新颖抗猪流行性腹泻免疫制剂

以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ），通过蔗糖密度梯度离心纯化，获得结构较为完整的病毒颗粒，病毒ＥＬＩＳＡ效价为１：３×１０＾５，蛋白含量为３．９６ｍｇ／ｍＬ。将提纯的ＰＥＤＶ免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合，融合率为９５．６％。用间接ＥＬＩＳＡ筛选并进行３次再克隆，阳性率达１００％，共获得１５株能稳定分泌特异性抗ＰＥＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。其染     

3种猪孕酮受体基因(pgr)多态性分析

采用混合基因组DNA池PCR扩增和测序技术,对小梅山猪、枫泾猪、大白猪pgr基因的外显子区域进行扫描,共发现1个单核甘酸多态性位点(SNP)。外显子1序列中1 319 bp处发生C→T的碱基突变,即C1319T,未引起氨基酸的变化,属于同义突变;针对突变位点,建立错配PCR–限制性长度多态性(RFLP)方法进行检测,发现3种猪的pgr基因可以分为AA、BB、AB 3个基因型,小梅山和枫泾猪有AA、AB 2种基因型,大白猪中有BB、AB 2种基因型。     

猪流行性腹泻病毒与猪两种腹泻病毒混合感染免疫的比较研究

用研制的猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤ）灭活苗和猪两种腹泻病毒混合感染（ＴＧＥ与ＰＥＤＶ）灭活苗分别进行了人工感染性免疫，主，被动免疫，交互免疫，免疫力产生时间，免疫期和野外免疫预防等对比试验，结果表明，２种疫苗除具有较好的免疫力外，它们之间既存在免疫的相关性，也各具有其特异性。     

猪流行性腹泻免疫临床效果评估

本文通过临床案例,对确诊发生猪流行性腹泻的3个猪场的母猪进行腹泻二联疫苗免疫,统计免疫前后哺乳仔猪日均死亡率变化情况,并进行显著性分析,来评估疫苗免疫临床效果。结果显示：发生猪流行性腹泻的3个猪场,免疫前后仔猪日死亡率先升高后降低,最高分别达7.05%、 11.43%、 3.91%;免疫后1～10d日均死亡率显著高于免疫前1～10d (P=0.040),免疫后11～20d日均死亡率明显低于免疫后1～10d日均死亡率;说明猪流行性腹泻会导致仔猪高死亡率,母猪注射疫苗后,哺乳仔猪被动免疫而获得抗体产生保护,日死亡率迅速下降,证明疫苗起到良好效果。     

一种防控猪流行性腹泻的新免疫方案的实践与分析

该研究通过对2个不同的猪群,采取不同的猪流行性腹泻免疫方案,随后统计生产中实际出生仔猪腹泻率数据,母猪抗体检测数据,腹泻仔猪抗原检测数据,评价不同免疫方案的实施效果。试验结果显示：采用新免疫方案的二区哺乳仔猪腹泻率为3.6%,比一区旧免疫方案的腹泻率8.2%低;一区、二区母猪经过不同疫苗、不同免疫方式免疫,一区、二区母猪血清抗体阳性率分别为84.3%、 97.5%;一区、二区仔猪猪流行性腹泻抗原阳性率分别为19.4%、 0.0%。可见,采用新免疫方案达到了良好的防控效果。     

