温度、盐度变化及鳗弧菌刺激对菲律宾蛤仔I型溶菌酶基因表达的影响

为研究在环境因素变化后,菲律宾蛤仔Ⅰ型溶菌酶参与免疫应答反应的变化模式,实验采用cDNA末端快速扩增技术,从菲律宾蛤仔体内克隆获得了一种Ⅰ型溶菌酶基因的全长cDNA序列(命名为RpiLYZ-2),该序列开放阅读框(ORF)为471 bp,编码156个氨基酸.RpiLYZ-2基因在所检测组织中均有表达,其中在外套膜中表达量最高,在肌肉组织中表达量最低.采用荧光定量PCR法,研究了不同温度[(29±1)、(21±1)和(13±1)℃]、盐度(32、22和12)及鳗弧菌刺激对菲律宾蛤仔Ⅰ型溶菌酶基因表达的影响.结果显示,在温度21℃和盐度22胁迫处理后,RpiLYZ-1基因的表达量呈现先上升后下降的趋势,而RpiLYZ-2基因的表达量则呈现先下降后上升的趋势.在高温29℃和低盐12胁迫条件下,RpiLYZ-1基因表达量总体呈下降趋势,而RpiLYZ-2基因表达量总体呈上升趋势;经鳗弧菌刺激后,RpiLYZ-1基因的表达量得到显著诱导,而RpiLYZ-2基因表达量则表现为先降低后上升的趋势.研究表明,环境因子变化和病原菌刺激能够显著影响菲律宾蛤仔两种Ⅰ型溶菌酶基因的表达量,且RpiLYZ-1和RpiLYZ-2可能存在着功能分化.     

温度和盐度对菲律宾蛤仔稚贝生长及发育的影响

本文叙述了，在室内控制条件下，温度和盐度对菲律宾蛤仔稚贝生长及发育的影响。蛤仔稚贝生长的适宜水温为15—30℃，其中以25℃为最好。在此温度范围内，稚贝生长迅速，成活率高达80％以上。稚贝对10℃以下的低温有强的忍耐性，也能忍耐35℃的高温，其死亡的临界温度在40℃左右。稚贝生长的适宜盐度为14．0—33．5‰，最适盐度是20．5‰左右。在此盐度范围内，稚贝发育整齐，成活率高达85％以上。生长的盐度下限和上限分别为7．5‰和40．0‰左右。幼虫变态的适宜盐度在20．5～33．5‰之间，在此盐度范围内，幼虫成活率为65％以上。盐度在27‰时幼体的成活率最高，达到92．5％。幼虫变态的盐度下限为7．5‰左右，而上限则在于40．0—46．5‰之间。     

盐度对菲律宾蛤仔浮游幼体存活和生长的影响

研究结果表明:菲律宾蛤仔受精卵在26℃水温下的最适孵化盐度为23 8～34 8,孵化率平均在80%以上;盐度38 3和21 2组,对受精卵的孵化有一定负面影响,孵化率为30%～60%;盐度低于15 9,受精卵基本上不能孵化;盐度29 5为幼体生长的最适盐度,8d可生长成下潜幼体,平均日生长16μm,成活率90%,盐度高于或低于29 5,其幼体的存活和生长都受到很大影响。     

两种弧菌对菲律宾蛤仔代谢途径影响的比较研究

采用基于核磁共振波谱技术的代谢组学技术,探索菲律宾蛤仔在受到鳗弧菌和灿烂弧菌感染的代谢物变化特征,构建菲律宾蛤仔对弧菌感染后的代谢网络调控图谱,并比较两种弧菌毒性效应的差异。试验结果表明,3种代谢物葡萄糖、谷氨酸、苏氨酸在两种弧菌感染时均发生了变化,表征鳗弧菌感染的代谢物为牛磺酸、精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸;而表征灿烂弧菌污染的代谢物为甜菜碱、二甲基甘氨酸、胆碱、谷氨酸、亚牛磺酸。     

