棉花组织培养高效植株再生体系的建立

通过对影响棉花体细胞胚胎发生和植株再生关键因素的研究,建立了适用于广泛基因型的棉花组织培养高效胚胎发生与植株再生体系。从中棉所12、中棉所19、泗棉3号等20余个主栽品种诱导获得了胚胎发生和植株再生,有效地突破了棉花组织培养植株再生的基因型控制,使占我国棉田面积50%以上的品种均能诱导获得胚胎发生和再生植株。首次诱导获得直接胚胎发生,使棉花组织培养的周期由180d缩短到120d左右,减少了培养过程中变异的发生。该结果的获得必将大大促进植物细胞工程和基因工程在棉花遗传改良上的应用。     

木本油料作物美藤果组织培养植株再生体系的建立

美藤果(Plukenetia volubilis)是大戟科(Euphorbiaceae)多年生木质藤本植物,其种子油富含多不饱和脂肪酸高达85%,特别是α-亚麻酸含量高达50%,具有很高的营养价值。为了建立高效的美藤果植株再生体系,本研究采用正交实验方法,对影响美藤果芽再生效率的细胞分裂素6-苄基腺嘌呤(6-benzyladenine,6-BA)、生长素吲哚丁酸(indole butyric acid,IBA)的浓度和不同发育阶段的美藤果子叶外植体这3个因素进行分析。结果表明,6-BA浓度、IBA浓度和子叶外植体发育阶段对美藤果再生芽诱导均有显著影响,作用效果依次为:不同外植体发育阶段6-BA浓度IBA浓度。在5.0 mg/L 6-BA和0.2 mg/L IBA的条件下,用Ⅵ阶段(授粉后130 d的果实)的美藤果子叶作为外植体,有较好的再生芽诱导效果,最高芽诱导效率为91.67%,每个外植体的再生芽数目为5.5个。此外,IBA和NAA都可以促进美藤果再生植株根的形成,且IBA作用效果高于NAA。IBA和NAA的浓度分别为0.6 mg/L和0.4 mg/L的组合时,再生根的诱导效果最好,再生根诱导效率为41.67%,每个芽的根数目为7.1个。美藤果植株再生体系的建立为优良苗木的大量无性繁殖,以及进一步的基因功能研究和利用基因工程技术进行品种改良奠定了基础。     

地被菊花‘珍粉’组织培养与植株再生体系的建立

研究不同因子对地被菊‘珍粉’品种再生体系建立的影响,为地被菊的推广种植打下技术基础。以地被菊‘珍粉’二年生茎段为试材,研究不同消毒时间梯度下2%NaClO和0.1%Hg Cl2对茎段消毒效果、6-BA:NAA和6-BA:KT激素组合对不定芽诱导、不同浓度IBA和NAA对不定根发生,半开瓶和全开瓶两种炼苗方式对移栽成活率的影响。结果显示,2%NaClO消毒效果优于0.1%Hg Cl2,且在6 min时萌发率最高,达到90.00%;外植体腋芽诱导率在6-BA 0.1 mg/L+KT 0.1 mg/L组合最高,达到97.67%,出芽指数为6.33,优于6-BA:NAA组合;不同浓度IBA诱导不定根发生率均达100%,高于NAA,但在根系质量和后期成活率上,IBA浓度为0.5 mg/L时最优;试管苗在半开盖炼苗5 d后的移栽成活率达到了100%,且植株长势健壮。     

叶用莴苣组织培养再生体系的建立

为了满足市场需求,通过组织培养技术可以使叶用莴苣不受季节气候所牵制。随时可以工厂化大量生产,以达到百姓日食之需。本研究以PS11叶用莴苣为试材,从种子开始培育无菌苗,MS培养基为基础培养基,附加不同浓度的6-BA和NAA激素配比,再经愈伤组织诱导、芽分化、生根3个步骤的离体培养,建立叶用莴苣快速高效的再生体系。研究表明：该品种最佳诱导愈伤组织分化的培养基为MS+0.2mg/L6-BA+0.4mg/LNAA,出愈率达到100%,出芽率达到71.6%。     

