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H5N1亚型禽流感病毒核衣壳蛋白(NP)基因的进化及原核表达 总被引:2,自引:0,他引:2
参考GenBank上H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计引物,PCR扩增NP基因,对其进行序列分析并构建分子进化树。将克隆的NP基因插入原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中进行诱导表达,对诱导表达的NP重组蛋白进行纯化、Western-Blot鉴定及免疫原性分析。结果表明,克隆的NP基因与GenBank上发表的另外2个河南AIV毒株亲缘关系较近,诱导表达的NP重组蛋白主要以可溶性形式存在,分子量约为70 kDa,并且能够与H5亚型AIV阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。 相似文献
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在农业部和科技部共同主持及国家“973”、“86 3”和“攻关”项目资助下,通过30多位科研人员不懈的努力,具有国际先进水平的高效、安全、新型H5 N1亚型禽流感灭活疫苗和重组禽痘病毒活载体疫苗,近日由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所的农业部动物流感重点开放实验室及国家禽流感参考实验室研制成功。新型H5亚型禽流感灭活疫苗系由高度致弱的H 5 N1亚型疫苗种子株制备,该疫苗种子株的研制采用了当前国际先进的流感疫苗株构建策略——流感病毒反向基因操作技术,其决定免疫保护原性的表面基因来自H5 N1亚型高致病力禽流感流行株,并人工缺失… 相似文献
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H5N1亚型禽流感病毒HA基因DNA疫苗的构建和活体电击免疫试验初报 总被引:5,自引:0,他引:5
将高致病力禽流感病毒A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)的HA基因克隆到质粒pcDNA4/His鄄Max和pRc/CMV上得到真核表达质粒pC4H5和pCMVH5。将pC4H5和pCMVH5经活体电击和肌肉注射接种于3周龄SPF鸡的右腿内侧,并设空白质粒对照。二次免疫后第二周用104.2ELD50的同源病毒进行攻击。结果pC4H5和pCMVH5活体电击免疫SPF鸡能诱导产生持续表达的高水平特异性抗体,可产生100%的保护率,并能有效地阻止H5N1病毒攻击后病毒在泄殖腔的排出,而肌肉注射组和空白对照组在攻毒后全部发病并死亡。结果表明活体电击免疫是一条可以与基因枪免疫相媲美甚至优于基因枪免疫的有效免疫途径。 相似文献
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制备抗H5亚型AIV血凝素单克隆抗体;依据淋巴细胞杂交瘤技术,用纯化的H5N1亚型AIV和重组噬菌体T4-H5HA免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用ELISA方法筛选特异性单克隆抗体;获得6株抗H5亚型AIVHA的特异性单克隆抗体H5-01(1E6)、H5-02(2C2)、H5-03(2A8)、H5-04(2G6)、H5-05(2E9)和H5-06(3F6)。各株单抗亚型测定的结果为:H5-01、H5-02为IgG1,H5-03、H5-04为IgG2a,H5-05、H5-06为IgG2b,轻链的亚型均为kappa链;经特异性和与同型病毒的反应谱检测,6株均是抗H5亚型AIVHA特异性单克隆抗体,为进一步分析H5N1亚型AIV的结构与功能以及建立监测该亚型AIV的试剂盒奠定了基础。 相似文献
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犬瘟热病毒Lederle株H,N全基因序列分析及表达研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用RT-PCR方法自犬瘟热病毒Lederle株基因组RNA中扩增出H基因(1 911 bp)和N基因(1 707 bp)片段,序列测定和分析表明与Onderstepoort株、CDV3株等疫苗毒株的同源性在95%以上,而与野外分离株的同源性介于90%~95%;以获得的H,N全基因片段为模板,分别扩增H基因近3′端996 bp的基因片段以及N基因中间高度保守区562 bp的基因片段,经克隆测序后分别插入原核表达载体pET-32a中进行表达,结果显示H片段和N片段分别表达大小约为57 kD和37 kD的融合蛋白,Western blotting检测结果显示,表达蛋白均可与CDV抗血清发生阳性反应,提示原核表达产物具有与CDV抗血清结合的免疫反应性。 相似文献
