苹果α-法尼烯和共轭三烯含量变化与贮藏温度的关系

 以‘红星’苹果为试材，研究α-法尼烯和共轭三烯的合成和转化部位，试验表明，α-法尼烯在果实表皮角质层中大量合成，分别向外蜡质层和向内皮下细胞和果肉薄壁细胞双向转移，在果实表皮蜡质层或角质层中与氧接触，氧化生成共轭三烯和其它氧化产物；虎皮病发生、α-法尼烯与共轭三烯的含量都与贮藏温度呈显著的负相关。     

苹果果皮细胞膜结构变化与虎皮病的关系

国光苹果在贮藏过程中,果皮内α—法尼烯不断积累,60天左右达最大值,后随共轭三烯的迅速增加而下降。与此同时,果皮中丙二醛积累,组织相对电导率增加。抗氧化剂二苯胺能显著降低果皮中丙二醛积累,阻止相对电导率的上升,减少发病率。对膜结构变化与虎皮病的关系进行了讨论。     

苹果虎皮病的产生与防治

对苹果虎皮病发病的物质基础和机理进行了分析,讨论了防治苹果虎皮病的可能途径.     

苹果AFS基因的克隆与原核表达

 通过RT-PCR扩增到苹果α - 法尼烯合成酶(α-Farnesene Synthase, AFS) 基因的编码区全长,将其克隆到pET-30a ( + ) 上, 构建了该基因的原核表达载体pET-AFS, 转化大肠杆菌BL21。SDS2PAGE检测结果表明, 此基因表达了1个约66 kD的蛋白, 1 mmol/L异丙基-β - D - 硫代半乳糖苷( IPTG) 诱导该基因高效表达, 6 h表达量最高, 诱导产物以包涵体形式存在。     

苹果多酚提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用

对苹果多酚提取物中的酚类物质进行HPLC分析,并分别以可溶性淀粉和4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG）为底物测定了苹果多酚提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。结果表明,苹果多酚提取物中含有没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、绿原酸、表儿茶素、芦丁、根皮苷等酚类物质;苹果多酚提取物对α-淀粉酶具有较强的抑制...     

苹果内根-贝壳杉烯氧化酶基因的克隆及序列分析

内根-贝壳杉烯氧化酶(KO)是赤霉素合成代谢的关键酶。以苹果(Malus×domestica Borkh.)品种富士(Fuji)为供试材料,应用同源克隆和RACE方法从其茎尖中克隆到KO的cDNA全长序列,命名为MdKO,GenBank登录号:AY563549,其长度为1 859 bp。MdKO的开放性阅读框(ORF)编码514个氨基酸残基,推断其相对分子量为58.9 ku,等电点为7.63。氨基酸同源性分析表明,MdKO与已报道的其他植物的KO氨基酸序列具有较高的相似性;氨基酸聚类分析表明,苹果和梨首先聚类,其次是葡萄;序列结构分析表明MdKO属于细胞色素超家族P450系,具有细胞色素P450的血红素结构域FXXGXRXCXG和跨膜结构域;亚细胞定位分析发现MdKO可能位于内质网膜上。     

黄芪鲨烯合酶基因的克隆和序列分析

参照豆科其他植物的鲨烯合酶基因序列设计了引物,通过逆转录PCR方法,从荚膜黄芪(Astragalus membranaceus (fish.) Bge)中克隆了鲨烯合酶基因cDNA序列(GenBank登录号HQ829974).通过BLAST发现黄芪鲨烯合酶推测的氨基酸序列与大豆鲨烯合酶( BAA22559.1)序列相似...     

‘红富士’苹果果实蔗糖代谢与酸性转化酶和蔗糖合酶关系的研究

 ‘红富士’苹果果实生长发育过程中糖积累和糖代谢相关酶活性的变化规律表明, 发育前期, 可溶性酸性转化酶和细胞壁结合酸性转化酶活性与此阶段果实中可溶性糖的积累量呈显著的负相关; 发育后期, 蔗糖合酶与蔗糖的积累水平呈显著的正相关。据此认为,红富士苹果果实蔗糖代谢可能主要受到酸性转化酶和蔗糖合酶的调控。     

苹果和梨AFS基因启动子的克隆、序列比对及功能分析

苹果（Malus × domestica L.）和梨（Pyrus communis L.）果实在低温储存过程中虎皮病的发生与果皮中受乙烯诱导的α–法尼烯合酶基因（AFS）的表达及α–法尼烯的积累密切相关。采用TAIL-PCR技术分别从‘富士’苹果和‘丰产’梨中克隆到了约2 kb的α–法尼烯合酶基因（AFS）启动子序列,并提交至GenBank中（登录号分别为KM676083和KM676082）。序列比对发现两启动子同源性仅为48.31%,远低于其下游编码区97%的相似度。顺式作用元件在线预测分析发现二者同时存在乙烯、脱落酸、茉莉酸、水杨酸等激素响应元件,低温、厌氧、病原菌等胁迫响应元件,以及3个节律性表达元件和2个诱导子响应元件。对‘丰产’梨中AFS基因表达模式的分析也证实了部分预测的诱导因素对其表达有调控作用。将‘丰产’梨AFS基因启动子序列进行系列删除,与GUS报告基因构建融合表达载体转化烟草,利用GUS染色方法分析了不同长度启动子的转录活性差异,发现缩短至153 bp的启动子片段仍具有较强的转录活性,且长度在276 bp至573 bp的启动子片段其驱动下游基因转录的活性较其他片段更强。通过后续对各作用元件尤其是乙烯响应元件的研究将有助于进一步从分子水平认识虎皮病的发生机制。     

