厨余中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

试验筛选厨余中具有高效降解淀粉功能的芽孢杆菌.采用可溶性淀粉培养基进行菌株的富集及分离培养,获得13株产淀粉酶的芽孢杆菌,测定其透明圈直径与菌落直径比值2.9～6.3,其中S8菌株和S10菌株产酶能力较高,总酶活达到283.6 U/mL和329.7 U/mL.通过形态、生化特征及16S rRNA基因序列分析,鉴定S8菌...     

肉鸭消化道酵母益生菌的分离与鉴定

为获得可用作肉鸭专用饲用酵母益生菌菌株,试验分别收集4个不同地域肉鸭消化道6个部位的内容物,利用麦芽汁琼脂培养基分离纯化酵母菌株,通过26S r DNA D1/D2区域基因序列同源性分析、形态学和生理生化验证等方法,确定酵母菌的种属。结果表明:从肉鸭消化道6个部位共分离出35株酵母菌,其中有7株为酿酒酵母菌,且在各个肠段都能分离出酵母菌。本研究分离的7株酿酒酵母菌可作为肉鸭专用饲用酵母益生菌的备选菌株。     

东北虎肠道降胆固醇乳杆菌的分离鉴定

为了筛选适宜开发降胆固醇保健食品的乳杆菌,试验采用乳杆菌选择培养基(LBS),从东北虎肠道分离、筛选得到10株乳杆菌。采用高胆固醇乳酸杆菌培养液(MRSO-CHOL)对分离菌进行体外降胆固醇试验,并对降胆固醇最高的3株菌进行耐酸及耐胆汁盐试验;对胆固醇降解率高、耐酸、耐胆汁盐的菌株进行形态学、生理生化反应和16S rDNA鉴定。结果表明:从东北虎肠道分离得到的10株乳杆菌,体外均有降解胆固醇的能力,降解率为25.00%～65.00%,平均降解率为45.00%。菌株1胆固醇降解率为55.00%,且耐酸、耐胆汁盐的能力均较强,鉴定其为嗜酸乳杆菌。     

云南传统乳饼中酵母菌的分离及鉴定

对来自云南省25个传统乳饼样品进行分离培养,得到20株酵母菌.经过糖发酵试验对上述菌株的初步鉴定结果表明:其中的10株分离株的特性接近比赤酵母(Pichia fermentans);7株接近博伊丁假丝酵母(Candida boidinii);另外的3株与啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae/Candida shehatae)接近;对上述分离株用Biomerieux API ID32C鉴定试剂盒进行生理生化试验,表明经糖发酵试验鉴定的10株比赤酵母、7株博伊丁假丝酵母和3株啤酒酵母分别与酵母菌资料库的相应的菌株有87%,90%和98%的相似度.     

奶牛饲料中酿酒酵母菌的分离鉴定及其发酵液的体外抑菌活性研究

本试验旨在分离鉴定甘肃地区奶牛场饲料中的酿酒酵母菌,进而研究酿酒酵母菌发酵液的体外抑菌活性。通过YPD固体培养基对采集的5份饲草和5份饲料样品中的酵母菌进行分离,分别进行生化鉴定和26SrDNA测序鉴定,进而检测酿酒酵母发酵液的体外抑菌活性。结果表明,从样品中分离出4种共12株酵母菌,分别为3株酿酒酵母菌(Y1、Y7和Y11)、4株汉逊德巴利酵母菌、3株浅黄隐球酵母菌和2株戴尔有孢圆酵母菌;3株酿酒酵母菌的发酵液对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌的抑菌活性存在差异,其中酵母菌Y7和Y11的发酵液对3种病原菌均具有抑菌活性,而Y1的发酵液只对大肠杆菌具有抑制作用。本试验为进一步筛选性能优异的酿酒酵母菌用于微生态制剂研发奠定了基础。     

产类胡萝卜素酵母菌的鉴定及其发酵醋糟营养价值的研究

本研究旨在对实验室前期分离的酵母菌进行鉴定,并利用其发酵醋糟,以提高醋糟饲用营养价值。利用形态学特征、生理生化特性及26S rDNA的D1/D2区核酸序列分析,鉴定了1株产类胡萝卜素的酵母菌,并对醋糟进行固态发酵。结果表明:被鉴定菌株符合红酵母的形态学特征及生理生化特性,其26S rDNA的D1/D2区核酸序列与黏性红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)相关序列相似度达100%,故该菌株被鉴定为黏性红酵母;与未发酵醋糟相比,该菌株发酵醋糟的干物质、粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量变化均不显著,粗脂肪和总糖含量均降低(P<0.01),粗蛋白质与真蛋白质含量均升高(P<0.01),尤其是产生了6.60 mg/kg具有多种生物学功能的类胡萝卜素。结果显示,该株产类胡萝卜素的酵母菌为黏性红酵母,该菌发酵可改善醋糟的营养价值。     

