太子参中芜菁花叶病毒的RT-PCR检测

建立并应用太子参中芜菁花叶病毒的检测技术。采用RT-PCR技术,设计特定引物从太子参病株中的不同部位扩增特定片段,且进行序列分析和比对。序列比对结果表明,扩增得到的片段为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因序列片段,本研究建立了一种简便可靠太子参中芜菁花叶病毒的检测方法,并且从太子参根、茎、叶和花中均检测到病毒目标序列。     

芜菁花叶病毒研究进展

概述了芜菁花叶病毒的研究进展,主要包括其地理分布与危害、寄主与传播途径、基因组结构及其功能、基因组的变异、检测、鉴定及抗性基因等内容,以期减少芜菁花叶病毒的危害。     

芜菁花叶病毒研究现状

芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)寄主范围广、危害大,一直是国内外研究的热点。文章从病毒生物学、基因组结构和功能、株系划分、抗性遗传规律、鉴定检测方法及抗病育种等方面介绍了TuMV的最新研究进展。     

芜菁花叶病毒提纯技术的研究

将繁殖于大白菜上的病叶榨汁,结合聚乙二醇(PEG)沉淀及差速离心技术,拟定三种提纯程序,所得芜菁花叶病毒(TuMV)粗提纯物,可侵染芜菁、萝卜和大白菜,并在苋色藜和普通烟黄茵榆上产生局部枯斑。测定提纯物表现出典型的核蛋白紫外吸收光谱,在电镜观察下,其丝状病毒粒子形态清晰且排列疏松均匀、病毒粒子长度集中分布在730nm、宽12～13nm。用水醋酸分解、可获得本病毒的提纯的衣壳蛋白,它具有典型蛋白质紫外吸收光谱,上述三种提纯程序中,以第三种程序最佳。初步认为,若设备不足情况下省用蔗糖密度梯度离心步骤,仅用第三种提纯程序,亦可获得较好提纯效果。     

烟草芜菁花叶病毒的ELISA和RT-PCR快速检测技术研究

采用间接ELISA和RT-PCR，建立了烟草芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus，TuMV）快速检测的技术体系。间接ELISA测定结果表明，TuMV多抗按1：3000浓度稀释后，具有较高的检测灵敏度，其检测极限浓度为1：3215；通过改进RNA提取技术，从少量的烟草病叶中提取出高质量总RNA，进行cDNA合成及PCR扩增，得到一条长度约986bp的特异PCR扩增产物，与理论设计的大小一致，可有效地对田间烟株进行快速检测。     

引起二月兰花叶病的芜菁花叶病毒研究

在表现花叶,植株矮化,茎叶坏死和畸形的十字花科观赏植物二月兰９Ｏｒｙｃｈｏｐｈｒａｇｍｕｓ ｖｉｏｌａｃｅｕｓ）上分离到一种线状病毒,其病毒粒子分布范围灯７８０－８００ｎｍ。通过寄主反应测定,病毒提纯和形态观察,血清学反应测定,确定该病毒为芜菁花叶病毒。病毒分离的ＡＨ１回接二月兰无病毒苗,引起黄斑,系统花叶,系统坏死和畸形,在供试十字花科植物上均产生系统侵染,并在洋酸桨等茄科供试寄主上引起系统症状     

转基因植株抗芜菁花叶病毒的鉴定

为鉴定转基因大白菜T1代对芜菁花叶病毒是否具有抗病性,采用摩擦接种法,将毒源接种到转基因T1代各植株和对照品种上,经培养、观察并鉴定其病情指数.结果表明:转基因T1代植株各品种的发病率及病情指数明显低于对照品种,且都具有明显的抗病性;经过统计分析表明,转基因T1代各品种的抗病性随着时间的增加,其抗病性有所减弱.     

引起二月兰花叶病的芜菁花叶病毒研究

在表现花叶、植株矮化、茎叶坏死和畸形的十字花科观赏植物二月兰（Ｏｒｙｃｈｏｐｈｒａｇｍｕｓｖｉｏ－ｌａｃｅｕｓ）上分离到一种线状病毒,其病毒粒子分布范围为７８０～８００ｎｍ．通过寄主反应测定、病毒提纯和形态观察、血清学反应测定,确定该病毒为芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）．病毒分离物ＡＨ１回接二月兰无病毒苗,引起黄斑、系统花叶、系统坏死和畸形,在供试十字花科植物上均产生系统侵染,并在洋酸桨等茄科供试寄主上引起系统症状．ＡＨ１与来自十字花科甘蓝型油菜上的一个ＴｕＭＶ有紧密的血清学关系,但在寄主反应上与之有一定差异．对自然发病的二月兰植株和接种ＡＨ１分离物的系统寄主用ＴｕＭＶ抗血清进行免疫电镜观察,均检测到线状病毒粒子,用ＣＭＶ抗血清、ＴＭＶ抗血清进行检测,均没有发现相关病毒．作者认为：ＴｕＭＶ即是引起二月兰花叶病的病原．这是ＴｕＭＶ侵染该属植物的首次报道．     

大白菜芜菁花叶病毒简化提纯程序的研究

大白菜芜菁花叶病毒(TuMV)沈阳分离物,是本研究组分离和纯化的毒原。在无虫温室中以人工接种于大白菜(小白口)叶片,适期收获,称重,冰冻过夜。次日加适量0.02M磷酸缓冲液,pH7.2匀浆。并进行差速离心;低速离心3000rpm,30分钟去寄主细胞器,取上清液搅拌加4％聚乙二醇(PEG—MW6000)及3％NaCl(W/V),搅拌沉淀病毒粒体,进行一系列低速及超速离心。超速离心后的沉淀物用0.01M磷酸缓冲盐液(含0.015M尿素)悬浮,得到纯化的TuMV制品。经电子显微镜检查,提纯物中含有大量单个非集聚的TuMV粒体。粒体平均长度为720nm,结构保持良好,粒体断裂现象很少。提纯物经指示植物接种测定,具侵染性。这一简化提纯法可以免去蔗糖密度梯度离心等过程,取得较为相似的效果。     

