猪瘟兔化弱毒囊膜糖蛋白EI基因的扩增与克隆

本试验直接从细胞培养液中提取猪瘟兔化弱毒ＲＮＡ，并根据猪瘟病毒Ａｌｆｏｒｔ株和Ｂｒｅｓｃｉａ株的核苷酸序列，将ＥＩ基因分两段，设计并合成上物。采用反转录，将ＥＩ基因分两段，设计合并成了４条引物。     

猪瘟病毒兔化弱毒株5’端调控序列及P23基因的扩增与克隆

从猪瘟病毒兔化弱毒株（ＨＣＬＶ）的细胞培养液中直接提取ＲＮＡ，同时根据猪瘟病毒Ａｌｆｏｒｔ株的基因组序列化学合成了６条引物，应用“半巢式”ＰＣＲ方法扩增了ＨＣＬＶ两个ｃＤ－ＮＡ片段，其大小与推算的长度相符，依次为６９３ｂｎ和２７６ｂｐ。这２个片段包括了ＨＣＬＶ基因组５’端非编码区调控序列，编码具有蛋白酶活性的Ｐ２３蛋白的基因和编码大部分核衣壳蛋白Ｐ１４的基因。最后，按标准方法将这２个ｃＤＮＡ片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａＩ切点。     

中国株猪瘟兔化弱毒克隆毒的研究

采用终点稀释单细胞微量培养法对中国株猪瘟哆化弱毒（Ｃ株）进行克隆，获１０个克隆株；保持原Ｃ株的免疫原性和其他优良特性；在某些方面并有所提高。随机取６号克隆毒（Ｃ６）进行系列试验，结果表明：（１）对牛睾丸细胞敏感，共收毒批次和合格批次为１５／１９（７９．９％）（２）用兔增殖毒共归兔６４只，发率为９０．６％，用睾丸细胞增殖毒对３８只兔热反应率为８９．４７％，（３）按“规程”安检和增大一倍量对猪均无不良     

新城疫病毒囊膜糖蛋白生物学特性的研究进展

新城疫是当今全球范围内最严重的禽类传染病之一。其病原新城疫病毒是单股负链RNA病毒,编码NP、P、M、F、HN和L 6种结构蛋白,其中最主要的是位于囊膜上的F和HN两种糖蛋白。F蛋白具有使病毒囊膜与宿主细胞膜融合,致使病毒穿入宿主细胞膜的作用,是决定病毒毒力的关键因子;HN蛋白具有血凝素和神经氨酸酶两种活性,这两种活性对于NDV侵染细胞具有重要的作用。这两种糖蛋白不仅对NDV的毒力及致病性方面起着决定性作用,而且也是诱导产生保护性抗体的蛋白。作者主要对这两种蛋白的结构与功能作一概述。     

猪瘟兔化弱毒的研究——Ⅱ 猪瘟兔化弱毒对猪的安全性

通过四年多的试验证明,猪瘟病毒由于连续通过兔体传代适应后,对猪的致病力,发生了明显的变化,通过兔体67代以前,对吃乳猪和断奶猪均不安全有死亡,用91代以后,165代以前各代兔化毒,在各农场试验,对断奶仔猪的死亡率降低,毒力减弱;但对某些少数体弱及饲养条件欠佳的吃乳猪群,仍会因反应诱发并发病死亡。到214代以后用于各龄仔猪包括生后10—40天的吃乳猪,已极安全,无可见反应,不影响发育。自1957年在全国广泛应用,平均反应率约1％,死亡率约0.1％(包括各种原因死亡在内,此时种毒为300代以后),说明兔化毒对猪的毒力已充分减弱。从其对猪的毒力演变过程来说,毒力减弱是随通过兔体传代数增加,而逐渐发生变化的。本试验还进一步证明了兔化毒毒力减弱后的稳定性,这株病毒虽连续回归通过易感仔猪6代,对生后15天的吃乳猪仍很安全。可以说,对猪的毒力并未增强,即使大量静脉注射仔猪也未发生可见反应。兔化毒免疫猪,不排泄病毒,猪体内也不长期保毒,与健康猪同群饲养,并不发生接触感染。免疫生后10—40天的吃乳猪,不影响其发育,初步观察对怀孕22天—3.5月的母猪,不发生流产,正常产仔。各省区在应用期中,也曾仔细观察兔化毒对吃乳猪和仔猪的安全性,未报告有什么不良反应产生。河南、陕西曾用以接种生后3天的吃乳猪,也没有什么反应,发育正常。不论根据实验室和在全国广泛实践应用的结果,均证明猪瘟兔化毒对猪的毒力已显著减弱,而对猪的免疫力仍很坚强,与国际文献所报导的其他各国应用的猪瘟弱毒株相比,品质是优良的。可以说是一株理想的猪瘟活毒疫苗弱毒株。从1956年开始,先后供给苏联、越南、匈牙利、罗马尼亚、保加利亚及朝鲜人民民主共和国等国应用,已分別取得控制或消灭猪瘟的良好效果。     

