葡萄砧木5BB超声波辅助农杆菌介导法遗传转化的条件

在遗传转化中,超声波处理可以在外植体上产生许多易于农杆菌进入的微小伤口和通道,从而增加农杆菌与外植体之间的接触,提高农杆菌对外植体的转化频率[1].     

超声波辅助对农杆菌介导新红星苹果遗传转化中gus基因瞬间表达的影响

目前,利用农杆菌介导的方法进行遗传转化在植物转基因中被广泛采用。该方法发展历史长,技术也比较成熟,但转化率不高,重复性差[1]。超声波辅助农杆菌介导法(Son i-cation assistedAgrobacterium-m ed iated transform ation,SAAT)是一种将农杆菌介导法和超声波直接转导法相结合     

超声波辅助对农杆菌介导“美人指”葡萄遗传转化中GUS瞬时表达的影响

通过超声波辅助农杆菌介导法,优化"美人指"葡萄遗传转化体系。利用GUS瞬时表达的方法研究了不同功率、时间条件下的超声波处理,外植体类型以及AS浓度对"美人指"葡萄遗传转化效率的影响。结果表明:外植体茎段在含75mg/L AS农杆菌悬浮液中侵染4 min,并在此期间,用功率为90 W的超声波处理14 s,获得最佳GUS瞬时表达率42.8%。     

超声波辅助农杆菌介导法转化鱼腥草的初步研究

应用超声波直接转化法、农杆菌介导转化法、恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s 4种方法对鱼腥草进行转基因研究,结果显示:上述4种转化法对gus基因最大瞬时表达率依次为47%、60%、80%和75%。结论:用恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s两种转化法gus基因的瞬时表达率最高,说明超声波辅助农杆菌介导遗传转化方法是一种高效的鱼腥草转基因方法,它实现了外源基因在植物中的高效表达。     

农杆菌介导的菜薹遗传转化

以菜薹的子叶、下胚轴、子叶柄为外植体进行遗传转化,先在农杆菌中侵染不同的时间,然后转入2种筛选培养基(加AgNO3、不加AgNO3)中,研究了农杆菌介导的菜薹遗传转化最适外植体、最适侵染时间以及AgNO3对外植体的芽诱导的影响。结果表明:子叶柄是最适外植体;15 min侵染时间整体上优于10 min侵染时间;AgNO3可以促进农杆菌侵染后外植体的愈伤组织的诱导。     

农杆菌介导果树遗传转化之研究进展

 综述了农杆菌介导法在果树育种领域研究进展：（1）农杆菌介导的遗传转化在果树抗病、抗虫、抗除草剂、抗冻、抗盐、改良生长特性、生根等方面的研究成果；（2）对农杆菌介导的遗传转化存在的高效离体再生系统的建立、提高转化后再生频率、假转化体和低转化率、过敏性反应、开发基因资源、基因工程的生物安全性、多重转化等问题进行了分析；（3）农杆菌介导叶绿体遗传转化，非组培遗传转化已成为模式植物遗传转化的主要手段，在此简单介绍了其应用情况和技术原理，这些方法在其它植物中也有广阔的应用前景。     

农杆菌介导的针叶树种遗传转化研究进展

农杆菌介导法是目前遗传转化应用最广泛的技术手段之一.本文主要从农杆菌菌株、外植体类型、预培养时间、侵染过程、共培养条件以及抗性细胞的筛选等方面综述了影响针叶树转化效率的因素,为针叶树的遗传转化及遗传育种研究提供参考.     

农杆菌介导的番茄遗传转化体系优化研究

    研究不同的番茄基因型、培养基类型、苗龄、外植体类型、植物表达载体和选择系统等对番茄再生和遗传转化效率的影响.结果表明,7 d苗龄的子叶或13 d苗龄的下胚轴,预培养2 d,侵染20 min,培养基中添加适宜浓度的玉米素(1.0～2.0 mg·L-1)和IAA(0.1～0.2 mg·L-1),以75～100 mg·L-1的卡那霉素筛选,番茄的转化频率最高,分别为51.4%和37.5%.且以卡那霉素抗性基因为筛选标记的质粒p2301 和pBI121作为植物表达载体,其转化频率高于以潮霉素抗性基因为筛选标记的植物表达载体p1301.     

