贵州地区土壤中需氧放线菌的分离鉴定

为了解贵州土壤需氧放线菌的分布特点、系统发育和物种多样性,采集贵州贵阳、遵义、安顺、铜仁、毕节、黔南、六盘水、黔东南、黔西南9个区域的农耕地、湿地、森林3个类型土壤标本进行需氧放线菌的分离纯化,扩增其16S rDNA 基因序列后在 GenBank 中进行 Blast 比对分析,并以邻接法构建系统发育树。结果表明：在贵州9个区域108份土壤中分离出173株需氧放线菌,其中链霉菌属（Streptomyces）165株、北里孢菌属（Kitasatospora．）5株、诺卡氏菌属（Nocardioides）2株,在遵义农耕地土壤中分离出链霉菌属潜在新种1株（GYM8-3）。贵州土壤需氧放线菌主要为链霉菌属,在种间水平上存在分类多样性和地域差异性。     

瓜类枯萎病拮抗放线菌T8-41的鉴定

[目的]为阐明1株拮抗放线菌菌株的分类地位提供依据。[方法]以从东北地区蔬菜保护地土壤中分离的1株拮抗放线菌菌株T8-41为试材,分析其形态和培养特征、细胞壁成分和生理生化特性。经PCR扩增后,对其与相关菌株的16S rDNA进行同源性分析和聚类分析。[结果]拮抗菌株T8-41属于典型的链霉菌属菌丝形态。其细胞壁中含有L-DAP和甘氨酸,细胞壁类型为I型。该菌可利用D-木糖、L-鼠李糖、D-果糖、蔗糖、棉子糖、葡萄糖、D-甘露醇和肌醇,但不利用乳糖。可以初步鉴定为绿产色链霉菌。T8-41菌株的16SrDNA全长为1 465 bp,与绿产色链霉菌相似性达99%。[结论]链霉菌T8-41属于青色类群的绿产色链霉菌,可将其定名为绿产色链霉菌T8-41(S.viridochromogenes T8-41)。     

西藏低温放线菌的多样性及其生物活性

【目的】研究西藏低温环境下放线菌的组成及其抑菌效果和酶活性,为放线菌新药物先导化合物和高活性酶的筛选提供资源。【方法】从西藏低温地区采集16份土样,用平板稀释法分离放线菌,经形态学和培养特征初步鉴定后得到有代表性的低温放线菌,对这些代表性菌株的16S rRNA基因序列进行系统发育分析,对其进行鉴定;采用菌丝生长速率法测定代表性低温放线菌菌株发酵液对11种农作物真菌的抑菌活性,并对其纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等活性进行测定。【结果】从16份土样中共分离到22株有代表性的低温放线菌,其在10~25℃均能生长。16S rRNA基因序列分析表明,这22株菌分布于放线菌门放线菌纲2个亚目3个科的3个属,即链霉菌亚目(Streptomycineae)链霉菌科(Streptomycetaceae)链霉菌属(Streptomyces)、假诺卡氏亚目(Pseudonocardineae)束丝放线菌科(Actinosynnemataceae)伦茨氏菌属(Lentzea)和假诺卡氏亚目(Pseudonocardineae)假诺卡氏菌科(Pseudonocardiaceae)拟无支酸菌属(Amycolatopsis),其中以链霉菌属最多,占分离菌的91%。在分离的22株代表性低温放线菌菌株中,27.3%的菌株有抑菌活性;40.9%的菌株具有纤维素酶活性,22.7%的菌株具有淀粉酶活性,18.2%的菌株具有蛋白酶活性。【结论】西藏低温生境中蕴藏着丰富的低温放线菌资源,其中一些菌株具有拮抗活性和酶活性。     