1株降解黄曲霉毒素B1的解淀粉芽胞杆菌的分离鉴定及其体外脱毒效果

旨在筛选出能够高效降解黄曲霉毒素B₁（AFB₁）的菌株,并对其脱毒活性组分的脱毒效果进行研究,本研究以香豆素为唯一碳源对目标细菌进行初筛,以对AFB₁的降解率为指标进行复筛,并从形态学、生理生化试验和16S rDNA序列分析对筛选菌株进行鉴定;通过测定该菌株不同发酵组分对AFB₁的降解率,来定位其脱毒活性组分,同时采用CCK-8法测定活性组分降解AFB₁后对LMH细胞毒性,并研究了热处理、紫外线照射、强酸、强碱及蛋白酶K处理对活性组分脱毒作用的影响。结果显示,从样品中初筛分离到24株能够在初筛培养基生长良好的菌株,经复筛从中筛选到一株能高效降解AFB₁的菌株Y1-B1,其AFB₁降解率达到73.2%;经形态学、生理生化试验和16S rDNA序列分析确定该菌为解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。对菌株Y1-B1培养物的不同组分进行的脱毒活性研究表明,不同组分对AFB₁的降解率不同,上清液的脱毒能力最强,细菌细胞裂解物的脱毒能力下降明显,菌体悬液和菌体裂解物上清的脱毒能力最差,由此确定解淀粉芽胞杆菌Y1-B1的脱毒能力主要来源于上清液中的某种活性物质;细胞毒性结果显示,与AFB₁对LMH细胞的毒性作用相比,AFB₁被上清液降解后其产物的毒性显著降低。该脱毒活性组分对不同理化因素处理呈现出不同的表现,对高温、紫外照射抵抗力较强,对强酸、强碱抵抗力较差,蛋白酶K仅造成脱毒能力部分减弱。本研究将为解决黄曲霉毒素污染问题提供新的微生物种质资源,同时为后续微生物脱毒制剂的开发奠定基础。     

降解呕吐毒素益生菌的筛选及在发酵麸皮中的应用

试验旨在筛选能高效降解饲料呕吐毒素且具有益生功能的菌株通过平板扩散法筛选对大肠杆菌有拮抗功能的菌株,进一步通过禾谷镰刀菌平板扩散法和呕吐毒素酶联免疫法筛选既拮抗禾谷镰刀菌又降解呕吐毒素的菌株,对降解率最高的菌株进行种属鉴定和性质研究,通过发酵霉变麸皮验证其效果结果表明,筛选得到1株可拮抗禾谷镰刀菌、大肠杆菌且对呕吐毒素降解率为96.56%的芽孢杆菌10-32,综合菌落菌体形态观察、16S rDNA序列分析和生理生化试验将其鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该菌株在27~47℃、pH值4.5~6.5能正常生长。麸皮发酵试验显示,接菌量10^(9)CFU/kg、含水量40%、压实发酵的情况下,发酵5d呕吐毒素降解率为73.25%,且浸提液对大肠杆菌的抑制作用显著高于对照组(P>0.05)。     

纤维素降解菌的筛选、鉴定与产酶条件优化试验

为了筛选高效降解纤维素菌株,试验以朽木及其下面土壤为样本,筛选获得28株具有纤维素降解能力的菌株,采用刚果红染色和酶活性测定筛选出一株纤维素降解菌(LD03),通过形态观察、生理生化以及16S rDNA序列测定,初步鉴定该菌株属于Rhizobacter属细菌,对该菌株培养条件和产酶条件进行了优化。结果表明:菌株LD03最适产酶条件,碳源为30 g/L淀粉、氮源为3 g/L牛肉膏、初始p H值为7、培养温度为37℃、装液量为50 mL、接种量为4%、培养时间为36 h,酶反应p H值为7,酶反应温度为60℃。     

