橡胶树热研88-13品种珠心易碎愈伤组织诱导及其胚状体发生

以橡胶树热研88-13品种的幼嫩种子的珠心组织为材料,诱导出胚性愈伤组织。对胚性愈伤组织诱导培养基、继代培养基中不同的影响因素如植物生长调节剂的种类和浓度、钙离子浓度等进行了研究,筛选到了合适的影响因素。经过连续5个月的继代选择培养,逐渐诱导出易碎的胚性愈伤组织。对易碎胚性愈伤组织进行了长期继代培养。组织学切片证明长期继代培养的愈伤组织维持了胚性的状态。取继代培养了2年多的橡胶树热研88-13品种的珠心易碎胚性愈伤组织诱导胚状体,得到了186个胚状体,正在诱导植株再生。     

粳稻品系“超2-10”幼胚在不同温度下的诱导和再生研究

以梗型高产水稻品系"超2-10"幼胚为外植体,在26、36、38℃和40℃下进行愈伤组织诱导和继代培养,并完成整个再生过程.结果显示,"超2-10"水稻幼胚在26、36、38℃和40℃环境中均能成功诱导愈伤组织,诱导率达到90%以上,4种温度条件下幼胚愈伤组织诱导率无显著差异;26℃和36℃环境诱导和继代培养的愈伤组织都能够正常生长、分化和再生,而38℃和40℃环境诱导和继代培养的愈伤组织能够生长,但分化和再生都受到影响;尽管36℃环境生长的愈伤组织在继代培养中重量增幅明显低于26℃继代培养的愈伤组织,但36℃诱导和继代培养的愈伤组织再生率明显高于26℃环境培养的愈伤组织.再生率提高40.81%.     

继代次数对吉粳88愈伤组织生理生化指标及细胞形态的影响

[目的]研究继代次数对吉粳88愈伤组织生理生化指标及细胞形态的影响。[方法]以继代次数为单因素变量,测定吉粳88愈伤组织中可溶性蛋白含量、过氧化物酶活性、可溶性糖含量以及丙二醛含量,并通过临时装片观察细胞形态。[结果]随着继代次数的增加,愈伤组织的分化率和再生率呈下降趋势;可溶性蛋白含量基本保持在2.92 mg/g FW左右,无明显变化。MDA含量呈先增加后减少的趋势。POD活性和可溶性糖含量与愈伤分化率极显著相关。细胞形态观察发现,随着继代次数增加愈伤组织逐渐由胚性愈伤转化为非胚性愈伤。[结论]在悬浮培养体系建立时,以D4、D5、D63代为宜,为吉粳88再生体系的建立和优化指明了方向。     

继代培养对水稻胚性愈伤组织染色体变异及体细胞无性系变异的影响

以79106、金早6号、中花9号和南粳35等4个水稻品种的成熟胚胚性愈伤组织为材料,研究继代培养对胚性细胞染色体的数量和结构变异及体细胞无性系农艺性状变异的影响,结果表明,经60d继代培养后,胚性细胞染色体变异频率明显高于未继代培养的愈伤组织,并出现多种变异类型,愈伤组织继代培养后的再生植株农艺性状变异范围明显增大,但以继代培养天数不超过60 d的愈伤组织再生植株较之其它处理不仅有较丰富的变异类型,而且有足够大的群体供选择。     

籼稻YTB成熟胚愈伤组织继代培养条件试验

为确定籼稻YTB成熟胚愈伤组织继代培养的最佳条件,对籼稻愈伤组织进行不同继代培养条件优化组合试验,研究不同因素对籼稻愈伤组织继代培养的影响。结果表明:NB培养基是较适合籼稻愈伤组织继代生长的培养基;籼稻YTB成熟胚愈伤组织不适合二次继代;铁盐浓度对籼稻愈伤组织的继代培养有明显影响;水解酪蛋白、脯氨酸、谷氨酰胺及硫代硫酸钠等能改善籼稻愈伤组织的质量,降低褐化率;抗坏血酸(VC)对籼稻胚愈伤组织的继代生长及抗褐化无明显影响;形态学观察和细胞学观察的一致性证明了外源腐胺PUT(30 mg/L)在籼稻愈伤组织继代培养中可以使愈伤组织保持良好的胚性,从而提高后续遗传转化的转化率。     

