马尾松响应松材线虫侵染的基因动态表达变化

松材线虫病是一种严重危害马尾松生长的流行性病害,可导致马尾松枯萎死亡。为揭示该过程中基因的表达变化行为,本研究利用荧光定量PCR技术检测了松材线虫侵染不同天数下的马尾松较其对照样本中病原识别、抗逆调节、次生代谢、解毒作用及生长素响应等相关基因的表达变化。结果显示,除了与病原识别相关的CC-NBS-LRR抗性蛋白基因的表达随侵染天数的增加而增强之外,其他基因则在侵染2d的马尾松样本中的表达水平最高,且明显高于未受侵染的对照马尾松样本,随后在侵染3天的马尾松中的表达又低于对照样本。此外,黄酮-3-羟化酶和细胞色素P450基因的表达随着侵染虫量的增加呈先上调后下调的变化方式。通过本研究初步揭示了马尾松响应松材线虫侵染的基因表达变化模式。     

松树—松材线虫互作中寄主生理生化响应研究进展

松材线虫病是由松材线虫引起的松树毁灭性死亡病害,对我国森林资源及生态环境造成严重破坏和威胁。几十年来,国内外学者针对松材线虫病展开了广泛而深入的研究,其中寄主松树受松材线虫感染后体内生理生化响应是研究热点。本文针对松树—松材线虫互作中寄主体内生理生化响应的研究进行综述。     

松树上松材线虫的镜检观察与分析

为进一步探索松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus Nickle）在松树上的寄生情况和活动规律，笔者于2006年8～9月。在江苏宜兴龙背山、石臼坞、南中村等地的死、活松树上取样，对松材线虫进行镜检观察研究。现将结果报道如下。     

松材线虫产生的分泌物对松树的致病作用

用多毛孢(Pestalotia sp.)培养松材线虫,经过表面消毒后,在Tris-HCl缓冲液中振荡培养,培养液经硫酸铵沉淀、透析、冷冻真空干燥,制成的干样,用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。松材线虫能向体外分泌多种可溶性蛋白,发现有纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、淀粉酶。用松材线虫产生的分泌物、纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、淀粉酶接种3年生黑松(Pinus thunbergii),发现松材线虫产生的分泌物和纤维素酶能够导致松针枯死。这暗示松材线虫的分泌物可能是松材线虫病因之一。     

几种松树挥发物对松材线虫行为的影响

通过室内生测的方法,研究了几种主要的松树挥发物对松材线虫行为的影响.结果表明,α-异松油烯、β-水芹烯、β-蒎烯抑制松材线虫繁殖,其中α-异松油烯、β-水芹烯抑制力较强,β-蒎烯抑制力较弱,而β-月桂烯、反式-石竹烯、莰烯、异长叶烯和α-蒎烯对线虫繁殖没有影响.β-水芹烯和莰烯具有杀松材线虫活性,β-蒎烯和β-月桂烯增强松材线虫活力,而异长叶烯、α-蒎烯、反式-石竹烯对线虫存活没有影响.β-蒎烯、反式-石竹烯、异长叶烯、莰烯对松材线虫具引诱作用,其中β-蒎烯引诱力最强,反式-石竹烯次之,异长叶烯、莰烯引诱力最弱,而α-蒎烯、β-水芹烯、α-异松油烯和β-月桂烯对线虫无引诱作用.并对几种挥发物在松树抗松材线虫病中的作用进行了讨论.     

松材线虫侵染对马尾松抗氧化系统的影响

为揭示松材线虫病对马尾松抗氧化系统的影响,探讨了松材线虫侵染的马尾松针叶中的脯氨酸含量、抗氧化酶活力及相关基因表达的变化规律.结果显示:松材线虫侵染导致马尾松针叶中的脯氨酸含量显著降低,超氧化物歧化酶、铜锌超氧化物歧化酶和过氧化物酶活力显著下降,同时富含脯氨酸的阿拉伯半乳聚糖蛋白和过氧化物酶的编码基因也下调表达;随着侵染虫量的增加,过氧化物酶基因在马尾松针叶中的表达增强,而在茎干、枝条中的表达减弱,导致抗氧化酶活力下降,马尾松的抗病防御能力减弱.研究结果初步揭示了松材线虫侵染致使马尾松最终枯萎死亡过程中抗氧化系统的变化,为林业生产上制定防控松材线虫病害的相应策略提供理论基础.     