棉花组织培养与植株再生

棉花是世界上重要的纤维和油料作物。现代生物技术的不断发展为棉花育种和种质创新提供了新的技术手段,极大地推动了棉花育种的进程。现代生物技术在植物育种中的成功应用大多是依靠有效的再生体系的建立。因此棉花组织培养及其再生技术在品种改良、种质资源的繁殖和保存、杂种优势的固定和遗传转化等方面具有重要作用,颇受各国研究者的重视。本文综述了棉花的体细胞培养、花药培养、茎尖培养、胚珠和胚培养以及原生质体培养等方面近年来的主要研究进展,并提出了棉花组织培养中存在的主要问题及今后的研究方向。     

大蒜花梗组织培养再生植株

取生殖期大蒜花梗,在N_6+2,4-D 2mg/L+KT 1mg/L培养基上暗培养30天后,得到微黄色愈伤组织。将愈伤组织转到N_6+2,4-D 0.5mg/L+KT 0.5mg/L培养基上继代二次,然后于N_6+BA 5mg/L+KT 1mg/L+IAA 0.01mg/L,MS(1/2大量元素)+BA 5mg/L+KT 1mg/L+IAA 0.01mg/L和MS+BA 5mg/L+KT 1mg+IAA 0.01mg/L培养基上光照培养。3周后愈伤组织上出现绿色丛生芽,将小芽转到MS(1/2大量元素)+NAA 0.01mg/L培养基上,一周后发生白色根并形成完整植株。2,4-D和KT对大蒜花梗愈伤组织发生是必要的,高浓度的细胞分裂素和低浓度的生长素有利于芽分化,高浓度NH_4~+有利于根分化,低浓度NH_4~+有利于芽分化。愈伤组织低温处理对芽的分化是必要的。另外,对花梗愈伤组织发生进行了细胞学观察。     

紫花地丁的组织培养和植株再生

以未成熟种子萌发的子叶和下胚轴为外植体建立了紫花地丁的组织培养及植株再生体系，结果表明最适愈伤组织诱导培养基为MS＋2，4-D 0．5mg／L＋6．BA0．5mg／L或者MS＋2．4-D1mg／L＋6-BA 0．2mg／L，愈伤组织诱导率可达100％，将生长良好的愈伤组织转入分化培养基可诱导芽或根的分化，其中诱导芽的最适培养基为MS＋6-BA1mg／L＋2。4-D0．5mg／L，诱导根的最适培养基为MS＋2，4-D1mg／L＋6-BA 0．2mg／L，两种器官分化途径均能有效再生成苗。     

木纳格葡萄组织培养和再生体系的建立

稳定、高效的再生体系是进行木纳格葡萄遗传转化的必要条件。本研究对影响不定芽诱导的外植体类型、基本培养基种类、激素组合和暗培养时间进行了测定。结果表明,叶片和叶柄是适合木纳格葡萄组培的外植体,NN69基本培养基适用于不定芽的诱导。叶片和叶柄不定芽诱导的最佳激素组合分别为TDZ(4 mg/L)+IBA (0.2 mg/L)和TDZ (1 mg/L)+IBA (0.2 mg/L),诱导率分别为4.81%和16.30%。在培养初期,3周暗培养明显促进不定芽的生长,且将不定芽转接到1/2MS+IBA (0.1 mg/L)的生根培养基上能够产生不定根,生根率为100%。本研究建立的木纳格葡萄再生体系,可为其后续遗传转化等研究提供技术参考。     