‘新红星’苹果果实蔗糖合酶的活性及亚细胞定位

 在‘新红星’苹果果实发育过程中, 伴随果糖、葡萄糖和蔗糖的积累, 蔗糖合酶的分解活性逐渐下降, 而合成活性逐渐升高。苹果果实的蔗糖合酶由分子量为90 kD 的亚基组成, 其免疫信号强度随发育进程而增加。蔗糖合酶主要定位于果肉细胞的细胞质中, 发育中后期该酶的分布密度有一定增加。综合结果认为, 蔗糖合酶调控发育早期蔗糖的降解和发育后期蔗糖的积累。     

苹果铁结合蛋白基因的克隆及表达特性

 根据已报道的植物铁结合蛋白基因( ferritin) 的保守区域设计引物, 用RT2PCR 的方法从‘嘎拉’苹果叶片中获得铁结合蛋白基因的全长序列。该基因cDNA共有1 043个碱基, 其中编码区834bp, 编码277个氨基酸残基的蛋白质, 终止密码子后有209 bp左右的3’端尾随序列区。Southern杂交结果显示ferritin基因在‘嘎拉’苹果基因组中至少有7个拷贝存在。0.5 mmol·L ^{- 1}的柠檬酸铁处理‘嘎拉’苹果试管苗不同时间后的定量RT-PCR分析表明, ‘嘎拉’苹果的铁结合蛋白基因随着诱导时间的延长表达量增加, 说明该基因可能在转录水平上受铁诱导表达。     

苹果MdLsi1基因的克隆及生物信息学分析

以"秦冠"苹果叶片为试材,采用RT-PCR技术,克隆了苹果硅转运蛋白基因MdLsi1,并应用生物信息学分析其特征,以期为进一步深入研究硅促进苹果植株生长的分子机制提供参考依据。结果表明:MdLsi1基因全长873 bp,编码290个氨基酸,相对分子量为30.456 kDa。MdLsi1蛋白包含已知硅转运蛋白所具有的特征结构,6个跨膜结构域,2个天冬氨酸-脯氨酸-丙氨酸序列(Asn-Pro-Ala,NPA模体),1个由甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸-精氨酸(GRGS)组成的ar/R选择性过滤器,并且2个NPA模体之间间隔108个氨基酸。MdLsi1基因起始编码位点前1 500 bp序列中除了包含有基本的基因启动子元件外,还含有与多种逆境胁迫相关的顺式调控元件。以上结果提示MdLsi1在苹果植株硅的积累及植株抵御逆境胁迫中发挥重要功能。     

苹果起源演化的考察研究

苹果是栽培种。塞威士苹果Ｍａｌｕｓｓｉｅｖｅｒｉｓｉｉ（Ｌｅｄ．）Ｒｏｅｍ。是苹果的野生种。中国苹果和西洋苹果皆起源于塞威士苹果。西洋苹果（苹果）起源于中亚的威士苹果,但杂有高加索东方苹果Ｍ．ｏｒｅｉｎｔａｌｉｓＵｇｌｉｔｚ．和欧洲森林苹果Ｍ．ＳｙｌｖｅｒｓｔｒｉｓＭｉｌｌ的基因,而中国苹果则是从新疆塞威士苹果的纯系驯化而来的栽培种。;现代苹果果产的大小、色泽、品质及成熟期等性状的多样性,是祖先种     

苹果属山荆子MbNramp1基因克隆、序列与表达分析

以苹果属山荆子为试材,根据Nramp1同源序列保守区设计两对简并引物进行PCR,结合RACE技术获得了3'末端和5'末端片段,将3段片段序列拼接,根据拼接序列获取了MbNramp1基因全长cDNA序列。MbNramp1cDNA长2090bp,包含一个长度为1656bp的开放阅读框,编码551个氨基酸的多肽,分子量约为59.7kD。该基因编码的蛋白是一个膜蛋白,76%以上的氨基酸为非极性。MbNRAMP1与二价铁、锰转运蛋白NRAMP基因家族保守性很高,具有NRAMP1金属转运蛋白家族基因典型特征,即含有推断的N–端相连的糖基化位点、10个预测的跨膜结构域(TMs),在第6和第7跨膜结构域间有一个相同的转运基序(CTM)。低铁胁迫时MbNramp1在根中表达量增加。     