盐度胁迫对不同发育时期菲律宾蛤仔生长和存活的影响

盐度是影响海洋贝类存活、生长、发育、繁殖等生命活动的关键因素,其生命活动时刻受到海洋局部环境中盐度变化的影响。对海洋贝类适应盐度胁迫机制的研究是学术界长期关注的问题。大量研究表明,盐度胁迫会对海洋贝类的生长、渗透调节、能量代谢和免疫反应等生物学过程产生影响。近年来,随着基因组、转录组等组学技术的发展和广泛应用,许多研究从分子水平来探讨海洋贝类适应盐度胁迫的机制。本文综述了海洋贝类在盐度胁迫过程中的调控机制,包括渗透调节、能量代谢、免疫反应,以及转录组和基因组在海洋贝类盐度胁迫机制研究中的应用,提出了广盐性海洋贝类在盐碱水领域中的开发潜力,为海洋贝类抗逆品种选育以及绿色养殖提供重要参考。

     

菲律宾蛤仔二种I型溶菌酶的重组表达和抑菌活性

为研究病原微生物刺激后,菲律宾蛤仔I型溶菌酶的免疫应答反应,实验采用重组表达技术,从菲律宾蛤仔中得到2种I型溶菌酶的重组蛋白rVpILYZ-1和rVpILYZ-2,发现其均具有较为广谱的抑菌活性;其中,rVpILYZ-1对副溶血弧菌、灿烂弧菌和藤黄微球菌等具较强的抑菌活性,而rVpILYZ-2对副溶血弧菌抑菌活性较强,且二者均通过非酶抑菌活性和胞壁酸酶活性来发挥抑菌作用。结果显示,rVpILYZ-1最适pH和温度分别为6.5和20 ℃,而rVpILYZ-2最适pH和温度则分别为4.5和10 ℃。此外,rVpILYZ-1和rVpILYZ-2均具免疫调理活性,能够促进血细胞对病原菌的吞噬作用。研究表明,VpILYZ-1和VpILYZ-2在菲律宾蛤仔清除病原微生物的免疫应答反应中发挥重要作用。     

温度对菲律宾蛤仔滤食率、清滤率和吸收率的影响

于1997年12月,1998年3月、7月,1999年8月在中国科学院海洋研究所实验室采用静水方法对9土0.1℃,16土0.5℃,22土0.2℃,26±0.6℃下菲律宾蛤仔的滤食率FR、清滤率CR、吸收率AE进行了测定。结果表明,在9～22℃温度范围内蛤仔滤食率、清滤率、吸收率均随温度的升高而增大,在22℃达到最大值,并且各温度间差异显著(ANOVA,P＜0.05)。当温度达到26℃时,滤食率、清滤率、吸收率均有所下降,但和22℃值比较差异并不显著(ANOVA,P＞0.2)。说明蛤仔对温度有很强的适应能力,其生长最适温度为22℃左右。     

低温对菲律宾蛤仔能量收支的影响

在实验室内采用静水法，测定了在315和8℃下，菲律宾蛤仔的耗氧率和排氨率与体重的关系及其能量收支情况。实验数据显示，在实验的温度范围内，菲律宾蛤仔的耗氧率和排氨率都与体重负相关；温度对耗氧率的影响与体重有关。摄食率、生长率（净生长率、毛生长率）与温度正相关。温度对能量分配影响较大，代谢分配率、排粪分配率随温度的升高而降低，且变化极其显著（P＜0.01)；生长分配率随温度的升高而增大。在能量收支方程中，排粪能所占比例较大，在41.131%-60.69%之间，代谢能在23.37%－32.73%之间，生长能在6.13%-34.63%之间，排泄能所占的比例最小，低于3％。     

四溴联苯醚对菲律宾蛤仔组织解毒代谢基因表达的影响

菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)样本壳高(2.76±0.18)cm,壳长(4.11±0.22)cm;四溴联苯醚(BDE-47)梯度设置为0.25、6.25μg/L,以海水组为对照,取样测定时间为0、1、3、6、10、15和21 d。结果表明:BDE-47对菲律宾蛤仔鳃丝和消化盲囊AhR、CYP4、GST-pi和Pgp mRNA表达影响显著(P<0.05),而对照组无明显变化。在实验时间内,各处理组鳃丝和消化盲囊AhR基因表达呈峰值变化,分别于第6天、第1天时达到最大值和最小值,然后恢复至对照组水平;各处理组组织CYP4和GST-pi基因表达均呈峰值变化,分别于第3天、第1天达到最小值和最大值,其中消化盲囊CYP4基因表达在3 d后保持稳定,且被显著抑制,而组织GST-pi基因表达则在6d后趋于稳定,0.25、6.25μg/L处理组表现为高于和低于对照组水平;各处理组鳃Pgp基因表达在实验时间内呈峰值变化,分别于第1天、第10天达到最大值,均显著高于对照组水平,而0.25、6.25μg/L处理组消化盲囊Pgp基因表达在21d内分别呈逐渐升高和峰值变化,6 d后表现为被诱导和抑制。由此可见,菲律宾蛤仔在BDE-47胁迫下组织解毒代谢基因表达均被显著诱导或抑制,其中GST-pi基因在低浓度处理组被诱导,高浓度组被抑制,表现出明显的时间效应性,可作为BDE-47污染评价的生物效应指标。     

