南盐油1号油菜的组织培养及植株再生研究

以南盐油1号油菜的下胚轴为外植体,利用组织培养的方法,研究苗龄、预培养时间、预培养基的激素配比、分化培养基的激素配比及AgNO3浓度等对芽再生的影响.结果表明,6 d苗龄的下胚轴在MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA培养基预培养4 d后,转入分化培养基MS+2.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+8 mg/L AgNO3培养,可以获得较高的芽再生频率.     

甘蓝型黄籽油菜的再生能力研究

以甘蓝型油菜30个黄籽品系和50个黑籽品系为材料,对黄籽品系和黑籽品系的下胚轴芽再生频率以及黄籽油菜下胚轴和子叶的芽再生频率进行了比较。结果表明:黄籽和黑籽品系的下胚轴芽再生频率无明显差异。从总体上看,黄籽品系的下胚轴芽再生频率都较低,品系间差异显著,部分品系如SH 21,SH 167,SH 34表现较好。甘蓝型黄籽油菜子叶的芽再生频率(平均89.49%)极显著地高于下胚轴(平均15.95%),但其差异随品系而异,特别是品系DH33,部分处理子叶芽再生频率为100%,而下胚轴芽再生频率却为0。     

甘蓝型黄籽油菜的再生能力研究

以甘蓝型油菜30个黄籽品系和50个黑籽品系为材料,对黄籽品系和黑籽品系的下胚轴芽再生频率以及黄籽油菜下胚轴和子叶的芽再生频率进行了比较.结果表明:黄籽和黑籽品系的下胚轴芽再生频率无明显差异.从总体上看,黄籽品系的下胚轴芽再生频率都较低,品系间差异显著,部分品系如SH 21,SH 167,SH 34表现较好.甘蓝型黄籽油菜子叶的芽再生频率(平均89.49%)极显著地高于下胚轴(平均15.95%),但其差异随品系而异,特别是品系DH33,部分处理子叶芽再生频率为100%,而下胚轴芽再生频率却为0.     

甘蓝型黄籽油菜下胚轴再生体系的初步研究

以4个甘蓝型黄籽油菜品系为试验对象，采用正交设计，研究了预培养基中2，4-D和6-BA浓度、预培养天数、分化培养基中NAA和6-BA浓度组合、AgNO3浓度等对下胚轴芽再生频率的影响；同时研究了萌发培养基中添加6-BA和NAA对再生频率的影响。结果表明：预培养基中2，4-D及6-BA浓度是影响再生的主要因素；不同材料和不同处理间芽再生频率差异显著，且材料与处理间有明显的互作效应；萌发培养基中添加6-BA和NAA对再生频率无明显影响，但对芽苗的正常形态建成不利。     

甘蓝型黄籽油菜高油品系下胚轴再生体系研究

为获得甘蓝型油菜高含油量双低恢复系,育成高含油量双低油菜杂交种,以2个不同甘蓝型黄籽油菜高油双低品系(GY1、GY2)下胚轴为外植体,采用正交设计,研究了预培养基中2,4-D和6-BA质量浓度、预培养时间、分化培养基中NAA和6-BA质量浓度组合以及AgNO3质量浓度5种不同因素对其下胚轴芽苗再生的影响。结果表明,除AgNO3质量浓度外,其他4种因素对2个油菜品系下胚轴芽苗再生均具有显著或极显著影响。2个油菜品系间和不同处理间的芽苗再生频率差异均达显著水平,且油菜品系与处理间存在明显互作效应。4d苗龄,在MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L预培养基上预培养3d后,在添加NAA 0.05mg/L+6-BA 2.0mg/L的分化培养基中芽苗再生频率最高,GY1和GY2的下胚轴芽再生频率分别为45.2%和41.7%。初步建立了甘蓝型油菜高油品系的下胚轴再生体系,为高含油量油菜遗传转化奠定了基础。     

甘蓝型黄籽油菜下胚轴再生体系的初步研究

以4个甘蓝型黄籽油菜品系为试验对象,采用正交设计,研究了预培养基中2,4-D和6-BA浓度、预培养天数、分化培养基中NAA和6-BA浓度组合、AgNO3浓度等对下胚轴芽再生频率的影响;同时研究了萌发培养基中添加6-BA和NAA对再生频率的影响.结果表明:预培养基中2,4-D及6-BA浓度是影响再生的主要因素;不同材料和不同处理间芽再生频率差异显著,且材料与处理间有明显的互作效应;萌发培养基中添加6-BA和NAA对再生频率无明显影响,但对芽苗的正常形态建成不利.     

