枇杷属植物ISSR反应体系的建立和优化

首次通过正交实验,对影响枇杷属植物ISSR反应较大的Mg2+、Taq酶、dNTPs、引物、模板DNA浓度进行筛选,并对扩增反应程序进行优化。优化后的反应体系为:25μL反应体系中,含10×buffer2.5μL,Mg2+浓度2.0mmol·L-1,Taq酶1.5U,引物0.3μmol·L-1,模板DNA60ng,dNTPs0.15mmol·L-1。反应程序为94℃预变性5mim;94℃变性1mim,退火温度70s,72℃延伸1.5mim,40次循环;72℃延伸7mim,4℃保存。     

枇杷SSR反应体系的建立及优化

为探索适宜枇杷的SSR反应体系,利用正交设计对Mg2＋、dNTPs、引物、Taq酶和模板DNA等5种因素4个水平进行筛选和优化。结果表明：20uL反应体系中,Mg2＋、dNTPs和引物的最适浓度分别为1．5mmol．L-1、0．15mmol·L-1、0．2umol·L-1,Taq酶最适用量为1U,模板DNA最适用量为20ng;引物的最佳退火温度为51．0～60．0℃。利用该反应体系对17份枇杷种质进行扩增,电泳结果显示,不同品种间DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠。     

菊花SSR-PCR反应体系的建立和优化

为快速确定菊花SSR反应体系,利用正交实验设计L16(45)对菊花基因组SSR-PCR反应体系的5个因素(模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和Taq酶)在4个水平上进行正交设计,筛选出适合菊花的最佳SSR-PCR反应体系,进一步利用单因素完全随机试验筛选各反应因素的最佳水平。结果表明:建立菊花基因组DNA SSR-PCR反应体系为25μL:60ng模板DNA、2.0mmol/L Mg2+、0.1mmol/L dNTP、0.3μmol/L引物、1UTaq酶。并对菊花引物进行梯度退火试验,其最佳退火温度在53.1℃;扩增程序是:95℃预变性5min;32个循环的94℃变性50s、53.1℃退火50s、72℃延伸50s;72℃延伸8min,4℃保存。该体系的建立为今后菊花SSR分析奠定了基础。     

国兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化

采用正交设计与单因素结合法,对国兰ISSR-PCR反应体系中的4个因素(dNTPs、引物浓度、Mg2+、Taq DNA聚合酶)进行优化试验,结果用DPS软件进行分析.结果表明:各因素对PCR结果均有显著影响,其中Taq DNA聚合酶对反应的影响最大;筛选出了各反应因素的最佳水平,建立国兰ISSR-PCR的最佳反应体系(25μL)为:dNTPs 0.2mmol/L、引物1.0 μmol/L、Mg2+2.5 mmol/L、Taq DNA聚合酶1U.     

大葱ISSR反应体系的建立及优化

以大葱嫩叶为试材,采用单因素试验和正交实验探讨了Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、模板DNA以及Buffer用量对大葱ISSR-PCR扩增的影响,建立了大葱ISSR反应体系。结果表明:优化后的最佳反应体系为10μL反应体系中,10×Buffer缓冲液1.0μL,Mg~(2+)浓度为2.0mmol·L~(-1),dNTPs浓度为0.3mmol·L~(-1),引物浓度为0.65μmol·L~(-1),Taq酶1.0U,模板DNA为60ng,用灭菌的超纯水补齐体积至10μL。对大葱71份样品材料进行ISSR-PCR扩增体系的检测结果显示,该优化体系扩增的产物条带清晰,稳定性高,为大葱种质ISSR分子标记遗传结构分析提供参考依据。     

多倍体枇杷SCoT分析体系的建立与优化

以软条白沙枇杷三倍体株系为试材,采用L25(56)正交设计方法,对影响枇杷ScoT-PCR反应的Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶及模板DNA用量等因素进行优化筛选,并对最适退火温度进行了探讨.建立了适于不同倍性枇杷分析的ScoT-PCR扩增体系,即20μL的优化体系中含有:Mg2+15mmo1·L-1,...     