S-RNase genotypes of apple (Malus domestica Borkh.) including new cultivars,lineages, and triploid progenies

Summary

We have determined the S-RNase genotypes of 33 new apple cultivars and lineages produced in Japan, 44 unknown cultivars and two lineages, and 22 triploid progenies. We have speculated on the putative parentage of new cultivars and lineages based on their S-RNase genotypes and also identified mistaken parents. In the case of the triploid progenies, the breeding of new cultivars using a triploid paternal parent may pose problems due to its low pollen viability. Nevertheless, diploid and triploid progenies were obtained using a triploid maternal parent. We have compiled a database of 516 apple S-RNase genotypes, including those previously investigated, which included a survey system for cultivar combinations, showing those that were fully-incompatible, semi-compatible, or fully-compatible, together with information on the PCR-RFLP method used for the identification of S-RNase genotypes and S-RNase allele designation (available at http://www.agr.nagoya-u.ac.jp/~0hort/apple/).     

Effects of NAA and Carbaryl on Fruit Set and Return Bloom for Some Apple (Malus domestica Borkh.) Cultivars

Abstract

This research was conducted in 1997 and 1998 to investigate the effects of naphthalene acetic acid (NAA) (5, 10, and 15 ppm), Carbaryl (1-naphthyl N-methylcarbamate) (750, 1000, and 1250 ppm), and NAA + Carbaryl (5 + 750, 7.5 + 750, and 10 + 750 ppm) applications on the return bloom of some standard apple (Malus domestica Borkh.) cultivars grafted on MM106 rootstock. Of these applications, 750 ppm Carbaryl for ‘Starkspur Golden Delicious’, 1250 ppm Carbaryl for ‘Granny Smith’ and ‘Starkrimson Delicious’, and 5 ppm NAA for ‘Jonagold’ increased the mean number of flower buds significantly, compared with the control treatments. The other treatments of Carbaryl, NAA, and NAA + Carbaryl also increased the mean number of flower buds in a nonsignificant sense with a few exception. A negative correlation between the final fruit set and the mean number of next year's flower buds was found for three cultivars. The correlation coefficients were r = ?0.5150 (P< 0.05), r = ? 0.6999 (P< 0.05), r = ?0.0335 for ‘Starkspur Golden Delicious’, ‘Granny Smith’, and ‘Jonagold’ cultivars, respectively. However, this relationship was positive and nonsignificant for ‘Starkrimson Delicious’ (r = 0.1980).     

观赏桃查尔酮合成酶基因的克隆及其序列分析

 以观赏桃品种‘红雨垂枝’为试材,采用SON-PCR方法从叶片中快速获得了查尔酮合成酶基因全长序列,命名为PphCHS,GenBank登录号为JN391444,其长度为2353 bp,具有一个1140 bp的完整开放阅读框（ORF）,编码379个氨基酸。氨基酸同源性分析表明,PphCHS与已报道的其他植物的CHS推导的氨基酸序列具有高达90%以上的相似性;氨基酸聚类分析表明：观赏桃首先与樱桃李聚类,其次与草莓。生物信息学分析表明：PphCHS蛋白含有查尔酮合酶家族的特征多肽序列RLMMYQQG CFAGGTVLR,不含信号肽序列。     

柑橘CHS基因序列多态性及表达水平对类黄酮生物合成的影响

查尔酮的合成是类黄酮生物合成途径中的一个关键节点。从10个柑橘种质中克隆了查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因,并对其不同时期的果实和叶片中的类黄酮含量进行了测定,分析了CHS基因的序列多态性与类黄酮含量之间的关系;同时通过qRT-PCR检测了CHS基因在不同种质之间以及同一种质的不同组织间的表达差异。结果表明,柑橘CHS基因的核苷酸序列高度保守,相似度达98%以上。聚类分析表明,CHS氨基酸序列的多态性有物种特异性,而且与类黄酮含量有一定的相关性。CHS基因的表达水平在不同种质、部位及生长发育时期有显著差异,这些差异与类黄酮的含量有显著的相关性,说明CHS基因对类黄酮的生物合成有明显影响。     

一个辣椒肌醇半乳糖苷合成酶同源基因的全长cDNA克隆与低温表达分析

采用RT-PCR结合RACE技术,从低温处理的辣椒(Capsicum annuum L.)品种“苏长红”叶片中克隆得到一个肌醇半乳糖苷合成酶同源基因（GS）的cDNA序列(GenBank登录号：EF566470), 其全长1 444 bp, 推断其编码336个氨基酸。序列分析表明该基因与其他高等植物的GS基因具有较高的同源性。利用RT-PCR技术分析辣椒受低温胁迫后该基因的表达情况,发现该基因常温下在辣椒各组织中均无表达,经4 ℃或10 ℃处理6 h后在叶片中开始表达,而茎和根系中无论低温处理与否均不表达。Southern杂交结果表明辣椒基因组中还存在其他GS同源基因。