颗粒浓度对文蛤、硬壳蛤和菲律宾蛤仔保留效率的影响

本研究通过在养殖水体中添加底泥或单胞藻调节悬浮颗粒浓度,研究了悬浮物数量浓度和质量浓度变化对文蛤(Meretrix meretrix)、硬壳蛤(Mercenaria mercenaria)和菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)保留效率的影响。结果显示,文蛤、硬壳蛤及菲律宾蛤仔的保留效率分别在粒径为8、6和6 μm时达到最大值,分别为51.1%、59.6%和62.6%。随着数量浓度的增加,文蛤在低(4.32× 107 cells/L)、中(5.27×107 cells/L)、高(6.65×107 cells/L) 3个数量浓度下保留效率达到最大值时的最小粒径逐渐增大,分别为9、13和14 μm,保留效率最大值分别降至49.7%、33.4%和26.2%;与文蛤相似,菲律宾蛤仔保留效率达到最大值时的最小粒径也分别增大至9、12和14 μm,但最大保留值无明显变化;硬壳蛤保留效率的最大值保持不变,但达到最大值时的最小粒径略有增大,分别为8、9和10 μm。随质量浓度的增加,文蛤和菲律宾蛤仔在低(5.7 mg/L)、中(11.8 mg/L)、高(23.3 mg/L) 3个质量浓度下的保留效率最大值和达到最大值时的最小粒径均无明显变化;硬壳蛤保留效率最大值显著降低,分别为60.7%、27.6%和25.5%,但保留效率达到最大值时的最小粒径保持不变。研究表明,文蛤和菲律宾蛤仔的保留效率对食物颗粒数量浓度变化更敏感,而硬壳蛤的保留效率受质量浓度变化影响较大。     

不同海藻饵料对菲律宾蛤仔生长的影响

<正>菲律宾蛤仔(Ruditapes Philippines)是我国养殖的主要经济贝类之一。菲律宾蛤仔的养殖受饵料影响很大,目前主要采用单胞藻作为养殖菲律宾蛤仔的饵料,湛江等边金藻、球等边金藻、小球藻、盐藻等都是菲律宾蛤仔的最佳饵料。养殖场在繁育和养殖菲律宾蛤仔苗种过程中,需要培育大量单胞藻,培育单胞     

菲律宾蛤仔养殖对底质AVS影响的模拟实验

采用模拟实验方法,研究了菲律宾蛤仔养殖对底质酸挥发硫的影响,分析了酸挥发硫与其他底质环境因子的关系。结果表明,菲律宾蛤仔养殖会增加底质中酸挥发硫的含量,而且酸挥发硫含量随养殖密度增加而升高;与酸挥发硫密切相关的环境因素有底质温度、氧化还原电位（Eh）值、有机物（OM）含量、Fe^3＋／Fe^2＋比值、硫酸盐还原菌（SRB）数量;菲律宾蛤仔的养殖导致沉积物中SEM和AVS的比值小于1,束缚了重金属的生物活性或生物毒性。     

重金属离子对菲律宾蛤仔呼吸代谢的影响

菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）是我国沿海重要的滩涂养殖贝类之一。国外专家学者对滤食性生物耗氧率做过较多的研究,而重金属离子对水生生物影响研究报道较少。本文通过测量耗氧量来探讨不同浓度的Cd^2＋、Cu^2＋、Zn^2＋对菲律宾蛤仔呼吸代谢的影响,旨在为研究水体中重金属污染生物机理和贝类能量学提供依据,所得结果可作为选择蛤仔养殖滩涂底质的重要依据,并有助于养殖过程中科学管理,提高滩涂养殖种类的质量和产量。     