提高甘蓝型油菜下胚轴外植体植株再生的研究

    以甘蓝型油菜品种N1、N2、N3、N4、N5和N6的下胚轴为材料,研究外植体芽再生的影响因素.结果表明:不同植物激素的组合、Ag+、蔗糖浓度、GA3、外植体的生理状态即苗龄以及基因型对外植体的再生均有较大影响.4 d苗龄的下胚轴置于含1.5 mg·L-1 2,4-D的MS培养基中预培养7 d,再转接到含30 g·L-1蔗糖的分化培养基(MS+BA 4 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+AgNO3 2.5 mg·L-1)上,芽再生频率和再生外植体数均较高,其中品种N1分别达到了40%和3.7.添加1.0 mg·L-1GA3可促进胚状体形成,芽苗再生频率显著提高(品种N1达到了95%,比不添加GA3提高了1倍多),但较易形成玻璃苗.     

农杆菌介导的甘蓝型油菜下胚轴遗传再生体系研究

[目的]研究农杆菌介导的甘蓝型油菜下胚轴遗传再生体系。[方法]以甘蓝型油菜为试验材料,以组织培养为基础。以下胚轴为外植体,以统计出愈率和出苗率为指标,探讨农杆菌介导的遗传再生苗形成的影响因素。以G蛋白信号转导调节蛋白（RGS）为例,建立稳定的甘蓝型油菜下胚轴遗传再生体系。[结果]种子经10％NaCl0灭菌20mim后播种,基底用1／2MS配琼脂,直径6cm的培养罐50粒,光照充足（200μmol／m^2·s）,成功获得RGSi干扰表达阳性株系。[结论]试验以下胚轴为外植体,系统研究了甘蓝型油菜组织培养过程中各种因素对再生苗形成的影响,建立了有效的下胚轴遗传再生体系。     

新疆甘蓝型油菜下胚轴的组织培养和植株再生研究

以新疆甘蓝型油菜(Brassica napus L.)1khp11品系下胚轴为外植体,不同浓度6-BA与NAA激素组合的分化培养基诱导芽苗的分化,研究发现下胚轴在不同激素及浓度的6-BA与NAA组合中再生频率、分化率存在显著差异.通过种子实生无菌苗苗龄、诱导分化,4-D的预培养、添加AgNO3等因素的系统分析:五日无菌种子实生苗的下胚轴通过3d短时间的预培养,在最适分化培养基MS0+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+3.5mg/LAgNO3中,再生频率和分化率分别为35;和122.5;,初步建立了甘蓝型油菜1khp11品系下胚轴的高频率再生植株体系,为开展优良性状甘蓝型油菜的生物技术育种工作提供了条件保证.     

甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴高频再生体系的建立

【目的】探索甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴的最佳离体培养条件。【方法】以甘蓝型油菜雄性不育系B2无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究了苗龄、预培养时间、预培养基和分化培养基中激素配比等对甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴高频再生的影响。【结果】4因素对甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴的再生均有明显影响。4 d苗龄,在MS+6-BA 1mg/L+2,4-D 1mg/L预培养基上预培养3 d后诱导分化,子叶在添加NAA 0.02 mg/L+6-BA 3.0 mg/L的分化培养基中分化率最高,达80.45%,下胚轴在添加NAA 0.05 mg/L+6-BA 3.0 mg/L的分化培养基中分化率最高,达69.33%。【结论】建立了甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴稳定高效的再生体系,为其遗传转化奠定了基础。     