高羊茅高效组织培养再生体系的建立

植物分子育种与基因功能鉴定是建立在高效的组织培养再生体系基础上的。本研究以高羊茅(Festuca arundinacea Schreb)为材料,探讨了不同外植体状态、基本培养基类型、外源激素组合与固化剂种类与浓度对愈伤组织诱导的影响,并进行了愈伤组织分化长芽与生根研究。结果表明:愈伤组织诱导过程中,离体成熟胚比完整种子作外植体愈伤组织出现早、质量优、诱导率高;基本培养基的选择上以N6诱导率最高,MS最低;激素组合研究中高羊茅三个品种(SAFari, FirewarⅡ, Barleduc)在无6-BA培养基中,生长激素选择上都是2,4-D优于IAA,2~2.5 mg/L 2,4-D在三个品种中诱导率都在50%以上,而在添加0.5 mg/L 6-BA时诱导率都偏低;固化剂选择上则以Phytagel与Agarose二都最优,Phytagel固化剂最佳诱导浓度为2~4 g/L。分化长芽最佳培养基为MS+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+20 mg/L AgNO3+2%蔗糖+0.6%琼脂,生根壮苗最佳培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA+3%蔗糖+0.3%Phytagel。本研究为高羊茅的高效转基因体系建立与CRISPR基因功能研究提供准备。     

金钱蒲组织培养再生体系建立的研究

以金钱蒲分蘖茎基部为外植体,采用组织培养技术,对其进行诱导、增殖、生根和炼苗,以期探索一种快速有效的金钱蒲组培繁育方法,为其他菖蒲属植物组培再生体系的建立提供参考。结果表明:初代诱导最佳培养基为MS+2,4-D 0.5 mg·L~(-1)+6-BA 1.5 mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1),平均萌芽数为3.88个;继代增殖最佳培养基为MS+6-BA 2 mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1),增殖系数为2.67;生根最佳培养基为1/2 MS+NAA 0.99 mg·L~(-1)+2,4-D 1 mg·L~(-1)+IBA 0.29mg·L~(-1)+活性炭2 g·L~(-1),生根率为93.33%;移栽于栽培基质(珍珠岩∶蛭石=1∶1)中,成活率可达90%以上。     

顶坛花椒组织培养再生体系的建立

为建立顶坛花椒组培再生体系,以贵州地方品种顶坛花椒的未成熟果实为外植体,研究不同浓度细胞分裂素(6-BA)和生长素(2,4-D)组合对珠心组织诱导的影响,并对其再生培养过程进行了研究。结果表明,MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.4 mg/L为珠心组织初期培养和胚状体诱导的最佳培养基,WPM+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L为最佳分化培养基,1/2WPM+IBA 0.2 mg/L为生根培养基。以流式细胞仪对再生植株进行染色体倍性分析,结果表明珠心组织再生植株与母株染色体倍性一致,均为二倍体。     

甘薯外植体组织培养和植株再生

近年来,国内外已有许多研究单位开展了甘薯的组织培养和花药培养工作,并报道了从甘薯块根愈伤组织获得再生植株和应用顶端分生组织培养脱去病毒,以便达到提纯复壮的目的。吴耀武(1979),D.L.Biding和I.F.Shepard(1980)分别报道了甘薯茎、叶柄原生质体和叶肉细胞的群体发育。蔡新生等(1982)培养甘薯茎段获得愈伤组织并分化出胚状体。但至今尚未见到从甘薯的外植体茎段、叶柄和叶片的愈伤组织分化再生植株的研究文献。本文将报道这方面的一些实验结果。     

高频率生菜植株再生及转化体系的建立

通过对两种生菜及其不同外植体在培养基上不定芽发生能力的筛选，得到“大湖３６６”叶切片不定芽发生率高达８７％的培养体系，并且丛生状不定芽可陆续发生。将叶切片与农杆菌共培养，对经ｋｍ筛选后所得再生株进行Ｘ－Ｇｌｕ染色，兰色反应阳性率为５０％。     

苎麻叶片组织培养再生植株的研究

摘要：以中苎一号叶片为外植体,研究了外植体消毒时间、培养基、生长调节物质对苎麻品种中苎一号叶片愈伤诱导、分化不定芽和生根的影响。其结果表明：先用75%酒精消毒10秒,再用0.1%升汞灭菌8分钟,同时滴入1-2滴1% HCL效果最好。中苎一号最佳叶片愈伤组织诱导基本培养基为1/2MS;最佳叶片愈伤组织诱导培养基组合为:1/2MS+0.05mg/L TDZ+0.01mg/L IAA+0.03mg/L 2,4-D;最佳愈伤分化培养基为: 1/2MS+0.5mg/L TDZ+0.02mg/L 2,4-D+0.03mg/L IAA;最佳生根培养基为:1/2MS+0.02mg/L TDZ+O.O5mg/L NAA+0.02mg/L IAA, 形成了较为完善的组织培养再生体系,再生率达到了26%以上     