农杆菌介导的橡胶树遗传转化影响因子

论述和分析了影响农杆菌介导橡胶树遗传转化的主要因子，包括橡胶树植物基因型、农杆菌菌株、菌液浓度、培养基附加成分等内外因子，简要概述并对其存在的问题和应用前景。     

农杆菌介导的莴笋遗传转化体系初步研究

为了研究农杆菌介导的莴笋遗传转化的影响因素,建立莴笋高效遗传转化体系,通过设置不同预培养、共培养时间,探讨其对外植体芽分化率的影响;设置不同农杆菌菌液浸染浓度及浸染时间,探讨其对外植体致死率的影响。试验结果表明,对莴笋外植体预培养2d,外植体芽分化率最高;共培养0、1、2d,外植体芽分化率差别不大;当农杆菌菌液OD600值为0.3、0.5,分别侵染1、3、5min,外植体致死率相差不大。因此,在莴笋遗传转化中,采用外植体预培养2d、共培养2d,农杆菌菌液OD600值为0.5、侵染时间5min的遗传转化体系能提高莴笋的遗传转化率。     

根癌农杆菌介导的gl0h基因遗传转化长春花初步研究

以长春花下胚轴为基因转化的受体材料,利用根癌农杆菌EHA105介导,将g10h基因转化到3种不同品系的长春花中.结果表明,附加100 ümol·L-1乙酰丁香酮的根癌农杆菌悬液在OD600=0.5～0.6时侵染效果较好;PCR分子检测转基因植株部分呈现阳性,证明g10h基因已整合到长春花基因组中,3种不同品系的长春花的再生率和阳性率存在差异;采用Real time PCR技术进一步检测g10h基因表达情况,结果表明转基因长春花植株中g10h mRNA表达量比非转基因对照高1.62～3.79倍.     

长春花大田栽培技术

通过育苗、移栽、田间管理以及采收等一系列田间实验,掌握长春花的生长发育、需水、需肥和病虫害发生规律,提出较为有效的栽培方法,基本达到在长春花栽培过程中＂可控、安全、优质＂的目标。为长春花的大面积种植提供技术参考。     

长春花愈伤组织诱导研究

以长春花幼嫩顶芽与茎段为外植体,研究了不同灭菌剂及处理时间对外植体的灭菌效果及外植体材料对愈伤组织诱导的影响。结果表明,长春花顶芽为外植体,用75%酒精灭菌30 s+0.1%升汞灭菌300 s效果较好,此条件下外植体污染率为5.5%、褐变率为9.3%。愈伤组织诱导培养基以MS+3.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D效果较好,诱导率可达86.6%。以长春花顶芽为外植体时产生愈伤组织的时间较旱,出愈率为92.6%,愈伤组织团块大、致密,表面有小疣突,预期有较好的不定芽分化能力。     

长春花压花护色的研究

压花护色是提高压花作品的一项重要技术,主要目的在于保护天然色素的稳定性。以长春花为试验材料,配制不同浓度的柠檬酸、甘油、蔗糖、草酸和硫酸镁等保色剂,浸泡一段时间后放入烘箱里干燥,选取适合长春花花瓣和叶片的保色方法。试验结果表明,长春花花瓣在15%柠檬酸中浸泡0.5 h后,在60℃的烘箱里干燥2 h的保色效果最好;长春花叶片在20%硫酸镁浸泡0.5 h,在60℃的烘箱干燥2 h的保色效果最佳。     

农杆菌介导仙客来遗传转化体系的建立

采用根癌农杆菌介导法,研究Mn-SOD基因转化中影响仙客来品种"鲜红1011"叶片转化效率的多种因素,建立仙客来遗传转化体系.结果表明:以叶片为受体材料,培养基中加入50 mg/L Kan(进行抗性筛选),500 mg/L Cef(脱菌),叶片经2 d的预培养,以OD600值为0.4～0.6的菌液侵染5～8 min,共培养3 d有利于仙客来叶片的遗传转化.     

长春花内生真菌的分离及鉴定

[目的]为研究内生真菌与长春花悬浮细胞互作奠定基础。[方法]从长春花茎杆韧皮部分离出内生真菌,对分离出的菌株进行鉴定,用PDA培养基、PDA培养基+长春花悬浮细胞的水提物对内生真菌进行液体培养,薄板层析检测内生真菌液体培养物的提取物及发酵液。[结果]从常规PDA培养基中分离得到11株菌株,而从其他PDA培养基中没有分离到内生真菌。分离出的11株菌株的大型分生孢子呈纺锤形或镰刀形,其代谢产物通过薄层层析,没有检测到长春花生物碱。表明分离出的内生真菌本身不能直接合成长春花生物碱,而可能对生物碱的合成起促进作用。[结论]从长春花中分离得到的内生真菌属镰刀菌属。     