猪瘟兔化弱毒的研究——Ⅰ 猪瘟兔化弱毒对家兔的感染性

(一)用四株猪瘟病毒感染家兔,从中选育出一株能适应于家兔同时减弱了对猪的致病力。这株猪瘟兔化毒自1954年初至1958年底已通过大耳白兔430代。家兔感染兔化毒仅发生体温反应,无其他临床症状及特征性病理变化。 (二)病毒在通过大耳白兔的过程中,家兔出现的热反应率,随通过兔体代数的增多而增高。1955年通过兔体120代,平均热反应率80％,定型热占63.75％,自80代往后,热反应率开始上升;1956年通过兔体100代,平均热反应率达92.96％,定型热占78.33％;1957年全年平均热反应率一直维持在90％以上,到1958年,平均热反应上升到97.97％,定型热反应占87.87％。显然较早期毒的热反应率为高。 (三)经由静脉接种,反应兔的定型热潜伏期平均为33小时。热稽留期平均为22小时左右,温差达1℃以上。轻热反应潜伏期平均为39小时左右,熱稽留期平均为18小时左右。病毒传代时,按连续每6—8小时测体温一次,就可掌握体温曲线。一般在接种病毒后,体温降达常温前后剖杀采毒。 (四)不同产地家兔接种病毒后,热反应率稍有不同,敏感的大耳白兔和长毛种兔,出现热反应率较高。 (五)兔毒经皮下、肌肉、口腔、鼻腔、静脉接种,都可使兔发生感染。不过经皮下、肌肉和口腔感染发生热反应率稍低;口腔及鼻腔接种的潜伏期,要延长到47—100小时。健康兔与感染兔同笼饲养14—15天,未发生接触感染。 (六)热反应兔的各种脏器中均有病毒。用兔滴定的毒价是:脾达10~(-5),淋巴结达10~(-4)—10~(-5),肺、胸腺达10~(-3),心肌达10~(-2),血达10~(-2),肝、肾10~(-1)—10~(-2),脑10~(-1)。无热反应兔的脏器中,也有与热反应兔相等的病毒,测定脾脏毒价也达10~(-4)—10~(-5),对猪免疫性同样好,证明兔毒确已100％感染家兔。 (七)用大耳白兔测知兔毒在反应兔体内存活期,在接种兔毒后第3—6天内,毒价维持在高峰,第7天开始降低,到第12天在兔体内已测不到病毒。 (八)感染兔在发热期內,白血球总数无变化,但出现淋巴球减少和中性白血球增多,消长时间与体温升降基本吻合,在体温恢复正常后,白血球分类比数也恢复正常。     

猪瘟兔化弱毒的研究 Ⅱ.猪瘟兔化弱毒对猪的安全性

我们自1954年3月开始,研究猪瘟弱毒疫苗。关于猪瘟兔化弱毒(简称兔化毒)连续通过兔体430代的变化情况,及其对兔感染性的有关试验结果,已发表于第一报。本文报告兔化毒对猪的安全性试验的各项结果,试验证明连续通过兔体后,已充分减弱了它对猪的致病力,注射我国各地猪只,都极安全有效。     

猪瘟兔化弱毒的研究 Ⅲ.猪瘟兔化弱毒对猪的免疫性

猪瘟兔化弱毒(以下简称兔化毒)在兔体已传至430代,注射家兔90%以上发生热反应。注射猪反应轻微,对妊娠母猪及仔猪的生长发育皆无不良影响,其详细结果已分别发表于前两篇报告。现将有关兔化毒对猪的免疫性试验结果,整理报告如下:     

猪瘟兔化弱毒的研究 Ⅰ.猪瘟兔化弱毒对家兔的感染性

绪言解放后几年来,用猪瘟结晶紫疫苗预防猪瘟,收到良好效果。但这种疫苗仍存在着以下缺点:保护率较低;产生免疫力慢;免疫期短。为此,进行了猪瘟兔化弱毒疫苗的研究。自1946年开始,H.Koprowski,J.A.Baker,J.R.Hudson,R.V.Johnston【’】     

猪瘟兔化弱毒的研究——Ⅲ 猪瘟兔化弱毒对猪的免疫原性

猪瘟兔化弱毒(以下简称兔化毒)在兔体已传至430代,注射家兔90％以上发生热反应。注射猪反应轻微,对妊娠母猪及仔猪的生长发育皆无不良影响,其详细结果已分别发表于前两篇报告(Ⅰ、Ⅱ)。现将兔化毒对猪的免疫原性试验结果,整理报告如下: 试验经过和结果一、兔化毒对猪最小免疫量的测定及其对兔最小感染量的关系 (一)兔化毒对猪最小免疫量的测定:在种毒继代试验过程中,曾分别采取不同代     

猪瘟兔化弱毒苗生产

犊牛睾丸细胞培养冻干苗对猪瘟的预防起到了极其重要的作用,我国目前普遍使用这种疫苗,但许多地区发生不同程度的猪瘟疫苗免疫失败.提高猪瘟疫苗质量是避免免疫失败的有效方法之一.     