酸枣SSR-PCR反应体系优化

以3个酸枣品系LW1、LW2、LW23为试材,以大枣品种"三星"为对照,采用L16(45)正交实验设计,研究了酸枣SSR-PCR的反应体系,以期为酸枣SSR分子标记研究提供参考依据。结果表明:酸枣SSR-PCR的最佳反应体系为,总体系为20μL,DNA模板量100ng、引物浓度0.5μmol·L~(-1)、Mg2+浓度1.25mmol·L~(-1)、Taq聚合酶量1.5U、dNTPs浓度0.3mmol·L~(-1)。利用该体系,选择引物JSSR250对53个酸枣品系和8个大枣品种的DNA进行扩增,酸枣的扩增产物在140~180bp,具7个等位基因,目标条带清晰,多态性良好。该体系能够应用于酸枣SSR分子标记研究。     

玉树地区独一味ISSR-PCR反应体系的建立与优化

为了建立玉树地区独一味的简单重复序列区间聚合酶链式反应(ISSR-PCR)体系并筛选出引物,采用M2+、DNA Taq酶、dNTP、模板DNA和引物进行5因素4水平正交实验,对独一味ISSR-PCR反应体系进行筛选.结果表明:最佳反应体系(25μL)为:10×PCR Buffer,75 ng模板DNA,0.75 μmol/L引物,0.5 UTaq DNA聚合酶,1.25 mmol/L MgCl2,0.05 mmol/LdNTP.然后确定了引物的最佳退火温度,并筛选出811、818、825、826、834、835、836、840这8条丰富多态稳定扩增的引物.该研究建立的玉树地区独一味ISSR反应体系具有稳定、清晰以及重复性好等特点,可为该区独一味的繁育系统和遗传多样性的进一步研究提供参考.     

番茄SRAP-PCR反应体系建立与优化

利用正交实验设计L16(45)对番茄SRAP-PCR反应体系的5个因素(Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶和模板DNA)在4个水平上进行优化试验研究。结果表明:各因素水平变化对反应体系影响的大小依次为:Mg2+dNTPs引物Taq DNA聚合酶模板DNA;建立的番茄SRAP-PCR最佳体系(25μL)为:Mg2+2.5mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5U、dNTPs0.25mmol/L、引物0.4μmol/L、模板DNA 80ng。     

鸭梨Hc ISSR-PCR反应体系的优化

应用正交设计的方法对影响鸭梨Hc ISSR-PCR反应的4个因素(模板DNA、引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶)进行5个水平的优化试验,以DPS 7.55软件分析。结果表明:鸭梨HcISSR-PCR的最佳反应体系(20μL)为:模板DNA 60 ng、引物浓度0.4μmol/L、dNTPs浓度0.1mmol/L、TaqDNA聚合酶2 U。     

枇杷属植物基因组DNA提取方法的改进及其应用

以枇杷属的普通枇杷和多种野生枇杷的叶片为材料,对枇杷的DNA提取进行了研究。针对枇杷富含多酚类 等次生物质的特点对枇杷DNA的提取步骤进行了改良处理:采用CTAB-蛋白酶K法加重复抽提,去除枇杷材料中 的相关次生物质,获得了高质量的DNA。所提取的DNA完全能满足PCR、RAPD、AFLP等一些分子生物学实验要 求。     

NaHSO_3对枇杷和毛叶枣叶片光合速率的促进作用

研究了不同浓度的NaHSO3及其与KCl和6-BA配合施用后对田间枇杷和毛叶枣离体叶片光合作用的影响。结果表明:低浓度(2～8mmol/L)的NaHSO3对光合速率有促进作用,作用效果长达6d;高浓度(16mmol/L)的NaHSO3对光合速率促进作用不明显。NaHSO3配合1mmol/LKCl和5mmol/L6-BA施用,对光合速率的促进效果更明显。     

阴雨对‘大五星’枇杷柱头可授性和花粉活力的影响

以‘大五星’枇杷为试材,研究了阴雨天气对枇杷柱头可授性和花粉活力的影响。结果表明:阴雨天气的持续均可以使枇杷柱头可授性和花粉活力不同程度地降低,降低授粉效率,对枇杷生产均有负面影响。此外柱头可授性检测表明,‘大五星’枇杷柱头可授期为开花当天至花后第5天,在此期任何一天只要天气晴朗,柱头随即恢复并具有较强的可授性,此特性可以一定程度地减少阴雨天气带来的负面影响。     