苏淮猪抗腹泻MUC13基因rs319699771位点多态性 及其与经济性状的关联

【背景】MUC13基因是调控致使仔猪断奶前腹泻的产肠毒素大肠杆菌F4ac感染的主效基因,该基因上rs319699771位点（G/A突变）能准确鉴别易感和抗性个体,其中GG型是抗腹泻基因型,苏淮猪抗腹泻性能分子选育是通过选留GG型个体来实现。但在选留抗腹泻GG型个体时是否会对苏淮猪其它重要经济性状如生长、胴体、肉质产生不利影响尚未明晰。【目的】旨在分析该位点是否与其它性状关联,以确定基于MUC13基因rs319699771位点抗腹泻性能的分子选育是否会对苏淮猪其它经济性状产生不利影响。【方法】以313头体重为87.61±0.54 kg的苏淮育肥猪为试验动物,屠宰测定其胴体和肉质性状,以261头日龄为161.1±0.5 d苏淮后备猪为试验动物,测定其生长、体尺性状,同时采集相应苏淮育肥猪和后备猪群耳组织样提取组织DNA,经过多重PCR反应进行MUC13基因rs319699771位点多态性检测,采用SAS软件中一般线性模型分析MUC13基因rs319699771位点多态性基因型和苏淮猪肉质、胴体和生长性状的关联性。【结果】MUC13基因rs319699771位点多态性检测结果显示,苏淮猪育肥群公、母猪群体MUC13基因rs319699771位点的抗腹泻G等位基因频率分别为0.695和0.634,抗腹泻优势GG型频率在苏淮猪育肥群公、母群体中分别为0.467和0.373;该位点抗腹泻G等位基因频率在苏淮后备群公、母猪群体分别为0.690和0.705,抗腹泻优势GG型频率在后备群公、母猪群体中分别为0.508和0.480,说明苏淮猪抗腹泻等位基因频率较高,通过分子选育提升苏淮猪抗腹泻GG型频率的可行性强。MUC13基因rs319699771位点多态性与苏淮猪经济性状关联分析结果显示：育肥猪群体该位点多态性与胴体、肉质性状均无显著关联（P>0.05）,可见在苏淮猪育肥猪群体内加大对抗腹泻MUC13基因rs319699771位点的选育不会影响到苏淮育肥猪的胴体和肉质性状;苏淮后备猪群体该位点多态性与腿臀围指标存在极显著关联（P<0.01）,该位点GG型个体腿臀围平均比比AG型个体腿臀围长1.46 cm,比AA型个体腿臀围长3 cm;与日增重和结测体重的关联性分析有关联趋势（P<0.10）,GG型个体相较于AA、AG型个体有提升趋势,对于这三个性状来说,有利基因型都是GG型,说明选留该位点GG型进行苏淮后备猪抗腹泻选育的同时还可以提升苏淮后备猪生长相关性状。【结论】据此,苏淮猪群体MUC13基因rs319699771位点抗腹泻等位基因频率较高,进行抗腹泻选育的可行性强,同时对于苏淮猪群体,不仅可通过选留提升MUC13基因rs319699771位点GG型频率来提高抗腹泻能力,还能同时实现对苏淮猪群腿臀围、日增重的选育提升。     

不同免疫剂量和途径对猪流行性腹泻血清抗体的试验

文章对不同免疫剂量、不同免疫途径与猪只体内血清中和抗体水平相关性进行研究,为今后研究中对疫苗的生产工艺改进,优化免疫程序等研究提供理论依据,从而为制定有效的防控措施,促进养猪业的稳定发展做好铺垫。     

中药复方调节猪流行性腹泻免疫效果研究

为了确定中药复方对接种猪流行性腹泻疫苗的免疫调节作用,试验通过对免疫猪只投服复方中药,观察猪只的发病情况和抗体生成水平,评估中药对疫苗的免疫效果。结果表明试验组猪流行性腹泻平均抗体效价明显高于对照组(P0.05);添加复方的免疫组的平均抗体水平显著高于单纯免疫组和空白对照组(P0.05),但添加复方两组之间差异不显著。说明自拟中草药组方对猪流行性腹泻免疫有显著的增强效果。     

猪流行性腹泻病毒全基因组基因重组分析

猪流行性腹泻病毒（PEDV）主要引起仔猪急性腹泻、呕吐、脱水及死亡,自2010年PEDV变异毒株流行以来,已对全球的生猪产业造成严重影响。针对PEDV基因突变研究较多,但有关基因重组在PEDV变异中作用的文献较为鲜见。本研究收集不同PEDV毒株序列,使用SplitsTree软件构建网状图,利用Recco软件鉴定重组信号,结果成功鉴定出一株重组毒株,毒株名称为CH/FJND?3/2011。本研究结果为PEDV变异机制多样性研究提供更多数据支持,同时也为PEDV有效防控提供参考。     