农杆菌介导的柳枝稷遗传转化体系的优化

【目的】为建立农杆菌介导的柳枝稷高效再生及遗传转化体系。【方法】试验以柳枝稷品种Alamo、Performer及Blackwell的成熟种子为外植体诱导愈伤组织。愈伤诱导6周后,借助解剖镜观察愈伤形态,去除愈伤组织外层含水量大、海绵状愈伤组织,挑选位于愈伤组织中心位置的核状、紧实型愈伤置于继代培养基培养。暗培养3周后,在解剖镜下挑选结构松脆、生长旺盛的愈伤组织按细胞系继代增殖培养。该类愈伤组织易于分化,属单子叶植物愈伤组织分类中的第Ⅱ型。经两次继代增殖培养后,可以获得足够的愈伤组织进行再生和遗传转化研究。为优化柳枝稷Ⅱ型愈伤组织的农杆菌侵染流程,试验比较了3种农杆菌侵染流程下的转基因效率。真空和干燥处理（VD）：将装有愈伤组织及菌液的50 mL离心管置于真空泵中抽真空10 min（压力-0.8MPa）,28℃, 80 r/min慢摇20 min后弃菌液,将愈伤组织堆放于3层滤纸上干燥处理2 h,随后将愈伤组织转入含有500 μL无菌水的2层滤纸上进行共培养;冷处理加真空和干燥处理（CVD）：侵染前将愈伤组织置于3%麦芽糖、300 μmol·L^-1谷氨酰胺（Gln）溶液中冰浴20 min,然后依VD流程侵染,共培养阶段用MP培养基代替无菌水;渗透冷处理加真空和干燥处理（PVD）：用6%的麦芽糖溶液替代CVD中3%麦芽糖溶液。通过比较Gus染色及PCR阳性率来评价三种方法的转化效率。【结果】愈伤挑选方法不仅从柳枝稷低地型品种中挑选得到再生率达95%以上的Ⅱ型愈伤细胞系,也首次获得高地型品种Blackwell的Ⅱ型愈伤组织,分化率达50%。不同转化方法评价过程中发现,低地型品种AlamoⅡ型愈伤组织采用CVD农杆菌侵染流程转化效率最高,达72%,显著高于侵染流程VD（53%）和PVD（44%）。应用CVD转化法,Performer转化率达96%;首次成功进行了高地型品种Blackwell的遗传转化,转化效率为5.6%。【结论】本研究建立了借助解剖镜挑选柳枝稷易于再生的Ⅱ型愈伤组织的方法,该方法适用于柳枝稷不同生态型品种;农杆菌转化过程中采用CVD侵染流程可显著提高转基因效率。本研究首次报道了柳枝稷Ⅱ型愈伤组织的挑选流程,建立了适合不同生态型柳枝稷的高效再生及遗传转化体系,首次获得高地型品种Blackwell的转基因植株,为柳枝稷遗传改良及其功能基因研究奠定基础。该方法也适用与其他难于再生的单子叶植物再生及遗传转化体系的建立。     

一种高效的农杆菌介导大豆子叶节转化体系的建立

以子叶节为外植体的农杆菌介导的大豆遗传转化体系,其转化效率受到受体基因型、无菌苗状态、丛生芽诱导及伸长和生根过程涉及的多种因素的影响。作者筛选了10个大豆栽培品种,选择诱导率最高的东农50作为转化的受体品种,建立子叶节为外植体的遗传转化化体系。还对萌发培养基中6-BA添加量和生根方式进行了研究。结果表明:萌发培养基中不添加6-BA伸长率可达2.51%～20.59%;伸长芽切下后浸入1mg/L的IBA中处理1min后于1/2MS培养基中生根,生根时间缩短,生根率提高至85.25%。经PCR检测,本转化体系的转化率最高可达7.10%。     

农杆菌介导的pac1基因转化大豆研究

选用高感大豆花叶病毒病而再生能力较强的大豆品种和品系作为受体,对丛生芽诱导培养基、侵染菌液的制备以及根的诱导方法进行了优化。采用优化后的遗传转化体系以农杆菌介导法将pac1导入大豆,MSB培养基中附加2 mg/L6-BA+0.2 mg/LIBA进行丛生芽诱导,液体YEB重悬活化菌体后侵染,MSB培养基中蔗糖含量15%+2 mg/LIBA+0.2 mg/L6-BA进行生根诱导。共获得8株PCR检测呈阳性植株,经SouthernBlot检测,证明pac1基因已整合到大豆基因组中。转基因植株对病毒的抗性评价正在进行中。     

长春花种质资源遗传多样性的ISSR分析

本研究利用ISSR分子标记技术对40个长春花种质资源进行了遗传关系分析,多态性PCR扩增结果表明:在115个位点,其中多态位点78个,多态位点百分率为67.8%,多态性较高;POPGENE32软件计算结果表明,40个长春花品种平均有效等位基因数为1.6384,Nei遗传多样性指数平均为0.3735,平均Shannon信息指数为0.5546;应用NCSYS软件计算得到品种间的遗传相似系数介于0.150～0.900,平均为0.584.通过聚类分析将这40个长春花种质分成7组,该聚类结果与以前根据形态进行的分类结果有极大的相似性.