苹果体细胞悬浮培养及植株再生研究

以苹果试管苗叶片的再生不定芽嫩叶为试材,对苹果体细胞悬浮系的建立及植株再生的影响因素进行了研究.结果表明:在MS+NAA 0.5 mg/L+BA 2.0 mg/L培养基上可诱导获得高活力的愈伤组织.将该愈伤组织转入MS+2,4-D 2.0 mg/L+BA 1.0 mg/L液体培养基中培养,采用无菌筛网分离获得含单个细胞和少于8～10个细胞的小细胞团进行继代培养,建立体悬浮细胞培养系.将悬浮细胞转到MS+2,4-D 2.0 mg/L+BA 1.0 mg/L的固体增殖培养基上暗培养25 d后,可形成微型愈伤组织,将该愈伤组织转到MS+BA 5.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L的植株再生培养基上暗培养30 d后转入光下,光照培养30 d后53％的愈伤组织可再生植株.该研究建立的苹果体细胞悬浮培养技术,不仅可用于细胞融合及遗传转化过程中杂种细胞和转化细胞的分离及植株再生研究,而且对于利用组织培养技术筛选变异株系也具有重要意义.     

金银花细胞悬浮培养体系的建立研究

以金银花脱毒苗为试材,研究了外植体、培养基对金银花疏松愈伤组织的诱导以及悬浮培养液中激素种类及其浓度和初始接种量对金银花悬浮细胞生长的影响。结果表明:幼叶最易诱导愈伤组织;细胞悬浮培养最佳培养液为:MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L;最佳初始接种量为60g/L。     

颠茄植株再生体系的建立

以颠茄种子萌发的无菌苗为试材,采用组织培养方法,以MS为基本培养基,研究IAA、NAA、6-BA、KT对愈伤组织诱导及分化的影响,探索适宜颠茄愈伤组织诱导和分化的培养基。结果表明:在MS+KT 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L和MS+KT 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L培养基上,愈伤诱导率较高达100%,KT、6-BA添加生长素配比诱导愈伤组织效果不佳。KT单独诱导的愈伤组织宜在20d后转接,KT和6-BA配合使用诱导出的愈伤组织宜在40d后转接。生根适宜培养基为1/2MS+NAA 0.2~0.4mg/L。该研究建立了颠茄的植株再生体系,为颠茄的组织培养提供了技术体系。     

白鹤芋胚性细胞悬浮培养和高效植株再生体系的建立

以白鹤芋（Spathiphyllum cannifolium）试管苗叶柄为外植体诱导获得胚性愈伤组织,建立了胚性细胞悬浮培养系并高频率再生出植株。结果表明,最优的悬浮培养条件为：装有20 mL液体培养基的100 mL三角瓶中接种0.3 g胚性细胞团,悬浮培养基为MS + 0.5 mg ? L-1 TDZ + 1.0 mg ? L-1 2,4-D + 30 g ? L-1蔗糖或麦芽糖,pH 5.8;继代间隔14 d;每个继代周期,胚性细胞团可增殖至接种量的5倍以上;植株再生最优的分化培养基为1/2MS + 0.3 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 8.0 g ? L-1琼脂粉,pH 5.8,平均每个胚性细胞团可分化再生出25.1株小植株;胚性细胞的快速增殖和高频率植株再生的状态可保持24周。     

利用未成熟种子建立野生阿宽蕉胚性细胞悬浮系和植株再生的研究

以纵切的野生阿宽蕉60d龄未成熟种子为外植体,在MI1愈伤组织诱导培养基(MS大量和微量元素及铁盐+MorelandWetmore维生素+0.1mmol/LKH2PO4+87mmol/L蔗糖+4.5μmol/L2,4-D+1g/LGelrite)中培养60d后开始出现浅黄色松散的胚性愈伤组织,150d后愈伤组织诱导率为(15.11±1.95)%。该类愈伤组织被转移到含18μmol/L2,4-D的MI2培养基中继代60d后,可获得状态均一的理想的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织悬浮培养后,通过2个月的筛选和继代培养,可得到均质的胚性细胞悬浮系。理想的胚性愈伤组织在体细胞胚诱导培养基中培养10d后可见到白色半透明体细胞胚的发生,体细胞胚诱导率为7.70×105个/gFW。成熟体细胞胚的萌发率为(33.33±3.37)%,植株再生率为(20.83±1.68)%。     

文冠果组织培养和植株再生研究

以文冠果实生苗幼嫩叶片为外植体,研究了植物生长调节剂种类及配比对文冠果组织培养及植株再生的影响,经愈伤诱导、增殖、分化、伸长和生根培养,获得了再生植株,建立了文冠果体细胞胚发生及再生植株体系.结果表明:最适合文冠果胚性愈伤诱导的培养基为DKW+ 6-BA0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0mg/L;最适分化及增殖的培养基为DKW+6-BA0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+KT 1.0 mg/L;伸长培养基为DKW+6-BA 0.2 mg/L+IBA 0.5 mg/L;生根培养基为1/2MS+IBA0.5 mg/L,生根率为81％,移栽成活率可达到90％以上.该再生体系的建立为文冠果快速繁殖和遗传转化的研究奠定了基础.     

