TTC法测定水稻土泥浆中脱氢酶活性的影响因素

以厌氧水稻土泥浆为供试材料,采用不同质量浓度2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)、反应时间、萃取剂及测定波长等条件,对影响水稻土泥浆中脱氢酶活性测定的因素进行探讨。结果表明,10g/L TTC的灵敏度最高,10～20g/L可作为测定水稻土泥浆中脱氢酶活性的适宜质量浓度;相应的脱氢酶活性在0.25h时最高,并随着反应时间的延长而逐渐降低。乙醇和丙酮对三苯基甲臜(TF)的萃取效果优于甲醇和甲苯,且0.2h为最佳的萃取时间。通过比较标准体系和泥浆体系的差异,TF的最佳吸收峰为480nm。测定土壤泥浆脱氢酶的最佳条件为10g/L TTC,恒温水浴反应0.25h,乙醇萃取0.2h,在480nm下比色测定TF的生成量。     

水稻磷脂酶A活性测定方法的研究

为了优化水稻磷脂酶A活性测定方法,研究了多种因素对水稻磷脂酶A活性的酸碱滴定测定方法的影响.结果表明水稻磷脂酶A活性酸碱滴定法测定的适宜条件为:起始pH8.0,反应温度40℃,20.0 mL底物,4.0mL酶的粗提液,提取缓冲液的体积与叶片样品重量的比值(mL/g)为2.5,反应时间7h.     

低温污水处理器中耐冷菌脱氢酶活性分析

[目的]为解决我国北方冬季污水处理困难的问题提供技术支持。[方法]运用TTc法分析了pH值、温度和时间对从低温生物膜中分离纯化鉴定得到8株耐冷菌中脱氢酶活性的影响。[结果]菌株S1、S4、S5、S7和S8在最适温度和4℃下的最适pH值都是7．5,其他3株茵在2种温度下的最适pH值不同,但都在7．5—8．5的范围内。菌株S1、S3、S4、S5和S6的最适反应温度为30℃,菌株S2、S7和S8的最适反应温度为20℃。除菌株S3外,其余菌株在4℃下的最适反应时间比最适反应温度下的长。在4℃下,菌株S3、S4和S6的最适pH值和最适反应时间分别为8．5和0．6h、7．5和12．0h、8．0和0．5h,其最高脱氢酶活性分别为7．19、6．73和7．70mg（TF）／g（SS）。[结论]菌株S3、S4和s6的脱氢酶活性较高,适合用于处理低温污水。     

酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷农药残留

利用酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷农药残留,以小麦为对照,比较了大豆、玉米、绿豆等10种植物中植物酯酶活性,优化了植物酯酶提取条件。同时系统地研究了酶促反应条件,建立了酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷农药残留的方法。研究结果表明,以绿豆中提取的粗酶酶活最高,提取条件为:以0.1 mol/L pH值6.2的磷酸缓冲液为提取剂,按固液比1∶5(W/V)加料,在40℃搅拌20 m in,过滤。最佳酶促反应条件为:反应体系0.1 mol/L pH值6.0磷酸缓冲液、反应时间15 m in、反应温度40℃、显色时间10 m in、测定波长520 nm处吸收峰值;样品提取用含10%乙醇的0.1 mol/L pH值6.4的磷酸缓冲液超声波振荡10 m in;方法的回收率为86.7%~97.1%,最小检出限为0.13~0.24μg/m l。     

柿果实乙醇脱氢酶酶学特性研究

以磨盘柿（Diospyroskaki Thunb．）果皮为试材,提取乙醇脱氢酶（Alcohol Dehydrogenase）并进行纯化。经过30％～70％硫酸铵沉淀分离、SephadexG-25脱盐柱脱盐、DEAESepharose Fast Flow离子交换层析纯化后,研究温度、pH、金属离子、底物对乙醇脱氢酶活性的影响。结果表明,纯化后乙醇脱氢酶纯化倍数为41．80倍,活性回收率为44．73％。将乙醇脱氢酶酶液分别置于20、30、40、45、50、55和60℃温育后测定,其最适反应温度为45℃;在pH5．0、7．0、8．0、9．0、10．0和11．0下乙醇脱氢酶的最适PH为10．0;在甲醇、乙醇、丙醇、丁醇和戊醇为反应底物时,最适底物为丁醇;金属离子中,K^＋0和Na^＋对活性略有增强的作用,二价金属离子除Mg2＋几乎没有影响之外,Zn2＋、Mn2＋和Ca^2＋对酶活性有一定的抑制作用,Cu^2＋和Fe^3＋则完全抑制了酶的活性。在25℃,pH10．0的条件下ADH氧化乙醇的米氏动力学参数Km值为8．33mmol／L,最大反应速度Vmax为0．021μmol／min。乙醇脱氢酶的活性受温度、pH、金属离子、底物的影响较大,并且只有在合适的条件下,酶活性才能达到最大值。     