甘蓝型油菜下胚轴原生质体培养再生植株

油菜是重要的油料作物,我国的油菜种植面积和油菜籽产量均居世界首位。提高油菜籽粒含油量是育种的主要目标之一。我们利用拥有自主知识产权的反义PEP(phosphoenolpyruvate carboxylse）技术获得了超高含油量油菜＾[1]。将超高含油量特性与油菜杂种优势结合是使超高油油菜尽快应用于生产,实现产业化生产的重要途径。而超高含油量不育系的选育是杂种优势利用的前提之一。通过不对称体细胞杂交能“一步法”快速选育不育系＾[2]。为此,建立重演性好、再生额率高的原生质体培养系统十分必要。甘蓝型油菜原生质体的培养已有一些成功的报道＾[3-6],但愈伤组织分化频率都不高。本文以甘蓝型油菜下胚轴为材料,通过琼脂糖包埋法,建立了原生质体高频分裂及植株再生体系,为通过不对称体细胞杂交快速选育超高含油量不育系提供一些科学依据。     

甘蓝型油菜下胚轴离体培养再生植株研究

[目的]为进一步通过基因转化获得预期优良性状的甘蓝型油菜提供借鉴。[方法]以甘蓝型油菜的下胚轴为外植体,研究不同苗龄、不同基因型、不同预培养条件以及各种生长调节剂组合对油菜外植体高频率再生的影响。[结果]试验中,7 d苗龄的甘蓝型油菜下胚轴再生频率可达35.83%;经3 d预培养处理的油菜下胚轴芽再生频率可提高至57.78%,油菜品种史力丰下胚轴的芽分化率较高,达35.00%,其次是N481-1,而N370-1的芽分化率最低;其最高分化率的激素组合为6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+TDZ 1.0 mg/L,达38.89%。史力丰品种6~8 d无菌种子实生苗的下胚轴在预培养基MS+2,4-D 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4.5 g/L上预培养3 d,在最适分化培养基MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO35.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4.5 g/L中培养,再生频率最高。[结论]建立了甘蓝型油菜下胚轴离体培养高频率再生植株模式。     

提高甘蓝型油菜离体培养再生频率的研究

以甘蓝型油菜为材料,研究了不同外植体、基因型以及Ag+和赤霉素(GA3)等对甘蓝型油菜离体再生的影响,建立了甘蓝型油菜高频率的离体再生体系.不同基因型品种以4 d苗龄的无菌苗子叶作为外植体,培养在MS培养基上并附加BA 3.0 mg/L,NAA 0.15 mg/L,GA3 1.00 mg/L,AgNO₃2.5mg/L,在23～25 ℃、16 h光照(2 00O～3 000 lx)下培养27 d以上即可实现不同基因型品种子叶外植体高频率芽的再生.     

辐射对甘蓝型油菜下胚轴再生的影响

为探讨辐射对离体培养的甘蓝型油菜再生的影响,试验选择再生频率较高的甘蓝型黄籽油菜品系SH31、K81和甘蓝型黑籽品系P52,以种子、预培养的下胚轴为诱变材料进行不同剂量的60Co-γ射线照射处理,分析了辐射对油菜芽再生的影响。结果显示:甘蓝型油菜种子经60Co-γ射线辐射后离体培养,以下胚轴为外植体,外植体芽再生率随60Co-γ剂量的增加而降低;用不同剂量的γ射线直接对预培养的下胚轴进行辐射,10~30 Gyγ射线辐射可明显促进外植体的再生,并且随浓度增加而增加,但是当浓度超过40 Gy,再生率则随浓度增加而降低。另外预培养的时间对辐射后芽的再生影响较大,预培养4 d的外植体芽再生率高于预培养2 d的。     

甘蓝型油菜遗传转化体系的研究

以甘蓝型油菜９５０６品系的下胚轴为受体,用根癌农杆菌介导,进行了除草剂Ｇｌｕｆｏｓｉｎａｔｅ抗性基因（ｐａｔ）的转化试验,得到了抗卡那霉素（Ｋａｎ）选择剂的小植株,并对影响转化的一些因素进行了研究。试验结果表明：Ｋａｎ和羧苄青霉素（Ｃｂ）对芽再生均具有很强的抑制作用;用含２,４－Ｄ的培养基对下胚轴进行预培养和选择培养基中附加ＡｇＮＯ３均能促进转化细胞的生长和芽的再生。转化植株对Ｇｌｕｆｏｓｉｎａｔ     

