副猪嗜血杆菌抗原性研究进展

副猪嗜血杆菌是猪格拉瑟氏病的病原,主要引起SPF猪和断奶前后仔猪的纤维素性多发性浆膜炎、多发性关节炎和脑膜炎等。其抗原主要有荚膜、脂多糖和外膜蛋白等,不是所有的菌株都存在荚膜抗原,外膜蛋白抗原是刺激机体产生体液免疫的主要抗原,菌株抗原性的高低与毒力的强弱呈正相关,副猪嗜血杆菌的毒力因子至今仍不清楚,推测其荚膜、外膜蛋白、菌体细胞膜表面的自动传输三聚体蛋白等与副猪嗜血杆菌的毒力有关。至今已经定型的副猪嗜血杆菌有15个血清型,还有约30%为未定型的菌株,其中血清5型副猪嗜血杆菌为强毒力代表菌株,常作为研究副猪嗜血杆菌抗原性的代表菌株。副猪嗜血杆菌抗原性的深入研究必将为新型、高效疫苗的研究奠定坚实的基础。     

副猪嗜血杆菌ompP2基因的克隆鉴定及序列分析

用PCR技术对华南地区分离的17株不同血清型副猪嗜血杆菌菌株ompP2基因进行克隆鉴定,并以CLUSTALS1和PHYLIP-3.68软件将ompP2基因序列进行比对和遗传进化分析.17株副猪嗜血杆菌茵株中均能扩出ompP2基因,克隆测序结果发现ompP2基因大小有所不同,与参考序列ABKM01000007的同源性在92％～99％之间.序列比较结果显示,ompP2基因与GenBank公布的副猪嗜血杆茵全基因组测序中的ompP2基因序列具有较高的同源性,不同菌株ompP2基因序列大小存在差异,为进一步验证ompP2蛋白的功能及相关研究奠定了基础.     

副猪嗜血杆菌毒力因子的研究现状

副猪嗜血杆菌病是近年来严重危害我国养猪业发展的新发细菌性传染病,我们对其毒力因子的了解却很少。为了更加全面地认识该病原体,作者对副猪嗜血杆菌各种因素与菌株毒力的关系做了简要的介绍。其中重点介绍了血清型与毒力的关系,较为全面地概述了巴氏杆菌科毒力相关因子荚膜、菌毛、脂多糖、外膜蛋白以及酶类与副猪嗜血杆菌毒力的关系,并认为神经氨酸酶是副猪嗜血杆菌重要毒力因子。副猪嗜血杆菌的毒力因子的研究是副猪嗜血杆菌病研究的一个重要方向。     

血清6型副猪嗜血杆菌的分离鉴定和生物学特性研究

为了明确河南地区血清6型副猪嗜血杆菌流行菌株的生物学特性,试验从发病猪的肺脏、心血、关节液等病料中分离、纯化副猪嗜血杆菌,并对分离纯化的副猪嗜血杆菌进行PCR鉴定,同时进行血清型分型、致病性试验、毒力基因检测和药敏试验。结果表明：从肺脏中分离得到一株血清6型副猪嗜血杆菌,该菌株携带有vta1、vta2、vta3、wza、ompP2、nanH、cdtA、cdtC、espP2 9种主要毒力基因;对保育仔猪表现出轻微的致病性;对头孢噻呋、头孢他啶、阿莫西林等16种抗生素敏感,对氨苄西林、青霉素G、卡那霉素等8种抗生素耐药。说明分离得到的血清6型副猪嗜血杆菌毒力较弱,对大多数药物敏感。     

河南省平顶山地区副猪嗜血杆菌分离鉴定和外膜蛋白P5基因序列分析

为了解河南省平顶山地区副猪嗜血杆菌流行的血清型、菌株耐药性及其外膜蛋白ompP5基因的变异情况,采集疑似副猪嗜血杆菌病猪病料进行细菌分离鉴定、血清型鉴定、药敏试验和动物试验;测定5株不同血清型菌株的ompP5基因序列,分析其同源性。结果:分离鉴定了42株副猪嗜血杆菌,主要血清型为1(38.1%)、4(19.0%)、5(26.2%)、12(11.9%)和未定型(4.8%)。药敏试验显示菌株对磺胺甲氧嘧啶、磺胺-6-甲氧嘧啶和头孢喹肟耐药性较强,耐药率分别为85.7%、83.3%和64.3%,对氟苯尼考和青霉素高度敏感。基因序列分析显示菌株ompP5基因序列与其血清型、致病性无明显相关性。该研究为平顶山地区副猪嗜血杆菌病的防控提供了一定的理论依据。     