应用猪瘟兔化弱毒与猪瘟毒兔体交互免疫诊断猪瘟的临床试验

<正> 当前,随着猪瘟免疫的连年进行和密度的不断提高,猪瘟流行的特点有了明显改变,由过去的的大面积流行,现在多为零星散发和局部流行;由大小猪、母猪都感染而成为以感染中,小猪为主,加之在临床症状上与仔猪付伤寒、猪弓形体病等有许多相似之处。这就造成疫情诊断上困难,特别是在有混合感染和继发感染的情况下,要正确鉴别     

猪瘟兔化弱毒ⅢC_3克隆株的培育与研究——Ⅰ.应用终点稀释-荧光抗体技术克隆猪瘟兔化弱毒

应用终点稀释-荧光抗体技术获得了克隆化弱毒株(ⅢC_3株)。ⅢC_3克隆株在PK_(15)细胞上传至15代,用DIF试验测定各代次毒价,TCID_(50)可达到10~(5.0)以上。经生物学鉴定试验表明,该克隆株保留了猪瘟兔化弱毒淋脾毒感染家兔出现的特异性热反应和对猪的安全性及良好的免疫原性。对猪最小免疫量达到10~(-5)稀释1ml,与淋脾毒一致。DIF试验与猪体测毒,两者之间存在着密切的相关性。     

猪瘟兔化弱毒疫苗的临床试验

1效力用我国生产的猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞苗免疫无猪瘟抗体及抗原的易感猪,每头皮下注射1头份,14天后分别攻击猪瘟野毒,每头皮下注射猪瘟血毒2毫升。结果表明,猪瘟弱毒细胞苗对9株野毒均具有坚强的保护力,免疫组100％保护,对照组76．5％死亡。以猪瘟荧光抗体法（HCFA）检查,     

兔化猪瘟弱毒及其應用

一、兔化猪瘟弱毒的培育我国秦禮讓、鄭慶端和杜世杰诸氏先後利用猪瘟病毒通過家兔,企圖減弱其對猪的毒力,没有成功。柯佛老司奇(Koprowski,H.)和他的同事用製造疫苗和血清用的猪瘟病毒一株,靜脈接種體重5—8磅的新西蘭家免,三天後剖殺,採取免的脾脏,製成乳劑,5分鐘離心(每分钟轉1000次)後,取其上清液,肌肉接種猪只,經過6天後,再採取猪的脾臟用前法     

仔猪猪瘟兔化弱毒苗过敏

我公司某猪场采用2头份猪瘟兔化弱毒苗进行超前免疫和4头份猪瘟兔化弱毒苗于20日龄对仔猪进行第2次免疫,取得了较好的防疫效果,但在防疫过程中也经常出现20日龄仔猪防疫过敏现象。急性过敏表现为仔猪卧地不起,精神沉郁,呼吸喘促,口吐白沫,全身发红,体温升高,个别的可表现?..     

猪瘟兔化弱毒毒种保存期试验

本试验对３个代次不同冻干日期的猪瘟兔化弱毒进行了兔体最小感染量测定,并对经猪瘟兔化弱毒Ｆ４７６代毒繁殖冻干的两批猪瘟兔化弱毒Ｆ４７９代毒进行了免疫原性鉴定。结果表明,猪瘟兔化弱毒在－７０℃条件下保存１４年、１５年、２９年,其兔体最小感染量均无明显改变;繁殖的两批猪瘟兔化弱毒的最小免疫量均为１０＾－５稀释１ｍｌ,符合《兽用生物制品规程》规定。     

猪瘟兔化弱毒对山羊的感染性

为了解决无兔源地区应用兔化猪瘟弱毒疫苗的问题,我们进行了兔化猪瘟弱毒对山羊的感染试验,其经过和结果报告于下:(一)试验用材料试验所用的兔化猪瘟弱毒种毒和效检用的猪瘟强毒是中监所发给。结晶紫组织苗是四川兽医生物药品厂出品。试验用的山羊,年令不超过二岁,不分性别,选用体格健康,体温不超过39.8℃以上者。     

使用猪瘟兔化弱毒疫苗的体会

我县自1957年以来,猪只普遍注射了猪瘟兎化弱毒疫苗,有效地防止了猪瘟的发生。有以下几点体会:1.注射猪瘟兎化弱毒疫苗后,猪只能迅速的获得免疫。1958年秋季我县畜牧场200多头新金猪,中有十来头感染猪瘟,经彻底检查,对病猪,可疑猪及健康猪分别进行了隔离管理。全部健康猪作了疫苗预防注射。一周内就制止了病的蔓延,保住了