新疆野生黄花苜蓿愈伤诱导及分化的研究

以新疆野生黄花苜蓿(Medicago falcata L.)为材料,通过愈伤组织诱导及分化途径获得再生植株;从种子硬实、外植体、激素(2,4-D和KT)、培养基方面探讨野生黄花苜蓿组织培养的影响因素.结果表明:4℃低温处理与浓硫酸浸种结合是破除黄花苜蓿硬实的较优方法,发芽率达90％;下胚轴为诱导愈伤组织的最佳外植体;MS培养基比改良的SH培养基对愈伤组织的诱导更有效,MS诱导培养基为MS+2,4-D 0.5 mg·L-1+KT 0.8 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂粉7g·L-1,出愈率达到80％;浅绿色和浅黄色的愈伤组织在MS+2,4-D 0.2 mg·L-1+KT 0.4mg·L     

黄花苜蓿愈伤组织诱导与植株再生

以黄花苜蓿下胚轴、子叶为材料,在MS+2,4—D0.5～2mg/L以及MS+2,4—Dlmg/L+6BA0.2～1.0mg/L的培养基上可诱导形成愈伤组织;将它们分别传入MS+2,4—D1mg/L或MS+2,4—D0.2mg/L+6BA0.5mg/L的培养基中3～6个月,可分化出芽或类胚体;转入无激素的1/2MS培养基后,可生根并发育为完整再生植株。     

抗生素对农杆菌的抑菌效果及对黄花苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响

研究了不同浓度抗生素对农杆菌抑菌效果及对野生黄花苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明:氨苄青霉素(Amp)的抑菌效果优于头孢霉素(Cef);各个浓度下的Amp和Cef对愈伤组织的诱导与对照相比基本无显著差异;Amp浓度为100～300mg/L,Cef浓度为200～500mg/L时对不定芽的形成具有较好的促进作用。因此,在进行农杆菌介导黄花苜蓿遗传转化研究时,可选择Amp作为抑菌剂,最佳浓度为300mg/L;Kan和Hyg作为抗性愈伤选择剂,适宜的浓度分别为40～50mg/L和15～20mg/L。     

影响草地早熟禾愈伤组织诱导和分化的相关因子研究

以草地早熟禾品种午夜2号,新格莱德和橄榄球2号种子为外植体,采用不同温度及浸种时间处理后进行愈伤组织的诱导和分化培养。结果表明：4℃浸种16～24h可以促进愈伤组织形成,不同品种间差异不明显;午夜2号和橄榄球2号继代1次的愈伤组织分化能力最强,新格莱德继代2次的胚性愈伤组织分化率最高。     

日本矮生沿阶草愈伤组织的诱导及其分化

选用不同外植体和不同培养基,对日本矮生沿阶草Ophiopogon japonicus进行了愈伤组织的诱导及分化的研究.结果表明:幼嫩叶片的基部是最适宜诱导愈伤组织的外植体.G3(MS+KT 0.2 mg/L +2,4-D 0.1 mg/L)培养基的愈伤组织的诱导率达到89%以上,将诱导的愈伤组织置于J1(MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L)培养基中的愈伤组织的分化率最高,达到59%.因此,选用幼嫩的叶片基部置于G3培养基进行诱导,继代一次后置于J1培养基进行分化是最有利于再生的途径.     

扁蓿豆愈伤组织诱导和分化条件的研究

以扁蓿豆3个品系的下胚轴和子叶为外植体,研究不同培养基、不同激素种类和配比对愈伤组织诱导的影响,以及不同分化培养基对愈伤组织分化的影响。结果表明：下胚轴的愈伤组织诱导率普遍高于子叶;品系B1、B2最佳愈伤组织诱导培养基为MS--0．5mg／L2,4--D＋O．5mg／L6--BA,品系B3最佳愈伤组织诱导培养基为MS＋0．5mg／L2,4--D＋0．7mg／L 6-BA;适宜分化的培养基均为MS＋1mg／L KT＋1mg／L6-BA。     

扁蓿豆愈伤组织诱导和分化条件的研究

以扁蓿豆3个品系的下胚轴和子叶为外植体,研究不同培养基、不同激素种类和配比对愈伤组织诱导的影响,以及不同分化培养基对愈伤组织分化的影响.结果表明:下胚轴的愈伤组织诱导率普遍高于子叶;品系B1、B2最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA,品系B3最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.7mg/L 6-BA;适宜分化的培养基均为MS+1mg/L KT+1mg/L 6-BA.     