玉米赤霉烯酮降解菌的分离与鉴定

以被霉菌毒素污染的饲料、健康家畜粪便、土壤等为样本,采用玉米赤霉烯酮(ZEN)毒素为唯一碳源进行ZEN毒素降解菌的驯化富集培养,并用高效液相色谱法对分离到的细菌进行ZEN毒素降解能力检测。结果显示:共筛选到14株具有能够降解ZEN的菌株,降解率在8.3%~87.1%之间,其中从石油污染土地筛选到的菌株SYA13在72 h对液体培养基中的ZEN毒素的降解能力达87.1%以上,明显高于其他菌株;对SYA13菌株从形态、生理生化特性以及16S rRNA序列进行分析,初步鉴定SYA13菌株为红球菌(Rhodococcus)。ZEN高效降解菌SYA13菌的分离鉴定,为继续研究其降解机制及实际应用奠定了基础。     

奇异根串珠霉菌拮抗放线菌的筛选与鉴定

本实验以奇异根串珠霉菌（Thielaviopsis paradoxa）为目标菌,通过平板梯度稀释法从槟榔根系土壤中分离获得放线菌,利用平板对峙法筛选对奇异根串珠霉菌具有抑菌活性的菌株,并通过发酵液复筛出4株抑制效果达90%以上的菌株,编号为D2-3、G1-12、D2-9和G9-4。通过培养特征、形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析对抑制率99.76%的菌株D2-3进行分类鉴定,初步鉴定该菌株为一株链霉菌,与桑树链霉菌（Streptomyces samsunensis）16S rDNA序列相似性为99.41 %。     

规模化猪场粪污高效脱硫菌的分离、筛选与鉴定

为降解规模化猪场污水中的S^2-,本研究从规模化猪场采集粪便污水样品20份,首先接种于含10 g/L Na₂S的基础无机盐培养基中富集培养,然后涂布于分离培养基进行分离与纯化。对纯化的菌株采用对氨基二甲基苯胺分光光度法测定培养上清中S^2-含量,筛选菌株的脱硫能力。选择降解率较高的菌株进行生理生化鉴定和16S rDNA分子鉴定,并对扩增的序列进行同源性比较及进化树分析。结果表明:从20个样品中分离了14株菌株,筛选获得2株脱硫率较高的菌株JFF-2和JFF-3,脱硫率可达84.02%和86.12%;经16S rDNA序列分析表明,JFF-2菌与地衣芽孢杆菌的同源性为99.2%,JFF-3菌与粪产碱杆菌的同源性为98.7%,因此分别确定为地衣芽孢杆菌和粪产碱杆菌,与生理生化鉴定的结果一致。本研究获得了2株能够对畜禽粪便污水脱硫的菌株,为畜禽排泄物的进一步无害化处理提供了可能。     

降解赤霉烯酮芽孢杆菌的筛选、鉴定及性质研究

为了获得一株饲用的高效降解赤霉烯酮(ZEN)的芽孢杆菌菌株,试验通过平板扩散法和酶联免疫法进行筛选,并对降解率较高的菌株进行种属鉴定、性质和产酶情况研究。结果表明:通过筛选共得到7株功能菌,其中菌株Y-1d的降解率最高,经菌落菌体形态、16S rDNA序列分析和生理生化鉴定确定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株在p H值为4.5~6.5、温度为27~47℃的范围内生长良好,对胆盐有一定的耐受性,能够产生淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶。说明试验获得一株性质优良的可用于饲用的赤霉烯酮降解菌株。     

牛源大肠杆菌O157∶H7的分离鉴定

为调查新疆部分地区E.coli O157∶H7的感染情况和菌株致病性,从新疆阿克苏、伊犁、塔城3个地区的牛场采集新鲜粪样564份,对E.coli O157∶H7进行分离与鉴定。利用E.coli营养肉汤(EC肉汤)对样品进行增菌后,用山梨醇麦康凯培养基(SMAC)平板选择性培养,再经过4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷培养基(MUG)的筛选,对疑似菌株进行生化和PCR鉴定,并将分离鉴定到的菌株进行小鼠攻毒试验。结果显示,从伊犁地区采集的样品中共分离出2株E.coli O157∶H7(Y166和Y226),其检出率为0.88%;小鼠攻毒试验中,Y166和Y226试验组小鼠在48h内全部死亡,具有一定致病性;从阿克苏、塔城所采样品中未分离到E.coli O157∶H7。     