松材线虫及携带细菌对黑松复合的侵染

从不同松树上分离松材线虫、拟松材线虫、滑刃线虫和小杆线虫,并从松材线虫和小杆线虫体上分离细菌,将线虫无菌化处理后与从线虫体上分离到的荧光假单胞杆菌、产气肠杆菌混合接种无菌黑松苗和愈伤组织。结果表明,单独接种无菌线虫或细菌不能使黑松致病,无菌松材线虫、无菌拟松材线虫只有与有毒性的荧光假单胞杆菌混合接种时才能使黑松无菌苗和愈伤组织发病,细菌通过线虫携带在树体内传播扩散,使松树致病。研究进一步证明了线虫和细菌在松材线虫病致病过程中起协同作用。     

松材线虫侵染对日本落叶松生理指标的影响

通过测定光合色素含量、渗透调节物质、苯丙氨酸解氨酶和抗氧化酶系统的动态变化,从生理生化角度探究日本落叶松对松材线虫侵染的响应规律。以3年生日本落叶松盆栽苗为实验材料,采用人工皮接法接入2000条松材线虫,于接种后第0、5、10、20、30天时收集并测定针叶内叶绿素含量、可溶性蛋白含量、抗氧化酶[超氧化物歧化酶 （SOD）、过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）]活性和苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性等指标。结果表明：日本落叶松接种点上部和下部均检测到大量松材线虫,且下部线虫数极显著高于上部（P<0.01）。叶绿素a、b含量均在第10天时出现明显下降,随后开始上升,与对照组无显著差异。可溶性蛋白含量在接种10 d后开始逐渐上升,且显著高于对照组（P<0.05）。接种松材线虫后,SOD活性显著上升,各时间点均极显著高于对照组（P<0.01）;CAT活性先小幅下降,后逐渐升高,于30 d时极显著高于对照组（P<0.01）;POD活性表现为先降低后升高,且5 d后迅速升高,各时间点都显著高于对照组（P<0.05）。PAL活性呈现先升高后降低的变化规律,接种后10、20 d活性都显著高于对照组（P<0.05）。日本落叶松被松材线虫侵染后,叶绿素含量、可溶性蛋白含量、抗氧化酶和PAL活性变化与其抗病性存在密切关系,研究结果可以为日本落叶松对松材线虫抗性品系筛选和抗病机理提供参考。     

人工接种后次代抗松材线虫松树的抗病性

为了解抗病松树后代对松树线虫的抗性，采用人工接种松树线虫，相隔一定时间调查其枯死情况，用3％酸性染料染色研究了抗性松与普通松水分输导情况，线虫的数量，结果表明，普通黑松3个月后枯死率为91．1％，次代抗性赤松枯死率为4．46％，除中央髓部的水分输导受影响外周边木质部和形成层未受影响；次代抗性黑松除两株水分严重受阻外，其他与赤松相似，接种线虫1周后从次代抗性松树上分离线虫最多，以后逐渐下降，5周后则很少。     

分析几种松树挥发物对松材线虫行为的影响

本文主要是通过室内生测的方式,有效研究了几种不同类型的松树挥发物质对松材线虫的行为所产生的影响,通过α-异松、反式-石竹烯等几种物质进行了研究和分析,并且得出了各种不同的实验结论,以下针对该实验方法进行了重点的阐述。     

松材线虫

松材线虫是松树上的一种毁灭性病害，在日本和中国部分地区已经造成了巨大的经济损失，本文仅就此材线虫的生活史，寄主范围，传播途径及媒介昆虫等作了较为系统的介绍，并就检疫措施，防治对策提出了具体的见解和意见。     

松材线虫伴生细菌与松树萎蔫病关系的初步研究

利用3年生黑松苗作接种材料,分别接种消毒后的松材线虫和从线虫体内分离得到的细菌分离物以及线虫与细菌两者的混合物,调查比较发病情况。结果表明,单独接种消毒后的细菌分离物,松树不萎蔫,单独接种松材线虫松树发病枯死,而接种松材线虫和细菌分离物两者的混合物,松树发病更为严重。由此说明松材线虫的伴生细菌对松树萎蔫病的发生有一定作用,但并不是导致松树发病枯死的决定因素。     

松材线虫两种实用分子检测技术

为检验已开发的SCAR标记与实时PCR两种分子检测方法鉴定松材线虫的可靠性,本文选用线虫未知种样品7个以及已知种样品3个为实验材料,采用上述两种分子检测方法进行检测,并且对7个线虫未知种样品进行形态鉴定。结果表明：1）运用SCAR标记检测,第2、3、4、7号4个未知种样品与8号松材线虫样品出现了一条清晰、明亮的860b...     