水稻胚性愈伤组织继代培养中的生理生化特性

为探明水稻胚性愈伤组织继代培养中的生理生化特性,以水稻湘早籼１３号和超丰早１号的幼穗和胚轴诱导的胚性愈伤组织为材料,研究了继代培养中所建立的胚性愈伤组织无性系过氧化物酶、酸性磷酸酯酶的活性变化及同工酶谱变化。结果表明,不同基因型与不同外植体来源的胚性愈伤组织无性系,继代培养过程中两种酶活性均呈下降趋势,与胚性愈伤组织无性系培养力降低的结果一致,其同工酶谱也发生了一定的变化。     

新疆雪莲芽分化过程蛋白质·可溶性糖含量及淀粉酶活性变化

[目的]研究新疆雪莲分化过程中的生理生化变化。[方法]将以雪莲无菌苗的叶片为外植体诱导的雪莲胚性愈伤组织置于MS+2 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA(pH值为5.85~5.90)培养基上进行培养,对培养过程中雪莲细胞可溶性蛋白含量、可溶性糖、淀粉酶等参数进行测定分析。[结果]在新疆雪莲整个培养阶段,胚性愈伤组织中的蛋白质含量高于非胚性愈伤组织,可溶性糖保持稳定,仅在芽分化阶段有一定的上升,α-淀粉酶活性保持稳定。胚性愈伤组织中的β-淀粉酶的活性均高于非胚性愈伤组织,这说明β-淀粉酶与细胞的分化过程密切相关。β-淀粉酶在整个培养过程中呈现双峰曲线。第1个峰出现在培养的开始阶段,第2个峰出现在芽分化时期。[结论]该研究对研究新疆雪莲的高频再生具有重要的指导意义。     

从长期继代培养的胡萝卜愈伤组织原生质体获得再生小植株

从继代3年以上的胡萝卜(Daucus carota var.sativa Dc.)非胚性愈伤组织酶解分离出大量成活的原生质体,在 DPD、V—KM 和 C81V 培养基中液体浅层培养,获得微愈伤组织后,在固体 N_6和 MS 培养基上分化培养,获得再生小植株。证明长期继代培养的胡萝卜愈伤组织仍具有再生植株的能力。     

白皮松胚性和非胚性愈伤组织生理生化特性研究

【目的】探讨白皮松体细胞胚胎发生过程中各项生理生化指标与体细胞胚胎发生、发育的关系。【方法】以白皮松体细胞胚发生诱导阶段不同发育时期的胚性愈伤组织(EC)和非胚性愈伤组织(N-EC)为材料,对其不同培养时间(5,15,25和35 d)的可溶性蛋白质、可溶性糖和淀粉含量及抗氧化物酶(POD,SOD,CAT)活性进行研究。【结果】EC中可溶性蛋白质和可溶性糖含量均在培养25 d时达到峰值,N-EC中可溶性蛋白和可溶性糖含量在培养15 d时达到峰值;EC中淀粉含量呈现先上升后下降再上升的变化趋势,N-EC淀粉含量一直呈下降趋势。EC中抗氧化物酶活性明显高于N-EC,SOD活性在培养15 d时达到峰值,表明SOD在体细胞胚诱导初期起主导作用;EC的CAT和POD活性均在培养25 d时达到峰值,说明CAT和POD在体细胞胚发生过程中对胚性细胞的进一步分化和发育起主导作用。【结论】白皮松体细胞胚胎发生诱导阶段,EC的生理生化代谢活性高于N-EC。     