副猪嗜血杆菌潜在毒力因子研究进展

<正>副猪嗜血杆菌是引起猪格氏病的病原,多继发感染引起全身性疾病,其高发病率和死亡率给养殖业造成严重损失。本文主要对副猪嗜血杆菌的外膜蛋白、荚膜多糖、、菌毛、转铁结合蛋白、酶类和毒素等主要毒力因子的相关研究进展进行了综述。副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,Hps)是常规猪群上呼吸道的一种条件性致病菌,在某些因素的条件下,可突破黏膜屏障,从而引起严重的全身性感染,以纤维     

副猪嗜血杆菌ompP2基因在猪肺泡巨噬细胞中的表达

为了进一步研究副猪嗜血杆菌(HPS)ompP2基因的功能,根据已发表的副猪嗜血杆菌核苷酸序列,设计并合成1对引物,PCR扩增HPS LZ株外膜蛋白ompP2基因,获得大小为1 158bp的核苷酸片段,该片段纯化后克隆至pEASY-Blunt载体,转化后鉴定,再与真核表达质粒pCI-neo经过酶切和连接反应,转化感受态大肠杆菌Trans-T1,双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒并测序。通过脂质体法将pCI-neoompP2转染猪肺泡巨噬细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测重组质粒是否表达。结果显示,成功构建了含ompP2基因的副猪嗜血杆菌真核表达载体pCI-neo-ompP2,提取转染该质粒的猪肺泡巨噬细胞的mRNA,进行RT-PCR扩增,在1 000bp~2 000bp之间可见1条明显的条带。Western blot发现在42ku处出现目的条带。试验结果为后期研究副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞的机理奠定了基础。     

副猪嗜血杆菌主要毒力因子和致病机理的研究进展

副猪嗜血杆菌病又称革拉斯氏病(Glasser’s disease),引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜脑炎,是近年来严重危害养猪业的细菌性传染病,呈世界性分布,并已证实在中国绝大多数猪场存在和流行。副猪嗜血杆菌的血清型众多,不同血清型的副猪嗜血杆菌毒力差异很大,对其毒力因子了解很少,对其主要的致病机理更是知之甚少,现已发现该病原可能的毒力相关因子有荚膜、菌毛、脂多糖、外膜蛋白及酶类等。笔者对这些毒力因子及该病的致病机理进行综述,以期为该病的防控提供科学依据。     

副猪嗜血杆菌毒力因子的研究进展

副猪嗜血杆菌是猪上呼吸道的一种常在条件性致病菌,以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为主要特征,该菌引起的革拉氏病流行和危害日渐严重,严重危害了仔猪和青年猪的健康。本文对副猪嗜血杆菌的主要毒力因子包括荚膜多糖、脂多糖、脂寡糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白、神经氨酸酶、生物被摸、cAMP依赖性自然转化系统和毒力相关活性酶进行了综述,对新技术运用于其毒力因子的研究作了简要介绍,并对今后的相关研究提出展望。     