西藏羊八井高温地热田中度嗜热放线菌多样性及生物活性

[目的]探明羊八井地热田放线菌的数量、种类组成、拮抗活性和酶活性。[方法]采用稀释平板法对羊八井地热田底泥和水样放线菌进行分离,通过形态特征、培养特征和16S rRNA基因系统发育分析的方法研究样品中度嗜热放线菌的多样性,并对分离到的放线菌进行抑菌、酶活性及温度耐受试验。[结果]从羊八井温泉底泥和水样中分离到21株中度嗜热放线菌,分布于放线菌门放线菌纲3个亚目3个科3个属,即链霉菌属(Streptomyces)、拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)和小单孢菌属(Micromonospora)。21株中度嗜热放线菌中,14.2%的菌株具有纤维素酶活性,52.3%的菌株具有过氧化氢酶活性,28.6%的菌株具有硝酸盐还原活性,33.3%的菌株可产生硫化氢,只有1株菌对大肠杆菌(E.coil)有抑菌活性,21株中度嗜热放线菌最适生长温度为45~55℃,超过65℃都不能生长。[结论]羊八井地热田放线菌多样性较丰富,产酶特性良好,为开发利用地热环境放线菌资源奠定了基础。     

广西北海红树林土壤放线菌的分离与鉴定

[目的]鉴定广西北海红树林土壤放线菌的物种多样性。[方法]从广西北海红树林土壤中分离、筛选10株典型放线菌菌株,提取基因组DNA,进行16SrDNAPCR扩增与测序,并构建进化树。[结果]通过Blast比对,10株放线菌属于2个属,其中8株为链霉菌属（80%）,2株为拟诺卡氏菌属（20%）。[结论]广西北海红树林土壤蕴藏着种类丰富的放线菌。     

墨脱自然保护区嗜热放线菌多样性及生物活性初步研究简

研究墨脱自然保护区嗜热放线菌的多样性、产酶潜力及其拮抗活性.从墨脱自然保护区采集的35份土样制成土壤悬液,微波分别处理40s,用平板稀释法分离放线菌,形态去重后得到有代表性的嗜热放线菌,测定其16S rRNA基因序列,进行系统发育分析,将分离菌株鉴定到属;采用生长速率法测定各菌株发酵液对2种细菌和5种农作物真菌的抑菌活性,对分离菌株进行纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等酶活初筛.结果表明,从墨脱自然保护区分离到有代表性的24株嗜热放线菌;16S rRNA基因序列分析表明它们分布于放线菌门放线菌纲下4个亚目4个科,4个属,即链霉菌属、马杜拉放线菌属、拟无枝酸菌属和列舍瓦列氏菌属;功能酶筛选结果显示:22.3%具有纤维素酶活性,11.6%具有淀粉酶活性,24.6%具有蛋白酶活性.抑菌活性实验结果表明:嗜热放线菌19.6%有抑菌活性.研究发现墨脱自然保护区生境蕴藏丰富嗜热放线菌资源,酶活性及抗菌活性初步筛选显示出了良好的降解和抗菌活性,为下一步的深入研究提供良好的菌源.     

塔里木盆地胀果甘草内生放线菌多样性及抗菌活性分析

目的从臭椿中分离内生放线菌,测试其代谢产物的体外抑菌活性。方法采用4种培养基分离臭椿组织中的内生放线菌,采用琼脂移块法和平板对峙法研究臭椿内生放线菌的抑菌活性,通过形态特征和16S rRNA 序列分析对高活性菌株进行菌种鉴定。结果4 种培养基中以HV培养基分离效果最为理想;从臭椿组织中共分离纯化获得45株内生放线菌,有26株菌株对指示菌表现出不同程度的抗菌活性,占总分离菌株的57.78%;其中,菌株AAA19对6种供试菌株均有抑制能力,拮抗作用最强,菌种鉴定结果表明该内生放线菌为抗生素链霉菌(Streptomyces antibioticus)。结论臭椿内生放线菌具有抗菌作用,菌株AAA19具有潜在的开发应用价值。     

高放射土壤中拮抗放线菌菌株的筛选及鉴定

【目的】从新疆高放射土壤中分离和筛选出对苹果树腐烂病等有拮抗作用的放线菌,并对其进行鉴定。【方法】采用对峙培养法通过初筛、复筛测定拮抗菌对8种病原菌的拮抗效果,根据筛选出菌株CH10的形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列对其进行鉴定。【结果】从70种放线菌中筛选出对苹果树腐烂病等8种新疆作物重要病原菌都具有良好拮抗效果的CH10。【结论】菌株CH10属于链霉菌属,对苹果树腐烂病菌等有良好的拮抗效果,为该病害的生物防治提供研究基础。     

放线菌gan-1的分类鉴定

对具有拮抗活性的放线菌gan-1的形态、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16S rDNA序列进行了研究分析.结果表明,放线菌gan-1的菌落特征及生理生化特性与弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)高度一致,二者的16S rDNA序列的相似性达到了99%.因此,可将菌株gan-1定名为弗氏链霉菌gan-1(Streptomyces fradiae gan-1).     