芜菁花叶病毒非蚜传株系的鉴定

1983年从南京蚕豆苗上采得斑驳症状的标样,分离到病毒标样B-98。用汁液摩擦接种在10科50种植物上,有7科20种植物表现不同类型的症状。在苋色藜上产生大块的褪色枯斑,在油菜、青菜上产生系统花叶症状。热钝化温度为55—60℃,稀释限点为10~(-3)—10~(-4),体外存活期为11天(8℃)。不能经蚜虫传播,也不能经种子传毒。病叶的汁液及粗提纯样品在电镜下均可见到大小为680—850×12—15nm的线状病毒粒体。免疫电镜和SDS-琼脂免疫双扩散试验表明,病毒分离物B-98与芜菁花叶病毒有十分密切的血清学关系。B-98为芜菁花叶病毒的一个非蚜传株系,定名为TuMV-NAT株系。     

基于酶催化沉积放大的检测芜菁花叶病毒的生物传感技术

提出了一种基于酶催化沉积放大检测芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus, TuMV)的生物传感技术。该方法先通过夹心免疫反应,将碱性磷酸酯酶标记的芜菁花叶病毒抗体固定到电极表面,然后通过碱性磷酸酯酶催化还原银离子在电极表面形成不溶性沉积物,从而放大电化学检测信号。考察了抗体的用量和沉积时间对免疫分析的影响,结果显示传感器信号响应与芜菁花叶病毒原液的浓度在10~1 000倍稀释范围内呈良好的线性关系,检出限达到500 000倍芜菁花叶病毒原液稀释浓度。     

夏秋萝卜抗芜菁花叶病毒品种资源的研究

1977～1986年,先后收集国内外夏秋萝卜材料(包括品种、品系和自交系)269份进行田间自然鉴定,选出53份较好的材料,再在室内接种芜菁花叶病毒(TuMV)诱发鉴定。筛选出对TuMV(N-100)高抗材料1份(R-7),抗病材料3份(R-40,R-41,R-42),耐病材料3份(R-50,R-52,R-53),还鉴定了中抗材料8份,中感材料8份,感病材料23份,高度感病材料2份(R-4,R-6)。这表明萝卜品种资源中存在抗TuMV基因资源,在萝卜和其它十字花科蔬菜抗病育种中可以利用。     

侵染贵州甘蓝的芜菁花叶病毒 CP 基因序列分析

【目的】明确贵州省甘蓝芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)的发生分布,为科学防控提供指导。【方法】在贵州省安顺市、威宁县和修文县采集甘蓝病毒病样品,采用酶联免疫吸附试验法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和RT-PCR对病样进行TuMV检测,利用相关生物学软件分析TuMV CP基因序列的一致性,并构建系统进化树。【结果】152份甘蓝样品中66份检测出阳性,检出率为43.42%;测序的15个TuMV CP基因核苷酸同源性为88.70%～100%,与已报道TuMV 6个组的分离物构建系统进化树发现,14个分离物属于basal-BR,1个分离物属于world-B组。【结论】TuMV在贵州省甘蓝不同种植区普遍发生,且basal-BR为感染甘蓝的优势毒源。     

芜菁花叶病毒杭州分离株外壳蛋白基因序列分析

从杭州郊区分离出一个ＴｕＭＶ强毒株系，利用分子克隆和Ｓａｎｇｅｒ双脱氢测序方法分析了其外壳蛋白基因的ＤＮＡ序列．该序列与已报道的其他４种ＴｕＭＶ分离物都具有较高的同源性，最高达９７．６％，最低达８９．５％，其氨基酸序列的同源性更高，最高达９７．９％，最低达９４．５％。本文分析了该序列中ＡＴ和ＧＣ含量，计算了４种核苷酸在有意义链中和在密码子不同位置上的出现频率，同时还分析了该病毒外壳蛋白氨基酸遗传密码的使用频率。     

不同寄主植物上芜菁花叶病毒外壳蛋白基因克隆及分析

为研究芜菁花叶病毒在不同寄主植物上的变异,从江苏省徐州市感病的油菜、萝卜及菠菜上分离到3个芜菁花叶病毒分离物,分别命名为XZYC、XZLB、XZBOC。经单斑分离,利用RT-PCR克隆了这3个分离物的cp基因序列,并进行了序列分析。结果表明,3个分离物的cp基因大小均为867 bp,一致率较高,为99.8%~99.9%,氨基酸一致率为100.0%。所分析的分离物cp基因未发现明显重组。山东分离物之间、江苏分离物之间及江苏和山东分离物之间基因交流频繁,两地区遗传分化显著。将中国和日本的部分分离物构建系统进化树,分为4个组,日本和中国分离物Basal-BR组分离物单独成簇,本研究的3个分离物都位于Basal-BR组。     

蚜虫唾液对白菜芜菁花叶病毒致病力的影响

作者以无毒菜缢管蚜(Lipaphis erysimi)和桃蚜(Myzus persicae)包含有唾腺的头胸部分别与感染芜菁花叶1号病毒的白菜叶制成匀浆,用针刺法接种到无毒白菜苗上;另用无蚜虫的有毒白菜叶匀浆作对照。结果表明,这两种蚜虫的唾液均有增强芜菁花叶病毒致病力的作用,而且菜缢管蚜的作用更大于桃蚜。