副猪嗜血杆菌comC基因遗传进化及其与菌株血清型和潜在毒力基因的相关性分析

为探索副猪嗜血杆菌菌株分类与其临床致病力之间的关系,研究对2009—2017年分离的148个菌株进行comC基因测序以及遗传进化分析,同时探讨部分潜在毒力基因、血清型以及临床致病力等与基于comC基因的菌株遗传进化的相关性。基于comC基因的进化树分析显示,副猪嗜血杆菌形成2个相对独立的分支,在分支Ⅰ中又形成2个亚群Ⅰ-A和Ⅰ-B。4个潜在毒力基因在comC进化树各分支中的分布模式具有明显差异,Ⅰ-A分支中hsdS、hsdR及ompP2基因检出频率较高,而fhuA基因检出频率较低;Ⅰ-B分支中fhuA及ompP2检出频率较高,而hsdS、hsdR检出频率较低;分支Ⅱ中只有ompP2检出频率较高,fhuA、hsdS和hsdR的检出频率都较低。血清型分布在各分支中也有明显差别,血清4,5,12,13,14型主要分布于分支Ⅰ中;而血清1,2,7型主要分布于分支Ⅱ中。系统感染分离菌株在3个分支中分布较均匀,但93.8%的心包液分离菌株位于分支Ⅰ中,且主要位于Ⅰ-A分支。因此,comC进化树各分支中潜在毒力基因和血清型的分布有明显差异,表明基于comC基因的遗传进化分析对副猪嗜血杆菌临床分离株具有良好的区分效果,但系统感染分离株与基于comC基因的遗传进化没有明显的相关性。本研究为探索副猪嗜血杆菌的分类方法及其与致病力的关系提供新的信息。     

副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白研究进展

副猪嗜血杆菌是猪革拉泽氏病的病原体,该病是近年来严重危害养猪业的细菌性传染病之一,呈世界性分布。副猪嗜血杆菌相关致病性毒力因子的研究目前很少,关于转铁结合蛋白更是鲜为人知。在此对副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白的结构、形成机制、影响因素及其免疫原性进行综述,对阐明致病菌的慢性感染机理有一定的生物学意义。     

副猪嗜血杆菌病疫苗研究进展

副猪嗜血杆菌病又称猪革拉泽氏病,副猪嗜血杆菌主要引起猪的多发性浆膜炎、纤维素性心包炎、关节炎和脑膜炎。目前预防该病主要是灭活疫苗,但不同血清型之间交叉保护性不强或无交叉保护作用。因此,发展新的广谱疫苗是未来的趋势。文章对副猪嗜血杆菌病的疫苗及其研究现状进行了分析综述。     

副猪嗜血杆菌的分型技术研究进展

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)是猪的一种条件致病性病原菌。近年来世界各地副猪嗜血杆菌病的发生呈显著上升趋势,猪只感染后表现为多发性浆膜炎和关节炎,给养猪业造成巨大的经济损失。随着分子生物学技术的发展,用于副猪嗜血杆菌分型鉴定的方法亦越来越多。本文就目前国内外常用的技术方法作一综述,以期为该病的流行病学调查、兽医临床诊断与治疗提供参考。     

Purification and renaturation of membrane neuraminidase from Haemophilus parasuis

Haemophilus parasuis, which causes polyserositis, polysynovitis, meningitis, septicemia, and pneumonia in pigs, has emerged as an increasing problem in modern swine production systems. Co-factors for and the pathogenesis of H. parasuis disease are not defined. One of the potential virulence factors of H. parasuis is its neuraminidase (sialidase). While purifying the H. parasuis neuraminidase from the membrane fraction, we developed a protocol to renature enzymatic activity after enzyme preparations were resolved electrophorectically in denaturing polyacrylamide gels. The H. parasuis neuraminidase co-resolved with recombinant neuraminidase of Vibrio cholera; thus its apparent molecular mass is 82 kilodalton (kDa). The H. parasuis neuraminidase was associated with the membrane fraction and the purification protocol removed over 99% of the H. parasuis cell protein while retaining over 90% of the neuraminidase activity. Purified protein will provide another avenue to clone the neuraminidase gene that has been refractory to cloning and the protocol will be a means to purify recombinant protein.     

Comparative virulence of Haemophilus parasuis serovars 1 to 7 in guinea pigs.