枇杷种质资源种子性状研究

对国内外128份枇杷种质资源的3个测量性状（种子数、种子重、种子瘪粒数）和5个描述性状（种子形状、种皮颜色、种子斑点、种子基套大小和种皮开裂）进行了鉴定评价。结果表明：枇杷种质资源的种子测量性状表现出较丰富的多样性,集中表现为：种子数2～4粒,种子重1～3g,瘪粒较少;种子描述性状则较多地表现为三角体形、浅褐色、斑点少、基套小、不开裂。和云南枇杷种质资源相比,福建枇杷种质资源的种子个体较大,数量较多,出现瘪粒概率较大,种子形状、种皮颜色、种子斑点、种子基套大小和种皮开裂的分布表现较集中,这可能是枇杷种质资源种子性状的进化趋势,表明云南枇杷种质资源的遗传多样性更为丰富。此外,还就枇杷种质资源种子数和种子重的分级标准进行探讨,为今后更科学地开展枇杷种质资源的鉴定评价和利用提供理论依据。     

红沙枇杷‘大红袍’与白沙枇杷‘宁海白’糖积累及代谢的差异

以白沙枇杷品种‘宁海白’和红沙枇杷品种‘大红袍’为试材,分析了果实发育进程中果实糖含量、蔗糖与山梨醇代谢关键酶活性的变化。结果表明,两个品种的果实发育与糖积累进程基本相似,蔗糖含量在整个果实发育过程中变化不大,山梨醇含量随果实发育呈下降趋势,果糖与葡萄糖是这两个品种积累的主要糖,90%左右的果糖与葡萄糖是在成熟前3周内积累的;两个品种间果糖含量差异较大,‘宁海白’的果糖含量比‘大红袍’高约 1/3,而葡萄糖含量仅高8%。转化酶、SS分解活性和SDH的变化趋势基本类似,都是幼果期较高,此后随果实的发育呈下降趋势,到果实发育后期又转为上升直至成熟;SS合成活性和SPS活性变化与前面几个酶的变化趋势不同之处是成熟时的活性又有所下降。‘宁海白’的转化酶、SS分解活性均高于‘大红袍’,特别是果实发育后期的酸性转化酶活性远高于‘大红袍’,而SDH活性是‘大红袍’略高于‘宁海白’。以上结果表明,枇杷品种间糖含量的差异与其代谢酶的活性水平有关。     

云南、贵州部分野生枇杷种质资源花序性状观察

对保存于国家果树种质福州枇杷圃备份圃的来源于云南、贵州的30份野生枇杷种质花序性状进行观察,结果表明：（1）各种质的花序长度、花序宽度、花序支轴数、花序花朵数、花冠直径的次数分布存在差异,两两间均表现为极显著正相关,变异系数22．7％～85．1％;（2）花序形状、花序支轴姿态、花序支轴紧密度和花瓣颜色等4个描述性状也表现丰富的多样性;（3）112号野生枇杷花瓣表现特异,其花瓣数平均为6．3瓣（其他种质均为5瓣）。     

枇杷LTR类反转录转座子RT序列的克隆及分析

[目的]揭示枇杷LTR类反转录转子座RT序列在枇杷基因组中的异质性,为枇杷转座子进化和多样性研究提供依据.[方法]以普通枇杷野生种质的叶片为材料,通过简并引物从枇杷基因组中扩增得到Ty1-copia和Ty3-gypsy类反转录转座子反转录酶序列,并对其序列变化特点进行生物信息学分析.[结果]最终获得38条Ty1-cop...     

枇杷属种数及Eriobotrya hookeriana汉译商榷

查证了有关枇杷属下种类数目的英文和日文原始文献以及２０世纪３０年代以来的汉语文 献,通过比较分析后认为,迄今为止较可靠的证据表明：枇杷属有１５个种和５个变种,除两三个种 或变种之外,其余均原产我国。并把外文已记载但迄今未翻译为汉语的一个种 Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａ　ｈｏｏｋｅｒｉａｎａ　 Ｄｅｃｎｅ的英文材料试译为汉语。     

正交设计优化果梅ISSR反应体系

以果梅(PrunusmumeSieb.etZucc.)品种鸳鸯梅为试材,采用改良的CTAB法提取果梅嫩叶DNA,利用正交设计L16(45)探讨Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶及模板DNA用量对果梅ISSR-PCR反应的影响,正交试验的结果采用直观分析和方差分析相结合。建立了果梅的ISSR-PCR优化反应体系,在20μL反应体系中含2μL10×Buffer,2.5mmol·L-1Mg2+,0.2mmol·L-1dNTPs,0.32μmol·L-1引物,20~80ng模板DNA,0.75UTaqDNA聚合酶。在此基础上探讨了引物UBC840的最适退火温度、最佳循环次数及延伸时间,引物UBC840的最适退火温度为50.6℃。应用该优化反应体系,用2个不同引物对19份果梅资源DNA进行ISSR-PCR扩增,结果显示优化的反应体系具有较高的稳定性。