一株乳酸片球菌的分离鉴定

研究从青贮饲料中分离筛选获得3株乳酸菌,通过产酸试验、不同温度和pH培养试验及对糖类利用及抑菌试验,筛选出1株适合作为青贮接种剂的优良菌种,通过形态学、生理生化和分子鉴定相结合的方法对获得的菌株进行鉴定,最终确定菌株P1为乳酸片球菌,为青贮接种剂提供优良菌株。     

鸡肠道芽孢杆菌的分离鉴定及产蛋白菌株的筛选

本实验从鸡肠道分离出50株菌种,通过对菌种菌落培养特性、形态观察、生理生化实验,初步鉴定出8株为芽孢杆菌。通过产蛋白菌株的筛选试验筛选出1株能够分泌蛋白的芽孢杆菌,该菌株可望成为外源蛋白高效分泌表达的宿主。     

高效氨氮降解克雷伯菌筛选鉴定和适宜条件研究

为了获得高效氨氮降解克雷伯菌属菌株，试验采用16S rDNA基因序列鉴定方法筛选克雷伯菌属菌株，利用标准纳氏试剂分光光度法检测培养基内的氨氮含量，并计算氨氮降解率，确定高效氨氮降解菌株；结合形态学和系统进化树构建结果对菌株进行分类鉴定；通过对培养时间、温度和pH值的筛选，研究适宜培养条件；通过与其他高效氨氮降解克雷伯菌gt-1、gt-2、gt-3、ps-1、ps-2、sw-1、sw-2、sd-1、sd-2、sd-3进行比较，验证分离菌株的氨氮降解能力，通过动物试验和污水降解试验研究分离菌株的安全性和在污水内的氨氮降解能力，并检测了菌株的存活能力。结果表明：试验成功筛选出1株肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)M169-3,具有高效氨氮降解能力。在初始氨氮含量为250 mg/L的氨氮基础培养基A内，M169-3的最高氨氮降解率为58.41%,最适温度为35℃,最适pH值为7,适应性强；在初始氨氮含量为120 mg/L的氨氮基础培养基B内，M169-3的氨氮降解率为96.64%,与其他高效克雷伯菌比较差异不显著(P>0.05);在氨氮含量为387.35 mg/L...     

高产纤维素酶益生乳酸杆菌的分离鉴定

本研究通过从河南不同地区采集土壤、牛粪便、羊粪便等样品80余份,利用羧甲基纤维素钠MRS培养基分离能够产生纤维素酶的乳酸杆菌,通过耐酸、耐胆盐试验对菌株进行筛选,采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定了纤维素酶酶活,对筛选到的优良菌株进行了生理生化和分子鉴定。结果表明分离得到一株性能优良的菌株L.B01,显微形态呈长杆状、单个、成对或呈短链状;生理生化试验和16SrDNA序列测定鉴定该菌株为唾液乳酸杆菌,酶活为12.07U/mL。优良性能试验结果表明该菌株在pH3.0时仍能保持60%的活性,在1%的胆盐中仍具有较强的存活能力,为研究其作为饲料添加剂菌种奠定了良好基础。     

一株来自泡菜汁中的酵母菌分离鉴定

为丰富酵母菌菌种来源,研究从泡菜汁中分离获得1株疑似酵母菌,并对其编号。通过形态特征、生理生化鉴定和18S rDNA分子鉴定3种方法鉴定分离获得1株菌。结果表明,分离获得的菌株为毕赤酵母HEW-C206。     

丁酸梭菌的分离鉴定及生物学特性研究

试验旨在筛选畜禽可利用的优良菌株。从窖泥筛选出2株丁酸梭菌,经过形态学观察、生理生化试验、分子生物学鉴定及同源性比对确定丁酸梭菌,并比较2株丁酸梭菌进行生物学性能。结果显示,菌株J-1产酸种类及产酸量比菌株J-2多,菌株J-1的丁酸产量是菌株J-2的100倍,为411.7 mg/L;菌株J-1和菌株J-2在活菌率方面无明显差异;菌株J-1芽孢率比菌株J-2高17.16%,为77.64%;菌株J-1淀粉酶活性为19.35 mm,比菌株J-2高1.7倍。研究表明,菌株J-1在产酸种类和含量、活菌率、芽孢率、淀粉酶活性方面表现较好,可作为后续试验菌株。