件为：乙醇浓度90%,沉淀时间2.0 h,pH值7,沉淀温度20℃。[结论]醇＋碱沉法提取乳清浓缩蛋白的效果最佳。     

狗牙根基因组DNA提取方法的比较

以狗牙根的嫩叶为材料,在传统CTAB法的基础上加以改良,建立了狗牙根基因组DNA的CTAB提取方法.得到的DNA经核酸蛋白质分析仪测得A_(260)/A_(280)值处于1.69～2.02之间、A_(260)/A_(230)集中处于1.82～2.08之间,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品具有一条明亮主带并无拖尾现象,经ISSR-PCR检测出现清晰稳定的条带,说明改良CTAB法提取得到的DNA完整性好,纯度高,适用于分子标记等分子生物学的研究.     

蕨类植物的DNA提取方法比较研究（摘要）

[目的]研究蕨类植物DNA提取的方法,为进一步的遗传多样性以及分类学的研究提供基础。[方法]通过改变试剂的用量以及操作方法对CTAB法提取DNA方法进行了改进。①取0.5～1.0 g新鲜叶片,加液氮充分研磨成粉末,置于1.5 ml离心管中,加2%CTAB600μl及10μl巯基乙醇;②65℃水浴15 min（期间取出振荡1次）,冷却;③加500μl氯仿/异戊醇（24：1）上下颠倒数次至液相深绿色;④12 000 r/min离心3 min;⑤取上清液至-1.5 ml离心管,重复步骤③、④;⑥取上清液至-1.5 ml离心管中,管内预装1 ml 95%乙醇。室温静置2 h;⑦12 000 r/min离心3 min;⑧弃上清,用70%乙醇（约4400μl）洗涤沉淀,真空干燥器干燥。干燥后加低温保存;⑨使用时加100μl超纯水溶解。-25℃保存。提取出的DNA样品中加超纯水50μl,混匀后,用石英比色杯于DU（R）800分光光度计中测定紫外消光值,根据其在260nm和280 nm波长处的光吸收值计算DNA产率,根据A_（260）/A_（280）判断DNA样品的纯度。DNA样品的浓度（μg/μl）为：在260 nm的紫外消光值×核酸稀释倍数×50/1 000。纯DNA样品A_（260）/A_（280）紫外消光值应为1.8,A_（260）/A_（230）值应大于2.0。A_（260）/A_（280）值大于1.9时,表明有RNA污染,小于1.6时,表明样品中存在蛋白质或酚污染。A_（260）/A_（230）值小于2.0时表明溶液中有残存盐和小分子杂质,如核甘酸、氨基酸、酚等。分别对常规CTAB法和改进CTAB法提取出的蕨类植物DNA进行琼脂糖凝胶电泳检测,以验证提取出DNA的质量。[结果]改进的CTAB法提取的蕨类DNA,其主带（基因组DNA）更加明亮,且与其他杂带区分明显,表明DNA的降解较少,DNA得率及纯度都有了很大提升。[结论]改良的CTAB提取法能够提取出高质量的蕨类植物DNA。     

葡萄花序总RNA提取方法研究

[目的]为筛选出提取葡萄花序总RNA的最佳方法。[方法]以藤稔葡萄花序为试材,针对葡萄花序中多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了CTAB法、SDS／酚法以及经改良的CTAB法对藤稔葡萄花序总RNA的提取效果。[结果]3种方法均能从葡萄花序中提取到总RNA。其中,经改良的CTAB法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,获得纯度高、完整性好的总RNA。其28srRNA亮度约为18SrRNA的2倍,RT—PCR分析表明：该方法提取的总RNA适合于下一步的研究。[结论]经过改良的CTAB法提取葡萄花序总RNA的效果最佳。     

提取蕨类植物DNA方法比较

[目的]研究蕨类植物DNA提取的方法,为进一步的遗传多样性以及分类学的研究提供基础。[方法]通过改变试剂的用量以及操作方法对CTAB法提取DNA方法进行了改进。[结果]改良的CTAB提取法能够提取出高质量的蕨类植物的DNA。[结论]改良了蕨类植物DNA提取的方法。     

亮菌多糖提取工艺研究

采用单因素考察和正交优化法确立亮菌多糖浸提工艺,并通过一次性醇沉和分级沉淀试验确定醇沉方式。结果表明:在料水比1∶25、温度100℃的条件下,浸提6 h,提取2次,多糖保留率最高;醇沉方式以分级醇沉为宜。     

油菜叶绿素提取方法的研究

采用丙酮研磨法和8种提取液直接浸泡提取油菜叶绿素。结果表明,以丙酮和乙醇的2:1混合液提取效果较好,操作简单、提取完全、误差小、效率高。尤其适合批量样品分析。     

2种从苹果渣中提取果胶方法的对比研究

[目的]探讨适合工业化提取苹果渣果胶的工艺。[方法]以同一苹果渣为原料,分别研究盐析法和醇沉法对苹果渣果胶提取的影响。[结果]醇沉法提取果胶的得率较高,为7.85%,且所得果胶纯度高,色泽好,质量优,其最佳工艺条件为酸提液pH 1.5,料液比1∶14,酸提时间1.5 h;盐析法提取果胶的得率为6.14%。[结论]醇沉法适合工业化提取苹果渣中的果胶。     

板栗基因组DNA不同提取方法的比较

板栗组织中富含多酚类、糖类以及单宁类等次生代谢物质,因而难以提取比较高质量的DNA分子。本实验利用三种不同提取方法,分别是改良CTAB法、CTAB-乙醚萃取法、简易法提取板栗不同部位的基因组DNA。纯化的DNA分别经过核酸蛋白分析仪、电泳以及PCR技术检测,表明改良CTAB法和CTAB-乙醚萃取法都适用于板栗嫩叶、成熟叶片及韧皮部组织DNA的提取,提取的DNA纯度较为理想,能够满足后续分子生物学的要求。     

不同方法对石榴果皮总RNA提取效果的影响

比较了3种RNA提取方法提取石榴果皮RNA的效果。结果表明:改良CTAB法提取的总RNAOD值在1.91左右,得率为48μg/g;Trizol法提取总RNAOD值在1.15左右,得率为86μg/g;试剂盒提取得到的总RNAOD值在1.24左右,得率为124μg/g。分别反转录为cDNA,根据不同植物花青素合成关键酶基因保守序列,设计简并引物进行RT-PCR,其中只有改良CTAB法得到的cDNA有扩增条带。表明改良CTAB法比较适合富含多糖和酚类物质石榴果皮总RNA的提取。