绿盲蝽乙酰胆碱酯酶最佳反应体系的建立

为明确绿盲蝽[Apolygus lucorum(Meyer-Dür)]乙酰胆碱酯酶(AChE)活性测定的最佳反应条件,采用正交试验研究了酶浓度、底物浓度、反应时间、反应温度、反应体系pH值5个因素对绿盲蝽三龄若虫AChE活性测定的影响。通过极差分析和方差分析发现,各因素对AChE活性测定影响的大小顺序为:反应时间酶浓度底物浓度pH值反应温度。绿盲蝽若虫AChE活性测定的最适反应条件为:酶浓度6头/mL、底物浓度6mmol/L、反应时间5min、反应温度35℃、pH值8.0。     

玉米叶片硝酸还原酶活性测定方法的优化

以玉米(Zea mays L.)自交系许178为材料,通过考察研磨方法、NADH用量、温度、pH、反应时间、显色时间对玉米叶片硝酸还原酶活性的影响获得最优试验条件。结果表明,石英砂研磨比液氮研磨测得的酶活性高;反应温度35℃、pH 7.5为较适反应条件;反应时间和显色时间均为10 min时测得的硝酸还原酶活性与标准方法相比无显著差异;还原剂NADH用量减少至一半测得的硝酸还原酶活性与标准方法无显著差异。综上所述,玉米叶片硝酸还原酶活性测定的优化处理方案为用石英砂研磨,加入0.15 m L NADH,在35℃、pH 7.5的条件下反应10 min,显色10 min。     

玉米中β-D-葡萄糖苷酶活性测定条件的研究

为了研究玉米植株中β-D-葡萄糖苷酶测定的最佳条件,建立快速准确的β-D-葡萄糖苷酶活性的检测方法。本试验以玉米品种泰玉11号为研究材料,研究了以对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)为底物,分光光度比色法测定玉米叶中β-D-葡萄糖苷酶活性的反应条件(包括缓冲液pH值、底物浓度、测定波长、反应温度和时间)。结果表明,当反应温度为40℃、反应时间为40 min、缓冲液pH值4.8、反应底物pNPG的浓度为10 mmol·L~(-1)、测定波长为402 nm时,β-D-葡萄糖苷酶的活力最大。     

尖孢镰刀菌中β-D-葡萄糖苷酶活性测定条件的研究

试验以对硝基-β-D-葡萄糖苷为底物,对尖孢镰刀菌中的β-D-葡萄糖苷酶活性测定条件进行了研究,包括缓冲液pH值、底物浓度、反应温度和时间等条件对酶活性的影响。结果表明,当温度为50℃、pH5.0、底物浓度达到4 mmol/L、反应时间为16 m in时,酶活力达到最大。     

百合鳞茎蔗糖合成酶活性检测体系的建立

为了建立富含多糖的百合鳞茎蔗糖合成酶(sucrose synthase,EC2.4.1.13,SuSy)活性检测体系,深入研究其蔗糖代谢机制,以兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)鳞茎外层鳞片为试材,分别研究了提取缓冲液种类及pH值、反应温度、底物浓度以及缓冲液pH值对SuSy合成和分解方向活性的影响.结果表明:SuSy合成方向活性检测的最适提取缓冲液是pH值为7.8的TrisHCl,最适反应温度为50℃,底物果糖最适浓度为50 mmol· L-1,UDPG最适浓度为5 mmol·L-1,反应缓冲液Tris-HCl最适pH值为7.5;SuSy分解方向活性检测的最适提取缓冲液为pH值7.8的Hepes-NaOH,最适反应温度为40℃,底物蔗糖最适浓度为10mmol· L-1,UDP最适浓度为7 mmol·L-1,反应缓冲液Mes-NaOH最适pH值为4.5.     