松材线虫侵染后马尾松几种生化物质质量分数的变化

以2年生马尾松(Pinus massoniana)盆栽苗为研究对象,对接种松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)AMA3虫株后马尾松营养物质(可溶性蛋白、可溶性糖和总糖)、次级代谢产物(总酚和黄酮)以及有机酸(苯甲酸和水杨酸)质量分数进行测定。结果表明：接种松材线虫后,马尾松茎干可溶性蛋白的质量分数呈现先升高后降低再升高的趋势,接种松材线虫后1.0 d,可溶性蛋白的质量分数显著高于对照组(P<0.05),在4.0～10.0 d均低于对照组;马尾松茎干可溶性糖的质量分数总体上呈现较低水平;马尾松茎干总糖和总酚的质量分数均呈现先升高后降低的趋势,总糖的质量分数在0.5 d达到峰值,而总酚的质量分数在4 d达到峰值,随后下降。马尾松茎干黄酮、苯甲酸和水杨酸的质量分数总体上呈现较高水平,且在7 d达到峰值,随后下降。因此,松材线虫的侵染对松树体内营养物质、次级代谢产物及有机酸的质量分数均有影响,其中,马尾松苗茎干苯甲酸和水杨酸的质量分数对病害的早期诊断具有潜在应用价值。     

绩溪县松材线虫疫区大面积枯死松树清理方法及对策建议

近2年来,南方各省松毛虫大暴发,造成大面积松树枯死,松褐天牛数量急剧增多,造成松材线虫病蔓延,因此快速、及时清理枯死松树十分重要.该文以安徽绩溪县为例,介绍了枯死松树清理技术要点,以期为松材线虫疫区大面积枯死松树的清理提供参考.     

四川松材线虫与拟松材线虫的PCR-RFLP鉴别

应用PCR-RFLP技术对来自四川省8个地方的枯死松树样品中的伞滑刃属线虫(Bursaphelenchus)群体进行了分子鉴定。结果显示来自邻水、雅安的枯死松树样本中含有松材线虫(B.xylophilus),而来自大竹和遂宁的枯死松树样本中含有拟松材线虫(B.mucronatus)。其他伞滑刃属线虫包括莱鲁尔夫伞滑刃线虫(B.rainulf)、霍夫曼伞滑刃线虫(B.hofumanni)、泰国伞滑刃线虫(B.thailandae)、变异伞滑刃线虫(B.aberrans)。本研究中选用的4种限制性内切酶(DraⅠ、SalⅠ、HhaⅠ、AluⅠ)除SalⅠ外均可对所鉴定的这6种伞滑刃属线虫产生特异性的酶切位点,从而可均有效地鉴别出松材线虫、拟松材线虫和其他4种伞滑刃属线虫,其结果可为今后这几种伞滑刃属线虫的分子鉴定提供一定的参照。     

松材线虫研究进展

松材线虫是我国森林的重要有害生物，也是许多国家重要的林木检疫对象。本文就松材线虫的发生发展规律、致病性及不同树种对松材线虫的抗性问题作一些讨论，同时介绍一些研究松材线虫的新手段、新技术。     

松材线虫研究进展

松材线虫是我国森林的重要有害生物,也是许多国家重要的林木检疫对象.本文就松材线虫的发生发展规律、致病性及不同树种对松材线虫的抗性问题作一些讨论,同时介绍一些研究松材线虫的新手段、新技术.     

松材线虫染病松树上钻蛀性昆虫生态位的研究

2003年11月和2004年6月,在松材线虫病典型发生区浙江省舟山市调查了马尾松上的钻蛀性害虫的种类和分布位置,分析了罹病木上的优势虫种的生态位宽度、生态位相似性、生态位重叠值.结果表明,在感染松材线虫病的松树上共发现5种昆虫,其中钻蛀类害虫4种,白蚁1种;在冬季和夏季生活于松树主干上的昆虫种类不尽相同,而且具有各自不同的生态位宽度,存在不同程度的生态位重叠,对空间和营养资源的利用有不同比例的相似性,依据其各自生物学特性和生活习性的不同达到竞争的平衡和共存.      

松材线虫和拟松材线虫的PCR快速检测

利用PCR技术对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus与拟松材线虫B．mucronatus的rDNA的ITS1区和5．8S区核甘酸序列扩增．根据松材线虫与拟松材线虫的ITS1序列区别,分别设计出松材线虫和拟松材线虫的特异性引物,实现了单条活的或FG(φ为4％的甲醛)固定的松材线虫和拟松材线虫的快速检测．