太湖猪与大白猪小肠发育及其免疫功能形态学比较

应用组织学方法分别对28头太湖猪和大白猪各发育时期小肠各段的形态学变化进行比较研究。结果表明，太湖猪十二指肠绒毛于3日龄达最长（147.49μm)，大白猪则于20日龄达到最长（162.90μm）。随着年龄的增加，绒毛的长度逐渐变短，但其宽度增加，肠皱襞越业越发达，以90日龄和120日龄最为显著。肠壁厚度随着年龄的增加而增加。太湖猪回肠的淋巴组织尽管随着生长逐渐发育，但不及同期大白猪。提示太湖猪与大白猪生长速度的明显差异与小肠组织发育有关，小肠发育是动物生长的重要因素之一。     

猪Nramp 1基因多态性与免疫功能的相关性

【目的】探讨Nramp1基因第6内含子多态在大白猪和松辽黑猪（是由杜洛克、长白猪和民猪合成）中的分布及其与猪免疫抗病的关系。【方法】采用PCR-RFLP法对165头大白猪和109头松辽黑猪Nramp 1基因第6内含子多态性与免疫功能（中性粒细胞还原力和单核细胞细胞毒百分率）的相关性进行了研究。【结果】两个品种在该位点均存在多态性,品种间、合并基因型间免疫功能差异不大,但同一品种内不同基因型间差异显著;大白猪BB基因型个体的单核细胞细胞毒百分率显著高于AB基因型个体（P＜0.05）,BB基因型个体的中性粒细胞NBT还原力值极显著高于AB基因型个体（P＜0.01）,而在松辽黑猪中则是AB基因型个体的中性粒细胞NBT还原力值显著高于BB基因型个体（P＜0.05）;从断奶到出栏的死亡率分析显示大白猪BB基因型个体死亡率明显低于AB基因型个体,松辽黑猪则是AB基因型个体的死亡率明显低于BB基因型个体。【结论】品种内不同Nramp1基因型与免疫功能间存在着显著相关,Nramp1基因可作为抗病力性状的一个主要候选基因。     

闽西地区猪流行性腹泻病毒N基因分子进化及序列分析

分析闽西地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)N基因的遗传进化特征,收集闽西地区猪流性腹泻病例组织样品8份,用逆转录PCR(RT-PCR)扩增N基因,连接至pMD-18T载体进行测序,并与国内外已知参考毒株序列进行比对及遗传进化分析。结果显示,8株闽西流行毒株之间N基因核苷酸的同源性为9.8%～100.0%,推导的氨基酸序列的同源性为99.5%～100.0%,而闽西毒株与早期疫苗毒株CV777和SM98的同源性较远。氨基酸序列分析表明,闽西毒株氨基酸序列存在15处突变,与2010年后中国流行毒株变异位点相同。提示闽西地区毒株为目前国内流行毒株,与疫苗毒株亲缘关系较远,可能导致机体针对疫苗毒株产生的抗体不能够有效抵抗变异毒株,不能给猪群提供很好的免疫保护,因此需要基于变异毒株研究出有针对性的疫苗来预防PEDV。     

猪流行性腹泻病毒5株安徽流行株M基因的克隆与序列分析

为了解安徽省猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的遗传变异,对5株PEDV安徽流行株M基因进行RT-PCR扩增、序列测定和分析。结果表明,5株PEDV安徽流行毒株M基因的全长均为681 bp,编码226个氨基酸,核苷酸同源性为99.1%～99.9%,其与国内外PEDV参考毒株核苷酸同源性为96.9%～100%。进化树分析显示,5株流行毒株与CV777、attenuated DR13、LZC和CHS亲缘关系较远,与2011年后国内外PEDV分离株的亲缘关系较近。     