匍匐翦股颖愈伤组织诱导及其分化的研究

以匍匐翦股颖Penn A-1和L-93的成熟种子为外植体,进行了愈伤组织诱导与分化的研究。结果表明:不同浓度2,4-D对Penn A-1和L-93愈伤组织进行诱导,L-93的诱导率都高于Penn A-1。当以2,4-D和6-BA不同浓度配比对愈伤组织进行诱导时,以MS+2 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA为Penn A-1和L-93最适的愈伤诱导培养基,诱导率较高;MSO培养基为适宜的分化培养基,分化率达90.9%;MSO+0.2 mg/L IBA为最佳生根培养基。     

多年生黑麦草愈伤组织诱导与芽分化的研究

对多年生黑麦草Lolium perenne的2个品种特拉华(Delaware)与尤文图斯(Juventus)进行了愈伤组织诱导以及芽分化的研究.结果表明,在种子和成熟胚2种外植体中,成熟胚的出愈率高,是较好的愈伤诱导材料.愈伤诱导培养基采用MS基本培养基,附加激素4 mg/L 2,4-D 0.025 mg/L 6-BA.特拉华和尤文图斯较适宜的芽分化培养基是MS基本培养基分别附加0.4 mg/L ZT 0.3 mg/L NAA和0.2 mg/L ZT 0.5 mg/L NAA.特拉华在愈伤诱导和芽分化两方面均优于尤文图斯.     

紫花苜蓿花药愈伤组织和幼苗诱导技术的研究

在不同时期、不同花药低温预处理时间及热激处理、不同培养基、不同激素浓度组合、不同培养条件下对苜蓿花药进行了培养,结果表明：9月份较7月、8月份选取的花药愈伤组织诱导率高;花药低温预处理24～48h较72h处理对愈伤组织诱导的效果好,低温预处理与热激处理相结合比单用低温预处理其花药愈伤组织诱导率高;NB培养基对愈伤组织的诱导效果比B5培养基好,2,4-D浓度0.5～2.0mg/L、NAA浓度0.1～1.0mg/L、6-BA浓度0.5～1.0mg/L、KT浓度1.0～3.0mg/L都能诱导出愈伤组织,其最佳的浓度组合为NB＋2,4-D 0.5mg/L＋NAA 0.2mg/L＋ 6-BA 0.5 mg/L＋KT 3mg/L;暗培养结合光照培养较直接光照培养愈伤组织诱导率低,但绿苗率较高.     

野生黄花苜蓿组织培养及再生体系研究

以呼伦贝尔草原野生黄花苜蓿(Medicago falcataL.)无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,对其组织培养及再生体系进行系统的研究,以期为其下一步转基因试验提供良好的受体.结果表明:最佳愈伤诱导培养基为MS+1.5mg·L-1 2,4-D-0.4 mg·L-1 6-BA+3％蔗糖+0.7％琼脂,下胚轴和子叶的最佳愈伤诱导率均可达到100％.最佳胚性愈伤形成培养基为MS-0.5 mg·L-1 KT+0.1 mg· L-1 NAA+2％蔗糖+0.7％琼脂,胚性愈伤形成率为81.5％;最佳分化芽形成培养基为MS+0.25 mg· L-1 KT+0.05 mg·L-1 NAA+2％蔗糖+0.7％琼脂     

苜蓿雄性不育系花药愈伤形成及分化培养条件的研究

以苜蓿雄性不育株系及其可育株系的花药为外植体,研究取材时间和不同激素配比对其愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,雄性不育株系花药培养时,以现蕾初期取材、MS为基本培养基的条件下出愈率较理想。愈伤组织诱导的适宜培养基为:MS+0.5mg/L 2,4-D+0.25mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+3mg/L KT+3%蔗糖+0.7%琼脂(出愈率66.7%);不育与可育植株花药愈伤适宜的分化培养基分别为:MS+1mg/L KT+0.2mg/L NAA+2%蔗糖+0.7%琼脂(分化率75%)和MS+4mg/L KT+0.2mg/L NAA+2%蔗糖+0.7%琼脂(分化率79%)。     

2,4-D和6-BA组合配比对金达苜蓿愈伤组织诱导与分化的影响

为了建立一个高效的金达苜蓿(Medicago sativa L. cv. Jinda)组织培养再生体系,我们以金达苜蓿无菌苗的胚轴上段、下段、子叶为外植体,进行了2,4-D和6-BA不同组合配比对愈伤组织诱导和胚性愈伤组织及胚状体分化的影响,这对其以后建立遗传转化体系具有重要的意义。结果表明:胚轴上、下段和子叶是很好的诱导愈伤组织的外植体;在MSO胚状体诱导培养基上,分化出胚性愈伤组织的最佳2,4-D、6-BA剂量配比为8:0.2,成苗培养基为MSO+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂。     