翠菊‘花束绯红’叶片的植株再生体系建立

以翠菊‘花束绯红’无菌苗为材料,研究了植物生长调节剂浓度及组合、光照条件、不同附加物对叶片及其愈伤组织再生植株的影响。结果表明:(1)在光照培养条件下,诱导翠菊叶片不定芽形成的最适培养基为MS+6-BA3.0mg·L-1+IBA1.0mg·L-1,诱导率为56.7%,平均不定芽数为3.3;(2)黑暗培养不利于叶片不定芽的分化,但促进叶片愈伤组织的形成;(3)培养基中分别添加脯氨酸、水解酪蛋白和NH4NO3等均能明显促进愈伤组织不定芽的诱导,最适培养基为MS+6-BA1.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+脯氨酸300mg·L-1,诱导率为82.8%,平均不定芽数为4.5;(4)不定芽移到幼苗生根培养基(1/2MS+IBA0.1mg·L-1)上,生根率为89.1%,移栽后成活率达89.3%。     

金丝小枣花药离体培养再生植株研究

用ＭＳ培养基对金丝小束花药进行离体培养，诱导愈伤组织，并再生小植株。研究结果表明，花药的采接时期、低温处理及不同激素浓度对愈伤组织诱导有直接影响；６—ＢＡ是愈伤组织分化成绿色生长点及绿芽再生小植株的主要因素。     

怀地黄愈伤组织诱导及细胞悬浮培养体系的建立

研究了植物生长调节剂和接种方式对怀地黄叶片愈伤组织诱导的影响和细胞悬浮培养体系的建立。结果表明:将叶片正接在MS+2,4-D 1mg/L+6-BA 0.4mg/L培养基上,愈伤组织生长良好,诱导率达100%;在该培养基上多次继代,可形成3种类型的愈伤组织,其中Ⅰ型愈伤组织淡黄色、颗粒透亮、分散性好且疏松易脆,适合进行细胞悬浮培养;在MS+2,4-D 3mg/L+6-BA 0.5mg/L培养基中,悬浮培养细胞生长曲线呈"S"型,培养15d时细胞干重达最大值,为4.94g/L。     

夏堇悬浮细胞培养与植株再生研究

以夏堇品种“小丑”的组培苗幼嫩叶片为试材,进行愈伤组织诱导、细胞悬浮培养及植株再生诱导的研究.结果表明:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L2,4-D的培养基能够使叶片诱导为生长迅速、质地疏松的愈伤组织.愈伤组织最适宜的悬浮培养条件为:MS+ 1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L 2,4-D液体培养基,20 g/L的起始接种量以及100 r/min的震荡培养.将继代3～4次的细胞悬浮颗粒转到1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA的固体再生培养基上培养,3周后可以诱导分化出芽,进而获得完整植株.悬浮培养有利于夏堇愈伤组织的再生,悬浮培养对提高以夏堇作为模式植物进行的相关研究具有重要的应用价值.     

半夏组培苗的生根与移栽技术研究

在半夏的组培生根阶段,采用1/2MS+NAA 0.5mg/L培养基,添加不同配比的IBA进行诱导生根比较;在半夏组培苗的出瓶移栽过程中,生根苗栽植于6种不同基质中,对出瓶移栽后的生长情况进行比较。结果表明:半夏生根阶段最佳的培养基为1/2MS+NAA 0.5mg/L+IBA 0.4mg/L,出瓶基质选用蛭石+珍珠岩(体积比1∶1),成活率可达98%,为最佳基质。     

四川‘竹根姜’胚性细胞悬浮系的建立与植株再生

 选用四川省地方品种‘竹根姜’的茎尖组织建立了体细胞胚性细胞悬浮系, 并通过悬浮培养获得了姜再生植株。结果表明悬浮细胞干质量受pH影响。接种量和AgNO₃ 对悬浮细胞的生长都有影响:最佳接种量为1.0% , 最适AgNO₃浓度为6.0 mg·L ^{- 1}。胚性细胞悬浮系增殖后, 接种到前期筛选的成熟分化培养基上获得了再生植株。     

蕨菜愈伤组织高效再生体系的建立

 报告了蕨菜不同外植体在含有不同激素的培养基上诱导、分化及生根情况，建立起高效再生体系。诱导愈伤组织的最适培养基为1/2 MS+BA 0.2 mg/L+IBA 0.4 mg/L+NH₄H₂PO₄ 200 mg/L; 诱导愈伤组织芽分化的最适培养基为1/2 MS，芽分化率为100％; 不定苗在1/2 MS+IAA 0.2 mg/L 培养基上生根率为100％，同时可以形成健壮根茎；具有根茎的试管苗移栽成活率达94％。     