承德地区放线菌物种多样性分布的研究

对采自承德地区南部五县及市区土样共403份,进行了放线菌的分离纯化,并对放线菌的形态、细胞壁化学组分、部分菌株16SrDNA序列进行研究,经初步分析,分离得到的1万余株放线菌,大约95%属于11个已知属。结果表明:承德地区放线菌资源较为丰富,区域地理状况、气候、植被、根系、土壤性质等因素对放线菌的分布有一定的影响,应引起足够重视。     

沙棘和沙枣根瘤中固氮放线菌物种多样性研究

[目的]以沙棘和沙枣根瘤为研究对象,深入研究固氮放线菌物种的多样性。[方法]以通常用于分离弗兰克氏菌属（Frankia）固氮放线菌的无氮BAP、S、JA、ISP4、CB-CcI3、DPM和FTW等为固体和液体培养基,对采集自内蒙古通辽和赤峰的沙棘（Hippophae）和沙枣（elaeagnus）植物根瘤进行放线菌的分离纯化,并依据16S rDNA序列测定结果对分离物进行系统发育分析。[结果]分离得到的8株放线菌分属于小单孢菌属（Micromonospora）、链霉菌属（Streptomyces）、野野村菌属（Nonomuraea）和假诺卡菌属（Pseudonocardia）,所有根瘤样品中均未分离到弗兰克氏菌属菌株;采用弗兰克氏菌属16S-23S rDNA间隔区序列的特异性引物对所采集的沙棘和沙枣植物根瘤总DNA进行PCR扩增,未出现特异性的16S-23S rDNA间隔区序列条带。[结论]非豆科植物根瘤内固氮放线菌具有物种多样性,为今后固氮放线菌物种多样性研究提供借鉴。     

北海山口·大冠沙红树林放线菌的筛选与鉴定

[目的]了解广西北海山口、大冠沙红树林海泥中的放线菌资源。[方法]采用海水配制高氏培养基,分离来自广西北海红树林海洋淤泥中的放线菌样品,从中筛选、分离、提取10株典型放线菌菌株总DNA,用放线菌通用引物对16SrDNA进行PCR扩增,对扩增结果进行DNA序列测定。[结果]10株典型放线菌菌株中,8株（80%）是链霉菌属,为常见放线菌;2株（20%）是拟诺卡氏菌属,为稀有放线菌。[结论]广西北海红树林海洋淤泥蕴含着种类丰富的放线菌。     

中国马铃薯疮痂病病原菌16S rDNA的遗传多样性分析

 【目的】利用16S rDNA序列对来自中国8个省（区）的34株马铃薯疮痂病菌和15株参比菌株进行系统发育分析。【方法】采用链霉菌通用引物对34株测试菌株的基因组进行16S rDNA序列扩增,测序后在GenBank中进行BLASTn比对,选取同源性较高的菌株构建系统发育树。【结果】34个测试菌株均为链霉菌属,其中Streptomyces scabies 12株、S. galilaeus 8株、S. bobili 6株、S. turgidiscabies 1株、S. acidiscabies 1株、S. diastatochromogenes 2株、S. setonii 1株、S. enissocaesilis 3株。其中S. galilaeus、S. bobili和S. enissocaesilis等种均为新发现的疮痂病病原。对各菌株的分布分析发现,山东省的疮痂病菌有4种,内蒙古自治区和陕西省有3种,四川省、河北省和山西省均有2种,黑龙江省为1种。【结论】中国马铃薯疮痂病菌存在明显的遗传多样性,且分布较为复杂。     

一株具有抗菌活性红树林土壤放线菌的分离和鉴定

分离和鉴定具有抗菌活性的红树林土壤放线菌。基于形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析,研究通过稀释分离法从广西北海红树林的高盐泥样中分离到1株细菌。系统进化分析表明,分离菌株与链霉菌属Aurantiogriseus AY999773具有99%的同源性,因此,BH0951初步被鉴定为链霉菌属Aurantiogriseus AY999773的变种。说明放线菌BH0951具有抗菌活性,本研究能为本菌株乃至广西北海红树林的微生物资源的开发和利用提供初步数据。     