橄榄蛏蚌不同组织乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶的电泳分析

为了解橄榄蛏蚌的生化遗传特性,采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳,研究了橄榄蛏蚌闭壳肌、斧足、鳃、肠道、外套膜中乳酸脱氢酶（LDH）和苹果酸脱氢酶（MDH）同工酶的电泳酶谱和活性。结果表明,橄榄蛏蚌5种组织乳酸脱氢酶共检测到5条酶带,5种同工酶在闭壳肌中均有表达,在肠道和鳃中只检测到2种,在外套膜中检测到1条酶带;苹果酸脱氢酶检测到4条酶带,其中闭壳肌含有4条谱带,鳃、斧足和盲肠具有3条谱带,而外套膜具有2条染色很浅的微弱带。可见2种同工酶的分布均具有组织特异性。     

柠檬醛对黄曲霉细胞内两个氧化还原酶的影响

柠檬醛（citral）是单萜类小分子芳香醛，研究发现它能有效地抑制黄曲霉细胞内苹果酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶2种酶的活力，其中苹果酸脱氢酶的活力降低了29．2％（以NADP^ 为辅酸）和23．8％（以NAD^ 为辅酶），琥珀酸脱氢酶的活力降低了27．1％。     

苹果果实GalDH和GalLDH基因的表达与AsA的关系

 【目的】进一步探明苹果果实是否具有抗坏血酸（AsA）合成的能力。【方法】从‘嘎拉’苹果果实中克隆AsA合成关键酶L-半乳糖脱氢酶（L-galactose dehydrogenase, GalDH）全长cDNA序列,检测它与另一合成酶L-半乳糖-1,4-内酯脱氢酶（L-galactono-1,4-lactone dehydrogenase, GalLDH）在苹果不同组织中的表达及酶活性与AsA含量的关系。【结果】克隆获得的苹果GalDH cDNA含有975 bp的完整开放阅读框,编码一条分子量为34.97kD、含324个氨基酸残基的蛋白质,登录号为GQ131419。在叶片和苹果果实不同组织中,均能检测到GalDH和GalLDH基因mRNA表达和活性,叶片高于果实,幼果高于成熟果,果皮高于果肉。同时,苹果果皮中的AsA含量受光的调控,二者在阳面果皮的表达和活性明显高于阴面果皮,而阳、阴面果肉间无明显差异。不同组织中的AsA含量与GalDH和GalLDH活性均呈显著正相关性。【结论】进一步证明了苹果果实自身具有经L-半乳糖途径合成AsA的能力,且合成可能是苹果果实AsA形成的主要决定因子。     

不同海拔地区牦牛组织线粒体LDH活性测定

[目的]进一步探讨高原动物对高原低氧的适应机制。[方法]测定青海省玛多县(海拔4300 m左右)和刚察县(海拔3 300 m左右)牦牛心肌、骨骼肌线粒体中的乳酸脱氢酶(LDH)活性。[结果]玛多县和刚察县牦牛心肌、骨骼肌线粒体的乳酸脱氢酶(LDH)活性分别为(2472.40±276.58)、(2448.71±494.69)、(3855.07±316.44)、(3882.62±602.87)U/gPro;玛多牦牛的心肌、骨骼肌线粒体中的LDH活性极显著低于刚察牦牛(P<0.01)。[结论]在高原低氧环境下,牦牛随海拔高度升高对无氧代谢的依赖性降低。     

母体妊娠期和哺乳期蛋白限饲对后代育肥猪肌纤维特性的影响

为探讨母猪妊娠期和哺乳期蛋白限饲对后代育肥猪肌纤维特性的影响,试验选用16头配种日期、系谱、体重、日龄等相近的纯种小梅山初产母猪(80 kg左右),采用单因子试验设计,根据在整个妊娠期和哺乳期饲喂不同蛋白水平(正常水平和限饲水平,限饲蛋白水平为正常蛋白水平的50%)的日粮,将16头母猪随机分为2组:限饲组和对照组,每组...     