芹菜胚性细胞悬浮系原生质体分离及再生植株

利用芹菜胚性细胞悬浮系成功分离得到大量原生质体, 获得芹菜大量原生质体的最佳反应体系为: 酶液组成为3.0%纤维素酶Onozuka R210、1.0%离析酶R210、11%甘露醇、0.5% CaCl₂ ·2H₂O和0.1% MES; 摇床转速为80 r/min, 温度(25 ±2) ℃, 酶解时间5～6 h; 原生质体产量为25.00 ×10⁶ /g, 原生质体活力83.41%。原生质体浅层培养, 培养基为1 /2 MS + 1 mg/L 2, 4-D + 0.5 mg/L KT + 11%甘露醇+ 500 mg/L水解络蛋白, 两天后, 重新再生细胞壁之后进行第1次分裂, 逐步降低渗透压至甘露醇3% ,大约30 d形成小细胞团。小愈伤组织经增殖培养后在1 /2MS + 500 mg/L CH + 0.25 mg/L KT固体分化培养基诱导出不定芽, 30 d后再转入MS基本培养基, 获得完整的再生植株。     

小菊悬浮细胞培养与植株再生研究

 以小菊‘七月红’品种为试材, 进行了细胞悬浮培养及植株再生诱导的探讨。结果表明, MS+ 1.0 mg·L ^-1 2, 4-D + 0.2 mg·L ^-1 6-BA培养基适合从试管苗茎段有效诱导生长迅速、质地疏松的愈伤组织。获得的愈伤组织在MS + 0.5 mg·L ^{- 1} 2, 4-D + 0.2 mg·L ^{- 1} 6-BA液体培养基中振荡培养, 建立细胞悬浮培养体系。悬浮细胞的生长曲线呈上升的半抛物线型, 细胞生长大致分缓慢生长期(0～2 d) 、对数生长期(2～10 d) 和停滞期(10 d以后) ; 随着悬浮细胞生长, 培养液pH值迅速下降。悬浮细胞固液双层培养表明, 在培养基MS + 0.2 mg·L ^{- 1} KT + 0.2 mg·L ^{- 1} 2, 4-D上植板率最高; 4℃低温2 h处理能促进悬浮细胞生长, 提高植板率; 随着继代次数增加植板率呈下降趋势。培养1个月后, 形成了直径约0.2 cm的愈伤组织, 将其转到MS + 2 mg·L ^-1 6-BA + 0.1 mg·L ^{- 1} NAA培养基后, 继代4次, 分化后出芽; 分化芽在培养基MS + 0.5 mg·L ^-1 NAA上诱导生根, 形成小植株。     

植物生长调节剂对银杏悬浮细胞生长和黄酮糖苷含量的影响

试验表明：Ｎ_２（ＭＳ＋１ｍｇ ．１~（－１）ＮＡＡ＋２ ｍｇ·１~（－１）ＫＴ）和Ｂ３（ＭＳ＋１ｍｇ ．１~（－１）ＮＡＡ＋２ ｍｇ ．１~（－１）６－ＢＡ）培养基最有利于银杏悬浮细胞干重的积累。 Ｎ_２和 Ｂ_２（ＭＳ＋ １ｍｇ．１~（－１）ＮＡＡ＋ １ｍｇ·１~（－１）６－ＢＡ）培养基有利于黄酮糖苷积累,而ＧＡ_３、２,４－Ｄ、ＺＴ处理均不利于黄酮糖苷积累。     

多花蔷薇胚性细胞悬浮系原生质体分离及再生植株

利用多花蔷薇‘无刺3号’假珠芽诱导的胚性愈伤细胞悬浮系分离得到原生质体,并培养获得再生植株。酶种类和浓度, 酶解时间及悬浮细胞继代时间对原生质体分离有重要影响,最佳酶液组成是2.0%纤维素酶,0.5%离析酶,5.0 mmol·L^-1 MES, 0.5 mol·L^-1甘露醇,0.5% CaCl₂·2H₂O。采用继代3 d的悬浮细胞系,酶解10 h,原生质体产量达到26.67×10⁶g^-1,原生质体活力为92.21%。采用液体浅层培养,肌醇比蔗糖更有利于纯化后的原生质体分裂和生长。愈伤组织形成增殖培养基为1/2MS + 2,4-D 1.0 mg·L^-1+ EBR 0.2 mg·L^-1 + 10 g·L^-1 Ficoll + 500 mg·L^-1谷氨酰胺 + 20 mg·L^-1甘氨酸 + 20 mg·L^-1天冬氨酸,分化培养基为1/2MS + 10 mg·L^-1 TDZ + 500 mg·L^-1谷氨酰胺+ 20 mg·L^-1甘氨酸+ 20 mg·L^-1天冬氨酸,后转入1/2MS培养基上获得完整植株。     

结缕草愈伤组织诱导及植株再生

 以日本结缕草种子为外植体，2份材料在附加2,4-D 2.0 mg/L水平的Ms培养基上愈伤组织诱导率较高；在含不同水平2,4-D的培养基中添加6-BA对非胚性愈伤组织转变成胚性愈伤组织起重要作用，其中2,4-D 2.0 mg/L配合6-BA 0.1mg/L的Ms培养基诱导出的胚性愈伤组织比例较高；胚性愈伤组织在2,4-D为0.1mg/L的分化培养基上分化率和生根率最高，为46.8％~ 48.1％。