辽宁杨叶片高频植株再生体系的建立

为了提高辽宁杨的抗逆性及扩大它的适生区域,本研究以辽宁杨叶片为外植体材料,通过对附加不同浓度BA和NAA的MS培养基的筛选,建立了辽宁杨叶片高频植株再生体系,其不定芽诱导率及生根率都达到100%,辽宁杨最佳不定芽分化培养基配方为MS+BA 0.3 mg/L+NAA 0.05 mg/L,生根培养基配方为1/2MS+IBA 0.3 mg/L,为辽宁杨的抗性改良及分子育种实践奠定了基础。     

甜杨叶片高频率植株再生体系的建立

为了利用甜杨的抗冻性基因并利用生物技术手段对杨属进行抗寒性改良,本研究以甜杨叶片为外植体,研究了不同激素组合对甜杨不定芽诱导、分化及生根的影响,建立了甜杨叶片高频率植株再生体系。结果表明,诱导甜杨叶片不定芽分化的最适培养基配方为,MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L,再生频率及平均不定芽数分别为98.8%和23.0,最适生根培养基配方为,1/2MS+IBA 0.3 mg/L,生根率可达100%。为杨属的抗寒性改良及其分子育种实践奠定了基础。     

冰草属植物组织培养再生体系的建立

以适宜西北地区种植的优质牧草冰草属(AgropyronGaertn)中的三个不同种———蒙古冰草新品系(A.mongolicumKeng)、航道冰草(A.cristatumcv.Fairway)、诺丹冰草(A.desertorumcv.Nordan)和一个种间杂种冰草———蒙农杂种冰草(A.cristatum×A.desertorumcv.Mengnong)为材料,分别以幼穗为外植体建立了冰草组织培养再生体系。诱导愈伤组织的培养基为改良MS+2,4 D2.0mg/L,分化培养基为MS(无附加成分),在1/2MS培养基上生根后得到完整小植株。结果表明在本试验条件下,不同长度的幼穗在培养时,其愈伤组织发生的部位及其增殖速度不同;4种材料愈伤组织诱导率和分化率无明显差异,均可有效诱导愈伤组织并分化成再生植株,再生植株的产生主要通过直接器官发生途径。     

虉草成熟胚组织培养再生体系的建立

本研究以2个不同品种的虉草(Phalaris arundinacea)成熟胚为外植体,种子在无菌的条件下用70%的乙醇处理12 min配合0.1%的Hg Cl2消毒5 min,蒸馏水冲洗后在无菌条件下挑出胚接种到不同激素配比的培养基上,得到再生植株。结果表明:通选7号和川草3号在诱导培养基N6+3.0 mg/L~4.0 mg/L 2,4-D上的愈伤组织形成率都达到70%;通选7号在N6培养基+0.5 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA上的分化效果最佳,达95.38%,川草3号在N6培养基+0.5 mg/L 2,4-D+4.0 mg/L 6-BA上有最高的分化率89.33%,均可得到再生植株。本研究可消除虉草种子稃及种皮对植株再生的影响,以期在大规模生产利用上创造可能。     

椿叶花椒组织培养及植株再生

选用椿叶花椒带腋芽的茎段为外植体,进行组织培养与快速繁殖技术研究.结果表明椿叶花椒初代愈伤组织诱导以WPM 6-BA2.5mg·L-1 NAA2mg·L-1 IBA1mg·L-1效果最好;继代培养采用WPM 6-BA0.2mg·L-1 IBA0.1mg·L-1 NAA0.1mg·L-1,培养30d,增殖在5.6倍以上;生根培养1/4MS I-BA0.5mg·L-1,20d左右生根,平均根量4.6条,生根率95%.