山梨醇脱氢酶作用机制及其与滞育的关系

山梨醇脱氢酶(sorbitol dehydrogenase或SDH)是多元醇代谢通路中的关键酶,可将底物D-山梨醇、L-艾杜淳、D-木糖醇、D-半乳糖醇等氧化成果糖。催化需要金属离子Zinc和辅酶NAD+。SDH特异性抑制剂直接作用于SDH-NADH复合体,通过阻止产物的释放而抑制酶反应。在近些年对于不同生物打破滞育的研究中发现SDH是滞育胚胎再度开始发育的关键酶。对SDH结构,催化机制以及其与不同物种滞育之间关系的研究进展进行综述。     

蔷薇科果树中山梨醇代谢的酶

介绍了参与山梨醇代谢的三种酶。6-磷酸山梨醇脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖和6-磷酸山梨醇之间的可逆反应,主要存在于叶片中,对山梨醇的合成起重要作用,而几乎不参与山梨醇的氧化;山梨醇脱氢酶主要存在于果实中,在NAD~+或NADP~+存在下催化山梨醇向果糖或葡萄糖的转化;山梨醇氧化酶则氧化山梨醇转化为葡萄糖。这三种酶的性质和季节性变化具有不同特点。     

黄尾鲴不同组织中LDH同工酶的研究

[目的]研究黄尾鲴不同组织的LDH同工酶。[方法]采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和特异性染色方法对黄尾鲴的肝、肾、眼、心4种组织的LDH同工酶进行分析。[结果]酶谱的表达具有明显的组织特异性。酶带由3个基因座位(LDH-A、LDH-B、LDHC)编码,在4种组织中共检测到14条带,其中,心和肾7条带,眼6条带,肝14条带。在PAGE胶趋向阴极侧检测到6条肝脏组织所特有的LDH-C基因编码带。在各组织LDH酶带表达活性上,心中LDH-2、LDH-3和LDH-5表达占优势,肾中LDH-2、LDH-7和LDH-3表达占优势,肝中LDH-13、LDH-9和LDH-12表达占优势,眼中LDH-5、LDH-2和LDH-7表达占优势。[结论]该研究为丰富黄尾鲴遗传学基础研究、遗传育种种质标准的建立和种群生化遗传结构分析提供科学依据。     

山药多糖对2型糖尿病大鼠降糖机理的研究

为探讨山药多糖对2型糖尿病的降糖机理,采用高热量饮食结合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法制备试验性2型糖尿病大鼠模型,以不同剂量山药多糖[(100、70和40 mg/(kg.d)]和二甲双胍100 mg/(kg.d)灌胃治疗4周后,检测血清胰岛素及胰高血糖素、己糖激酶(HK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)的活性。结果表明,与糖尿病模型组比较,山药多糖具有明显的降血糖作用;治疗组HK、SDH、MDH活性显著提高,提示山药多糖对2型糖尿病的治疗机制之一可能是山药多糖提高了糖代谢关键的酶活性。     

Lactate dehydrogenase: An important molecule involved in acetamizuril action against Eimeria tenella

Lactate dehydrogenase(LDH), a vital enzyme in anaerobic glycolysis, is closely associated with the survival of parasites. Previous studies of some parasites have shown that LDH exhibits unique physicochemical properties and molecular structures and may be an ideal potential target for diagnosis and drug screening. In this study, we aimed to investigate the effects of acetamizuril, a novel anticoccidial compound, on LDH in the second-generation merozoites of Eimeria tenella(mz-LDH). Quantitative real-time PCR, Western blot, immunofluorescence and enzyme activity assays were each applied to detect the changes of mz-LDH. Our results indicated that the mRNA and protein levels of mz-LDH were reduced upon acetamizuril treatment. Immunolocalization of mz-LDH demonstrated that considerable amount of mz-LDH was distributed around or in the nuclei of second-generation merozoites within the untreated group; in contrast, the acetamizuril-treated group had very low level of mz-LDH. Meanwhile, LDH enzyme activity assay suggested that a decreased LDH enzyme activity in both cytoplasm and nucleus of merozoites in the acetamizuril-treated group. Moreover, the induced apoptosis in second-generation merozoites by the acetamizuril was evaluated by detecting caspase 3 activity, and acetamizuril was found to significantly increase caspase 3 activity. The above findings show that LDH may play an important role in the mediating the activity of acetamizuril against coccidiosis, and further investigation into this aspect might contribute to new light on the pathogenesis of E. tenella during its interaction with acetamizuril.