山东地方猪种与引进猪种EDG4基因多态性分析

为了探讨内皮分化基因4(endothelial differentiation gene 4,EDG4)的生物学功能,利用PCR-RFLP技术研究EDG4基因外显子2在7个猪群中的多态性分布规律.结果表明,仅在鲁莱猪和大约克猪群体中检测到TT、TC和CC 3种基因型,在莱芜猪、里岔猪、沂蒙猪和杜洛克猪群体中检测到TC和CC 2种基因型,在长白猪只检测到CC1种基因型;在7个猪群体中C均为优势等位基因,CC为优势基因型.x2检验结果表明,基因型分布在里岔猪、莱芜猪、沂蒙猪、鲁莱猪、长白猪和杜洛克群均达到了哈代-温伯格平衡(P＞0.05);不同基因型在群体间的分布差异极显著.群体遗传特性结果表明,有效等位基因数在1.000～1.5127之间.7个猪种的多态信息含量(PIC)介于0.0000～0.2815之间,其中鲁莱猪PIC大于0.25,为中度多态;其余品种PIC值低于0.25,为低度多态.     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体(MAb),本试验将Vero细胞中增殖的PEDV超速离心纯化,作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术和PEDV重组S蛋白为基础的间接ELISA方法,制备并筛选能稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞;分别采用间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验,对单克隆抗体的亚型、特异性等生物学特性进行鉴定。结果表明,本试验成功获得了1株稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞株5C3。MAb亚类鉴定为IgM,轻链为k型。杂交瘤细胞连续传至20代,细胞培养上清液和小鼠腹水抗体效价分别稳定在1∶600和1∶10 000。特异性试验结果显示,MAb不与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病毒(PrV)、猪圆环病毒(PCV2)发生交叉反应。western-blot结果显示,MAb能特异性识别PEDV的重组S蛋白。IFA试验结果表明,MAb能与PEDV感染的vero细胞产生特异性荧光。说明本试验获得的MAb能特异性识别重组及天然的PEDV S蛋白,具有良好的抗原性和特异性。     

猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻防治

猪传染性肠胃炎是具有一定传染性质的肠胃炎病毒,一旦猪被感染就会出现呕吐及腹泻等症状,如果不对猪进行隔离,处于任何年龄阶段的猪都将受到病毒传染,尤其是新生猪仔其感染几率及死亡率都基本接近于完全状态,也就是说只要猪幼仔被感染上该病毒,就会直接导致其死亡,而周龄达到5周的猪死亡率就会相对下降。猪流行性腹泻是较为常见的一类猪肠道传染病,其临床表现大多为水泄、呕吐及脱水,由于其本身也具有较强的传染性,一旦感染其发病率也将达到致命状态,特别是处于哺乳期的幼仔受害程度往往较重。     

新发猪流行性腹泻病毒ORF3基因的遗传进化分析

从浙江地区分离的2株代表性样品与全国范围内流行的参考毒株进行比对和遗传进化分析,结果分为4个组,代表性样品与大部分国内的毒株落入G4-2组,与国内早期CH-S毒株核苷酸(氨基酸)同源性为98.4%~98.5%(99.1%~99.6%);以华南地区为主的2011-2012年分离的毒株自成一组,与中国其他地区的毒株的同源性为95.0%~97.2%,与其余3组比较有9个核苷酸的变异。遗传进化分析表明所分离毒株与大部分中国的流行毒株属于一个基因型;以2011-2012年中国华南地区为主的毒株成为PEDV的一个新的基因型;提示2011-2012年中国流行着2种PEDV的基因型。     

猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪轮状病毒三联苗免疫试验

本研究采用猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒细胞培养物制备了三联灭活疫苗,实验室免疫结果表明,肉猪和妊娠母猪免疫后15d达到较高的免疫水平,免疫有效期超过6个月。妊娠母猪所产仔猪可获得高水平的被动免疫保护。试验场应用结果表明母猪保护率达98％,仔猪被动免疫保护达93％。     

猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻的区别

从病原、流行特点、临床表现、病理剖检、实验室诊断等方面介绍了猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻之间的区别,以供参考。     

3株猪流行性腹泻病毒S1基因的克隆及序列分析

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)可感染各阶段的猪,使患病动物出现水样腹泻、呕吐,并伴随厌食和精神沉郁等临床症状,对哺乳仔猪危害尤为严重。为了解河南某猪场PEDV流行毒株S1基因的变异情况,以江苏农牧科技职业学院动物药学院实验室保存的感染PEDV临床病料为样本,对其进行S1基因扩增、克隆以及序列分析。对S1基因的进化分析结果显示,该猪场PEDV分离株S1基因推导的氨基酸序列之间的同源性高达99%,BLAST搜索结果显示与AHCZ-2株的相似性最高,将获得序列与经典毒株CV777相比在第57位插入了4个氨基酸NQGV,在第134位插入1个氨基酸D,而在第157、158位缺失2个氨基酸,在中和表位区域共有11处氨基酸突变,与国内其他毒株均位于G2-b进化分支,研究结果为进一步掌握该地PEDV的流行毒株和毒力变异情况提供了理论依据。