长期继代下玉米愈伤组织差异蛋白的双向电泳分析

实验以玉米自交系齐319幼胚进行愈伤组织的诱导及继代培养,提取继代5次和10次的胚性愈伤组织中可溶性蛋白质进行双向电泳。运用2-D凝胶图像分析软件PDQuest进行分析,探究玉米胚性愈伤组织长期继代培养的分子调控机理。结果表明,长期继代10次相比5次共有20个有明显差异的蛋白点,其中14个表达下调,6个表达上调。通过质谱分析及搜索数据库鉴定出14-3-3-like protein GF14-12和ferritin-1,chloroplastic 2个蛋白,可能是愈伤组织长期继代后细胞生长代谢途径受到影响的结果 。     

栓皮栎胚性和非胚性愈伤组织生化特性研究

植物体细胞胚胎发生是一个复杂的过程,为进一步揭示胚性愈伤组织诱导的潜在能力,以栓皮栎未成熟合子胚诱导产生的胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织为材料,通过对可溶性糖、淀粉、可溶性蛋白、游离脯氨酸、总酚含量和蛋白酶活性的测定,研究体细胞胚胎发生过程中2种愈伤组织生化特性的差异。结果表明,胚性愈伤组织中可溶性糖、淀粉、可溶性蛋白质及脯氨酸含量分别为97.6、25.3、28.3 mg·g^-1和202.8 mg·g^-1,均高于非胚性愈伤组织;两者的蛋白酶活性无显著性差异;但非胚性愈伤组织中多酚类化合物的含量显著高于胚性愈伤组织。     

苏丹草农杆菌介导法基因转化条件

以苏丹草幼穗诱导产生的胚性愈伤组织为材料,比较了抗生素羧苄青霉素、头孢霉素及筛选剂卡那霉素对愈伤组织生长、绿芽分化和绿苗生长的影响.结果表明:500 mg/L的羧苄青霉素对愈伤组织生长的影响与对照差异不明显,可提高愈伤组织绿苗分化率;500 mg/L的头孢霉素明显抑制愈伤组织的生长,对分化影响不大;愈伤组织生长期筛选剂卡那霉素浓度为75 mg/L时,愈伤组织的褐化率达到100%;愈伤组织分化期,卡那霉素浓度为10 mg/L时,绿芽能分化成幼苗,所有幼苗的心叶白化、生长速度与对照无差异.培养基中添加500 mg/L的羧苄青霉素、经农杆菌侵染和15 mg/L卡那霉素筛选获得再生植株,经PCR检测,初步证明NPTⅡ选择标记基因已整合到部分转化植株的基因组中.     

不同苗龄楸树叶片营养成分的季节性变化

以楸树优良无性系杂楸1号和杂楸3号的1年生、 2年生和3年生苗龄的幼苗作为供试对象,测定不同季节叶片含水率、维生素C、可溶性糖、可溶性蛋白、粗脂肪、粗纤维、粗灰分、氨基酸以及次生代谢物黄酮、蒽醌类化合物的含量,对不同苗龄楸树在不同季节叶片营养成分进行综合评价.结果表明:8月的2年生和3年生杂楸1号、 8月的3年生杂楸3号和10月的2年生杂楸3号具有高产量、高含糖量、富含维生素C等优点,综合评价最高,可进行饲用营养研究.建议采摘2年生和3年生苗龄的楸树叶片,采摘时间为8月前后.     

柑橘愈伤组织内源激素代谢与体细胞胚胎发育能力关系的研究Ⅰ．柑橘不同愈伤组织体细胞胚胎发生能力的比较

为了探明柑橘愈伤组织内源激素代谢与体细胞胚胎发生能力的关系，研究了长期继代保存的纽荷尔脐橙和伏令夏橙不同愈伤组织的体细胞胚胎发生。结果表明，无论是在加吸3％蔗糖的MT增殖培养基上，还是在加有30mL/L甘油的MT分化培养基上，纽荷尔脐橙的胚性愈伤组织和二倍体伏令夏橙愈伤组织的体细胞胚胎发生能力均较强，而纽荷尔脐橙的非胚性愈伤组织，四倍体和六倍体伏令夏橙愈伤组织的体细胞胚胎发生能力较弱。     

Somatic embryogenesis and plant regeneration in glandless upland cotton (<Emphasis Type="Italic">Gossypium hirsutum</Emphasis> L.)