菲律宾蛤仔生理生态学研究 Ⅰ.温度、体重及摄食状态对耗氧率及排氨率的影响

在室内试验条件下研究了温度、体重及摄食状态对菲律宾蛤仔的耗氧率和排氨率的影响。结果显示,菲律宾蛤仔的耗氧率和排氨率与体重呈负相关关系,而与温度呈正相关关系,并符合下列模式, Ｑｏ ＝ ２ ．０１５ Ｗ－ ０ ．６３５（ Ｒ ＝ － ０．９６９, Ｐ ＜ ０ ．０１ ,ｎ ＝ １４） 和Ｑｎ ＝ ０ ．０６９ Ｗ－０ ．３６９（ Ｒ ＝ ０．７５４ ,Ｐ＜ ０ ．０１ ,ｎ ＝ １３）。在摄食状态下,菲律宾蛤仔的耗氧率和排氨率比饥饿状态有大幅度的提高,分别提高了７５ ．３ ％ 和４０３ ．７ ％ ,表明在摄食状态下蛋白质的代谢明显增加     

干露、盐度、温度变化对中华虎头蟹仔蟹的影响

采用单因子分析方法,在生化培养箱中设置5个干露梯度,15个盐度梯度及12个温度梯度,研究干露、盐度、温度变化对中华虎头蟹仔蟹存活及其活力的影响。试验结果表明,不同干露温度梯度下,随着温度的升高,时间的延长,仔蟹爬行、游动、钻沙能力不断减弱;在0、1、2、45、50盐度梯度下,24h后仔蟹成活率、活力下降明显;10～35℃温度梯度下,24h后成活率超过90%,能正常摄食、活动,其他温度试验组,随温度变化,仔蟹活力不断减弱至无法摄食活动。     

菲律宾蛤仔养殖池塘初级生产力的变化及其影响因子研究

为初步了解菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)养殖水体浮游植物初级生产力(PP)的变化规律及其与环境因子的相关性。于2013年8月—2014年1月,采用黑白瓶法对莆田后海垦区2个菲律宾蛤仔养殖池的初级生产力进行逐月采样调查。结果显示,PP平均值分别为(1.17±0.31)g O2/(m2·d)、(0.76±0.21)g O2/(m2·d),夏秋季节显著高于冬季(P0.05);PP与叶绿素a(Chl-a)的变化并不同步,呈先下降后上升趋势;PP与温度、总氮呈极显著正相关(P0.01),与透明度呈极显著负相关(P0.01),与溶氧、氨氮呈显著负相关(P0.05);Chl-a与水温呈显著负相关(P0.05)、与总氮呈极显著负相关(P0.01),与溶氧呈极显著正相关(P0.01),与氨氮、亚硝酸盐呈显著正相关(P0.05)。建立了多个水质因子与Chl-a、PP的相关线性方程,并结合典型相关分析结果。研究表明,透明度、溶氧、营养盐是浮游植物PP的主要影响因子。     

菲律宾蛤仔家系的建立及早期生长发育

采用不平衡巢式设计建立33个菲律宾蛤仔家系(11个父系半同胞家系和33个全同胞家系),并对各家系蛤仔的卵径、受精率、孵化率及生长、存活和变态的相关指标进行了分析。结果表明:各家系蛤仔的卵径、受精率无显著差异(P>0.05,n=90),但孵化率有明显差异(P<0.05,n=90)。在不同时期各家系蛤仔的生长情况不同。幼虫期间,9日龄C2生长最快比生长最慢的F2平均壳长大28.24%,且差异显著(P<0.05,n=90)。D3绝对生长最大比平均值高37.24%。稚贝期间,40日龄I1生长最快比生长最慢的B3平均壳长大78.29%,且差异显著(P<0.05,n=90)。I1绝对生长也最大比平均值高87.61%,其中400～500μm个体占30%,500μm以上个体占53.33%,家系内个体趋于大型化,而B1、B3家系内个体生长性状出现衰退现象,趋于小型化,300μm以下个体分别占整个家系的83.33%、90%。在相同时期各家系蛤仔的存活率不同。幼虫期间,9日龄I2存活率最高比平均存活率高94.14%,E3存活率最低比平均存活率低72.65%。稚贝期间,40日龄时各家系稚贝的存活率较高,都在85%以上。变态期间,同胞...     