具有抗菌活性红树林土壤放线菌BH0951的分离和鉴定

以广西北海红树林高盐泥样为材料,采用高氏1号培养基对其中的菌株进行分离纯化,通过抗菌试验筛选出1株放线菌BH0951,该菌株的发酵产物具有较强的抗菌活性,其最适生长温度为28℃,最适生长pH值为7.0。提取其总DNA,采用通用引物对其16S rDNA进行PCR扩增,并对扩增产物进行序列测定。结果表明,BH0951为链霉菌属（Streptomyces aurantiogriseus）AY999773的变种。     

济宁市土壤放线菌资源调查研究

从济宁市采集土样,采用高氏1号琼脂和淀粉铵琼脂两种培养基分离放线菌,按国内外通用方法进行鉴定,并对土壤放线菌主要属——链霉菌属的类群进行分析与鉴定。结果表明:同一样品在高氏1号琼脂培养基上分离得到的放线菌要高于淀粉铵培养基上的。放线菌组成中,链霉菌占绝大多数,达放线菌总数的70%以上,其次是小单孢菌属,马杜拉放线菌属和诺卡氏菌属;链霉菌类群的组成较复杂,主要为白孢类群和粉红孢类群。     

铅锌矿区重金属污染对微生物数量及放线菌群落结构的影响

采集四川省汉源县富泉乡万顺铅锌矿区5个不同重金属浓度的土壤样品,进行了微生物数量及放线菌多样性的研究.经分离、纯化得到43株不同的放线菌,然后对其进行BOXAIR-PCR和16S rDNA PCR-RFLP分析.结果表明,铅锌矿区重金属复合污染对土壤微生物数量有较大的影响,随着铅锌矿区重金属污染程度的加剧,土壤微牛物的总数下降.相关性分析表明,重金属含量与细菌数量呈极显著负相关(P<0.01),与放线菌数量、真菌数量呈显著负相关(P<0.05).供试菌株的16S rDNA用Hae Ⅲ、Hinf Ⅰ和Taq Ⅰ酶切后具有32种遗传图谱类型.BOXAIR-PCR的聚类结果表明在86%的水平上,所有菌株分为10个遗传类型,结果基本与16S rDNA PCR-RFLP聚类差异不大.来源于高重金属的含量样品的菌株基本聚在一起,可能是重金属含量影响了放线菌的分布.同时,16S rDNA序列聚类分析结合系统发育树分析表明链霉菌属是汉源铅锌矿区主要的放线菌属并且具有遗传多样性.     

新疆两泥火山可培养中度嗜盐微生物多样性

[目的]了解新疆乌苏和独山子两泥火山可培养中度嗜盐菌的多样性.[方法]采用10;NaCl盐浓度的ISP5培养基,对两泥火山样品进行可培养菌分离、16S rDNA鉴定及系统发育分析.[结果]从新疆两泥火山中共分离得到26株中度嗜盐细菌和放线菌,乌苏泥火山13株,分属于7个属:Nesterenkonia、Bacillus、Salinicoccus、Nocardiopsis、Halomonas、Halophilic和Micrococcacea,其中Nesterenkonia属为优势菌群;独山子泥火山13株,隶属于6个属:Halomonas、Marinobacter、Bacillus、 Salinicoccus、Nocardiopsis和Halolactibacillus,其中Halomonas和Marinobacter属为优势菌群.4株可能为潜在的新种.[结论]新疆两泥火山可培养中度嗜盐细菌和放线菌具有较为丰富的生物多样性,且潜藏着新的菌种资源,具有进一步研究开发价值.     

羽毛降解菌的分离及多样性分析

从禽肉加工厂的污泥中分离到174株能在牛奶琼脂平板产透明圈微生物菌株,其中42株具有分解羽毛的能力,从中筛选出13株具有较强羽毛降解能力的菌株,均能在48 h内将羽毛完全分解。16S rDNA的BLAST比对及系统发育树分析结果显示,8株菌为寡养单胞菌属(Stenotrophomonas),1株菌为芽孢杆菌属(Bacillus),4株菌为气单胞菌属(Aeromonas)。