黄花苜蓿高频植株再生体系建立的研究

黄花苜蓿（Medicago falcataL.）具有较强的抗逆性,是苜蓿育种重要的种质资源。进行黄花苜蓿功能基因研究,有必要建立其高效的植株再生体系。以新疆野生黄花苜蓿的子叶和下胚轴为外植体,以N6大量,MS微量及铁盐,水解酪蛋白2.0g·L^-1,维生素VB₁9.9mg·L^-1,VB₆9.5mg·L^-1,尼克酸4.5mg·L^-1,琼脂8.0g·L^-1和蔗糖30g·L^-1等成分为基本培养基,通过比较不同激素配比对黄花苜蓿愈伤诱导率和体细胞胚发生率的影响,优化并建立了黄花苜蓿的高频再生体系。优化的培养基激素配比为：愈伤诱导和保持培养基添加2,4-D 3.0mg·L^-1+KT 0.05mg·L^-1;分化培养基添加KT 0.4mg·L^-1,蔗糖浓度调整为20g·L^-1;生根培养基为1/2MS+蔗糖15g·L^-1+琼脂8.0g·L^-1。在优化培养流程下,新疆野生黄花苜蓿子叶愈伤诱导率可达92%,下胚轴可达95%,体细胞胚发生率可达54%,体细胞胚萌发成苗率为76%。再生周期约为70～80d。     

野生黄花苜蓿栽培驯化研究

对内蒙古呼伦贝尔草原的野生黄花苜蓿进行了多年的栽培驯化研究,结果表明:黄花苜蓿栽培品系与野生群体相比返青早,生长速度快;株型直立或半直立,植株高度、分枝数量、叶量等性状均优于野生群体;平均鲜、干草产量分别比野生原始群体提高2.5倍和1.3倍,比敖汉苜蓿增产15%和4%,在内蒙古东部高寒地区表现出较强的适应性,综合性状明显优于野生群体和对照品种。     

黄花苜蓿光合蒸腾日变化特征及其与环境因子的关系

在盆栽条件下,对一年龄黄花苜蓿(Medicago falcata L.)叶片光合蒸腾特征和光合有效辐射(PAR)、空气CO2浓度(Ca)、空气相对湿度(RH)、空气温度(Ta)等环境因子的日变化进行测定,并采用相关系数、偏相关系数和逐步回归方法分析了黄花苜蓿光合蒸腾特性日变化与环境因子的关系。结果表明,光合速率(Pn)和蒸腾速率(Tr)日变化均呈单峰曲线,12:00左右达到峰值,并且没有光合午休现象。Pn和Tr与PAR之间呈极显著正相关,与其它环境因子相关不显著,这说明对光合蒸腾特征起决定作用的环境因子是PAR。     

苜蓿愈伤组织原生质体游离与培养

对阿尔冈金苜蓿(Medicago sativa L. cv. Algonguin)原生质体游离和培养的最佳条件进行研究,建立其细胞融合原生质体杂交体系。以下胚轴诱导的愈伤组织为材料,研究了愈伤组织继代培养时间、酶液组合、酶解时间及酶液渗透压对原生质体游离的影响,并探讨了愈伤组织原生质体在KM8P培养基上的分裂情况。结果表明:继代12d的愈伤组织游离性最好,最佳酶液组合为2%纤维素酶+0.5%果胶+1%半纤维素酶、最佳酶解时间为12h、最佳酶液渗透压为0.55mol/L;最适宜培养苜蓿愈伤组织原生质体的培养基为KM8P+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LNAA。     

黄花苜蓿小孢子发育时期与花器形态的相关性研究

以新疆野生黄花苜蓿（Medicago falcata）为材料,观察其小孢子发育各时期的细胞学特征及花蕾和花药形态特征,并研究黄花苜蓿小孢子发育时期与花器形态的相关性,以期为单倍体培养（DH系）的育种方法提供依据。结果表明：黄花苜蓿小孢子发育分为4个时期,分别为四分体时期、单核早中期、单核靠边期、双核期,且各时期有明显的细胞学特征;试验材料的花蕾纵径和花瓣长在小孢子发育4个时期之间均表现极显著差异,其它花器形态指标只是部分时期之间差异显著,因此花蕾纵径和花瓣长适宜作为小孢子发育时期的判断依据;小孢子发育不同时期花药大小差异不显著,花药颜色变化明显,由淡黄色逐渐变为深黄色;小孢子处于单核靠边期时,花蕾纵径和花瓣长度分别在3.61～4.32 mm和2.68～3.61 mm之间,此时可见花瓣微露出萼片。