β-1,3-葡聚糖对副溶血弧菌感染菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)的存活及两种免疫基因表达影响

本文以菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)为材料,开展了不同浓度β-1,3-葡聚糖对正常菲律宾蛤仔及副溶血弧菌(Viβrio parahaemolyticus)感染后蛤仔的存活率和凝集素基因(Lectin)、Toll样受体2基因(TLR2)的表达研究。结果显示,β-葡聚糖浸泡蛤仔可以有效提高副溶血弧菌感染后蛤仔的存活率,在1000 mg/L浓度下,存活率最高,未感染组的鳃组织中,TLR2在6 h时达到峰值,显著高于其他时间(P0.05)。在感染组中,TLR2呈先升高后降低的趋势,在1.5 h时达到峰值。感染组和未感染组的Lectin表达均为先升高后下降趋势。在3 h时,100 mg/L未感染组的Lectin相对表达量显著高于100 mg/L感染组(P0.05)。在外套膜中,感染组和未感染组TLR2在3~12 h之间表达量逐渐降低。在24 h时,1000 mg/L未感染组表达量最高。感染组Lectin在外套膜中,浓度为1000 mg/L的实验组比100 mg/L实验组各时段都有更高的表达量,但只有0和24 h时差异显著(P0.05)。蛤仔鳃和外套膜Lectin的表达模式不同,但β-葡聚糖的浸泡都促进了Lectin在感染初期的表达。从结果上看,β-葡聚糖的浸泡会增加这2种基因的相对表达,被β-葡聚糖浸泡过的蛤仔被副溶血弧菌感染后,会更为快速地表达TLR2和Lectin。本研究旨在通过不同浸泡浓度β-葡聚糖对蛤仔存活及免疫基因表达的影响,初步了解β-葡聚糖对蛤仔免疫力的作用,为蛤仔亲贝的保种、苗种繁育及池塘养殖的疾病防控提供一定的理论依据。     

菲律宾蛤仔、中国蛤蜊、文蛤和紫石房蛤血细胞的分类研究

采用流式细胞仪对菲律宾蛤仔、中国蛤蜊、文蛤和紫石房蛤4种双壳贝类的血细胞分类进行了比较研究。通过比较4种贝类的前向角散射光(FSC)和侧向角散射光(SSC)双参数点图以及FSC和SSC单参数直方图,发现4种贝类的血细胞均可根据其细胞质中是否有颗粒分为透明细胞和颗粒细胞两种基本类型,中国蛤蜊和紫石房蛤的颗粒细胞又可分为小颗粒细胞和大颗粒细胞两个亚群,菲律宾蛤仔的颗粒细胞又可以区分为小颗粒细胞、中颗粒细胞和大颗粒细胞3个亚群,而文蛤只有颗粒细胞,通过统计分析双参数点图中的各细胞亚群,4种贝类血细胞亚群的含量存在一定差异。     

不同温度下多棘海盘车对菲律宾蛤仔的摄食选择性研究

为了解不同水温环境中(5~25℃)多棘海盘车(4~8 cm)对菲律宾蛤仔(20~40 mm)的摄食选择性,本实验利用饵料收益率、摄食规格选择性、摄食量与摄食率等指数,分析了温度、多棘海盘车规格及饵料规格对多棘海盘车摄食选择性的影响。结果显示,实验条件下,捕食者及被捕食者规格对饵料收益率影响显著,温度对饵料收益率影响不显著;根据饵料收益模型,4种规格多棘海盘车依次在摄食20、23、30和35 mm蛤仔时的饵料收益率最大,收益率分别为0.62、0.70、0.83、0.94 mg/min;5~15℃条件下,摄食量随水温升高而增大,15℃为多棘海盘车摄食蛤仔的最适水温,此时5~8 cm多棘海盘车摄食量均达最大值,分别为0.37、0.45和0.54 g/d,之后随水温升高摄食量减小;摄食率昼夜差异显著,夜间显著高于白天;青岛近海5—6月的水温(13~18℃)为蛤仔春季繁殖的适宜水温,也是多棘海盘车最适生长和摄食温度,此时应加强对多棘海盘车的防治和清除。