Reference strains for Haemophilus parasuis serovars 1 to 7 were examined for virulence by inoculation of guinea pigs. Guinea pig response to intraperitoneal inoculation was similar for the 7 reference strains. However, apparent differences in virulence were detected after intratracheal inoculation. Cells of the references strains for serovars 1 and 5 were most invasive, causing moribundity or death at higher doses and a persistent septicemia at lower doses. Haemophilus parasuis could be isolated from respiratory and systemic sites; purulent bronchopneumonia, pericarditis, and pleuritis were apparent in infected guinea pigs. Inoculation of cells of the reference strains for serovars 2 and 6 also resulted in bronchopneumonia and moribundity or death in some guinea pigs; however, reisolation of H parasuis and microscopic lesions at necropsy were less pronounced than those observed with serovars 1 and 5. Inoculation of cells of serovars 3, 4 and 7 induced only transient clinical signs and minimal evidence of H parasuis infection at necropsy. The data from intratracheal inoculation of guinea pigs are similar to data from other investigations in swine, indicating differences in the pathogenic potential of H parasuis strains. Thus, guinea pigs may be useful as a laboratory animal model for examining cellular factors associated with virulence and immunogenicity of H parasuis.     

Haemophilus parasuis exhibits IgA protease activity but lacks homologs of the IgA protease genes of Haemophilus influenzae

Haemophilus parasuis, the bacterium responsible for Gl?sser's disease, is a pathogen of significant concern in modern high-health swine production systems but there is little information regarding the identity or function of its virulence factors. Several important human mucosal pathogens, including the closely related bacterium Haemophilus influenzae, utilize IgA proteases to aid in defeating the host immune response and facilitate disease but it is unknown whether H. parasuis synthesizes any product with IgA protease activity. To investigate potential virulence mechanisms of H. parasuis, we evaluated five strains for their ability to digest purified IgA. Western blotting demonstrated cleavage of swine IgA, but not human IgA1, following incubation with culture supernatants from three strains, two of which are known to cause invasive disease. No genes with homology to the H. influenzae IgA protease genes iga and igaB could be identified in any H. parasuis strain using either PCR or Southern blotting. These results demonstrate that a novel IgA protease produced by some strains of H. parasuis cleaves the swine IgA heavy chain at a site not found in human IgA1.     

Update on the diagnosis of Haemophilus parasuis infection in pigs and novel genotyping methods

Haemophilus parasuis causes Gl?sser's disease as well as a number of other diseases in pigs. The diagnosis of H. parasuis-associated disease is usually established by clinical signs, pathological findings and bacterial isolation but diagnosis is complicated by the existence of non-virulent strains and the early colonisation of the upper respiratory tract of healthy piglets. Moreover, several strains can be found on a farm and even within a single animal so it is important to determine the specific strain that is causing the clinical outbreak. Recently, genotyping methods have been developed with the goal of correlating genotype with the degree of virulence of H. parasuis strains. The association between genotype and virulence in H. parasuis is challenging due to the lack of knowledge of the complete genomic sequence and virulence factors of this bacterium.     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

2011年从辽宁省采集以多发性纤维素性浆膜炎为主要特征的病猪肺脏、心包液、血液等病料,通过分离培养、生化试验和PCR检测等方法确认分离到1株副猪嗜血杆菌Hps LN111013,同时应用多种药物对该菌株进行了药物敏感性试验及分析;结果表明该菌株在形态、培养特性和生化试验等方面与国内其他地区所分离到的菌株基本一致,纸片法药敏试验证明本菌对氟苯尼考、头孢噻呋、洛美沙星最为敏感。本研究为进一步确认辽宁省副猪嗜血杆菌流行菌株的血清型和基因型,查明其传染来源和遗传变异情况奠定了基础,为制定辽宁省副猪嗜血杆菌病防控措施提供依据。     

副猪嗜血杆菌tbpB基因的PCR-RFLP分型

本研究应用生物学软件Vector NTI对副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)的转铁结合蛋白tbpB进行基因分型研究,通过选择AluⅠ、AvaⅡ和RsaⅠ3种限制性内切酶对15株Hps标准株和12株分离株的tbpB基因进行RFLP分析。经过生物学软件Vector NTI精确分型,标准株得到了11个基因型,其中基因型Ⅰ(AAA)包括血清型1、3和15,Ⅱ(BBB)包括血清型2、9和11;分离株的分型产生了10种基因型,其中6种为新的基因型。这一结果证实了Hps流行株的多样性,说明该方法对于猪革拉泽氏病流行病学规律的研究具有实用意义,同时,需要对更多的分离株做进一步的研究。