6BA和AgNO3对甘蓝型油菜带柄子叶外植体不定芽再生的影响

通过研究两个甘蓝型油菜 (BrassicanapusL )亲本材料“宁A6”和“宁R1”带柄子叶外植体不定芽再生能力 ,探明了 6BA和AgNO3 浓度对外植体不定芽再生能力影响效果 ,并确定了促进两种不同基因型甘蓝型油菜不定芽再生的最适 6BA和AgNO3 浓度。组织学观察表明 ,不定芽是由子叶柄基部维管束薄皮组织分化形成的     

激素组合等在甘蓝型油菜下胚轴再生中的作用

激素和基因型对油菜外植体的高效再生具有重要作用。试验以甘蓝型油菜湘油14号、湘油15号和Y03-211共3种油菜基因型为材料,对不同浓度组合的6-BA,NAA,GA3,AgNO3组成的18种培养基在下胚轴植株再生中的作用进行研究,以明确不同激素种类在外植体再生中的作用,进而建立甘蓝型油菜下胚轴高效再生体系。结果表明,在供试的18种培养基中,所有材料都能获得80%以上的出愈率。但是不同培养基下胚轴再生率差异显著,其中,6-BA对油菜下胚轴再生植株的分化是必需的;6-BA与GA3组合优于6-BA与NAA组合;在培养基其他成分相同的条件下,添加AgNO3能够明显提高正常芽苗分化率;不同品种的再生植株分化能力不同。油菜生根使用生长素NAA比使用IAA诱导或不使用植物激素诱导的生根效果更好。基因型、激素组合以及培养基中AgNO3的添加对再生植株的分化具有重要影响,其中,MS+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3+20μmol/L AgNO3培养基最有利于诱导再生植株分化;MS+0.2 mg/L NAA培养基最有利于诱导再生芽苗生根。     

油菜下胚轴再生频率影响因素研究

以甘蓝型油菜Brassica napus双低品种湘油13号为材料,对其下胚轴再生频率影响因素诸如种子萌发培养基、外植体、基本培养基、激素、愈伤组织龄期和AgNO3浓度等进行了研究。结果表明,在种子萌发培养基中加入适量激素,种苗质量好,其下胚轴愈伤组织发生早,形成快,诱导频率高,选取4d苗龄的种苗下胚轴靠近根基部或近子叶端0.3～0.5cm长为针植体,能使愈伤组织发生早,形成快,诱导频率也高,以B5 2,4-D0.3mg/L 6-BA3mg/L为诱导培养基,MS 6-BA3mg/L GA30.5mg/L为分化培养基,最终诱导频率高,在分化培养基中再加入适量AgNO3,芽苗分化频率成倍提高,以加入20umol/LAgNO3分化频率最高,选取16d的愈伤组织,分化效果较好。     

甘蓝型油菜‘瑞油8号’的选育

‘瑞油8号’是汉中市瑞丰生物科技有限责任公司和城固县农业科学研究所,利用双低细胞质不育系0851A与恢复系0727C组配育成的油菜品种。2013年通过陕西省农作物品种委员会审定,随后在陕南油菜产区大面积推广种植,2014-2019年累计推广面积10.2万hm。     

利用正交设计优化甘蓝型油菜高频再生体系

采用L16(45)正交试验比较了BAP、NAA、AgNO3、蔗糖和外植体等5因素对甘蓝型油菜离体再生的影响,结果表明:BAP为甘蓝型油菜再生频率最主要的影响因素,其次依次为外植体、NAA和AgNO3,蔗糖对其影响不显著.结果显示,MS BAP 4 mg/L NAA 0.3 mg/L AgNO3 2.5 mg/L 2%蔗糖 0.8%琼脂为培养基,以带柄子叶为外植体的甘蓝型油菜再生体系的再生频率最高,达到94.45%.