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为从分子生物学角度进一步研究H5N1型禽流感主要抗原HA基因,探究H5N1 HA基因的遗传变异情况及其蛋白结构,根据GenBank中登录的H5N1型禽流感HA基因的序列利用Primer 5.0设计引物扩增HA基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行鉴定,对鉴定正确的重组质粒pMD-H5N1-HA进行测序分析。应用生物信息学软件对禽流感病毒HA基因进行系统进化树分析、氨基酸序列同源性分析、保守区分析,磷酸化位点和序列重复区分析及HA蛋白二级、三级结构的预测。核苷酸序列测定结果表明:HA基因长1661 bp,共编码326个氨基酸;生物信息学分析结果表明:HA基因在种间具有较高保守性,HA基因的氨基酸序列与其他地方性禽流感H5N1病毒株HA基因的序列同源性最高可达99.7%,且为高致病性毒株;HA蛋白的二级、三级结构预测结果显示:HA蛋白多为α螺旋和β转角结构,无规则卷曲,是亲水性蛋白。该结果为禽流感病毒的分子病毒学研究奠定了基础。 相似文献
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洞庭湖区H10亚型禽流感监测及其遗传进化分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了解洞庭湖区H10 亚型禽流感病毒的流行分布及遗传进化情况,为该地区H10 亚型禽流感的防控及该亚型病毒在禽流感病毒进化中所起的作用提供一些参考。在环洞庭湖地区活禽批发市场和水禽场上采集家禽和环境拭子,对其进行病原分离、鉴定和测序,应用Mega 5 软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制与分析。结果显示:在活禽批发市场上总共分离到11 株H10 亚型禽流感病毒,分离的H10 亚型禽流感阳性样品全来源于鸭拭子;在1 个鸭场分离到2 株H10 亚型禽流感病毒;其中2株分离毒株序列分析显示其HA蛋白的裂解位点为PELMQGR/GLF,属于低致病性病毒,与以往在其他国家(蒙古、瑞典、荷兰、泰国、日本等)野鸟中分离的H10亚型病毒处于同一分支。 相似文献
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H9N2亚型AIV HA基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达 总被引:1,自引:1,他引:0
[研究目的]利用杆状病毒表达系统表达AIV H9N2亚型HA基因以获得可以利用的HA蛋白;[方法]应用DNAStar软件,参照Genbank中注册的AIV H9N2亚型HA基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H9亚型AIV的HA基因,通过BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点将H9HA基因插入转移质粒载体pFastbacHTa中,获得重组转移载体pFastbacHTa-H9HA并将其转化DH10 Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H9HA,再将其转染昆虫细胞High Five,进行PCR鉴定、SDS-PAGE和Westem Blot检测;[结果]HA基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,HA基因在High Five细胞中得到了表达,H9HA大小约为67 KD,而且表达的产物具有特异免疫学反应性;[结论]HA基因在昆虫细胞获得表达,为进一步生产检测H9N2亚型流感病毒的检测试剂或者构建亚单位疫苗奠定了基础. 相似文献
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旨在研究H5 亚型高致病性禽流感病毒的暴发、传播及进化规律,探索不同宿主、宿主行为、地理环境等因素对疾病传播与进化的影响,以期为该疾病未来预防与控制提供建议和理论支持。研究中利用空间分析技术、系统进化分析技术,研究了全球H5 亚型高致病性禽流感疫情(2004—2015 年)的时空爆发、传播和进化规律。结果表明:H5 亚型高致病性禽流感病毒在2004—2008 年出现集中暴发及大面积扩散后,于2011—2015 年出现第二次大面积暴发,同时伴随多种禽流感亚型。此外,对不同地区病毒的遗传差异进行分析,发现地理隔离会造成病毒在区域内鲜有进化或暴发;而病毒在一个地区持续性存在并感染不同宿主,导致病毒的进化及遗传的多样性。研究认为,地理隔离、宿主行为等因素是造成有些地区如南亚、北美洲,病毒遗传差异较小,而有些地区如东北亚、中国等病毒的遗传差异显著的原因之一。 相似文献