Glandless upland cotton has an important economic value. Embryogenic calli and regenerated plants were obtained from the hypocotyl explants of glandless upland cotton seedlings, cultivar Jisheng1. The results indicated that somatic embryogenesis was significantly influenced by the types of auxin and cytokinin. 2, 4-D was advantageous to induce cotton callus, but embryogenic callus could not be obtained on the 2, 4-D medium. Embryogenic calli were also not obtained on the MSB sold medium with the combination of IBA and BA. However, embryogenic calli were induced when the hypocotyl explants were cultured on the IBA and KT medium. More than 31% of the hypocotyl segments produced embryogenic calli when the MSB medium was supplemented with 1.0 mg·L⁻¹ IBA and 0.5 mg·L⁻¹ KT. Embryogenic calli with somatic embryos could be observed within three months. Somatic embryo germination and maturation occurred on the hormone-free MSB medium with 1.0 g·L⁻¹ Gln and 0.5 g·L⁻¹ Asn. A number of regenerated plants could be obtained in six months. In the present study, a simple and efficient system was established to induce a number of embryogenic calli and regenerate plantlets from hypocotyl explants.     

高羊茅成熟种子组织培养的影响因素研究:Ⅱ.不同因素对胚性愈伤组织继代发生的影响

以从4个草坪型高羊茅品种成熟种子直接诱导获得的初始愈伤组织为起始材料，研究3种因素对胚性愈伤组织继代发生的影响。结果表明，继代培养基中添加BAP和硫酸铜以及提高蔗糖浓度均能促进胚性愈伤组织形成，提高胚性愈伤组织频率，其适宜浓度分别为：BAP0．1～0．2mg/L，硫酸铜2．5mg/L，蔗糖60g／L。这3种因素中，又以添加BAP的效果最好，添加硫酸铜次之。4个供试品种间胚性愈伤组织发生能力存在明显差异。     

玉米耐盐愈伤组织变异体的筛选及耐盐性分析

为了筛选玉米耐盐愈伤组织变异体,选用4个适于玉米组织培养基因型的幼胚为外植体,诱导出胚性愈伤组织。继代5次后,分别用200 mmol/L NaCl和5.5 mmol/L Hyp连续筛选3次,获得耐盐愈伤组织变异体,分别称为rn变异体和rh变异体,以普通继代培养基上培养的愈伤组织为对照。经一代回复培养,分别在200,250和300 mmol/L NaCl胁迫下,分别测定了rn变异体r、h变异体和对照愈伤组织存活率,胚性愈伤组织百分率,K+、Na+含量;在300 mmol/L NaCl胁迫下,测定了rn变异体、rh变异体和对照愈伤组织的生长量及脯氨酸含量。结果表明,rh变异体愈伤组织的分化频率高于rn变异体,Hyp的选择频率是NaCl的2倍左右;在不同浓度NaCl胁迫下,rh变异体具有较高的愈伤组织存活率和K+、Na+含量;在300 mmol/L NaCl胁迫下,rh变异体的生长量和脯氨酸含量均最高,表现出了较好的耐盐性。     

提高N6培养基钙浓度对玉米幼胚培养的影响

筛选试验结果表明 ,将 N6 培养基 Ca2 + 浓度从 1.13mmol/ L提高到 5 m mol/ L ,对玉米幼胚胚性愈伤组织的诱导、继代和分化具有促进作用。在一次继代过程中 ,Ca2 +浓度为 5 m mol/ L 的培养基上培养的胚性愈伤组织相对生长量比 1.13m mol/ L 的原培养基增加 0 .8倍。 Ca2 +浓度提高以后 ,在培养基中再添加钙调蛋白 (Ca M)抑制剂盐酸氯丙嗪 (CPZ) ,可抑制 Ca2 +的促进作用 ,说明钙增加后对玉米胚性愈伤组织诱导和继代的促进作用受Ca2 + / Ca M信息系统控制。用改进后的 N6 培养基 ,可提高生产上大面积推广的玉米自交系胚性愈伤组织的诱导率和继代生长量