免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法的研究

本研究采用免疫亲和层析净化-高效液相色谱法测定小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的回收率、检出限、精密度等方法性能。结果表明:当加标浓度在1.0~10.0μg/ml时,回收率范围为89.1%~99.7%;用0.5μg/ml标准品进样时,检出限为0.017 9μg/ml;当添加浓度为10.0μg/ml时,该测定方法的精密度为0.9%。可见,免疫亲和层析净化-高效液相色谱法具有检出限低、精密度高、回收率接近真实值、重现性好、操作简便等优点。     

液相-电喷雾质谱法测定饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的残留量

建立了液相-电喷雾串联质谱法检测饲料中的脱氧血腐镰刀菌烯醇(DON)。样品用磷酸盐缓冲液(pH 7.0)提取,经C18固相萃取净化、5%甲醇再溶解后进行LC-MS/MS分析。质谱采用电喷雾离子源,正离子多重反应监测模式进行定量和定性分析。色谱柱采用Phenomenex Luna 5μC18(2),流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液(30:70)。方法的检测限为20μg/kg,定量限为50μg/kg;在50、250、500μg/kg等3个浓度水平,回收率为75.4%~93.2%,相对标准偏差为5.74%～7.62%。     

液相色谱-串联质谱法测定猪可食性组织中脱氧雪腐镰刀菌烯醇残留量的方法研究

针对猪可食性组织中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的残留,建立了一种液相-电喷雾质谱检测法.样品用纯水提取,C18柱净化,体积分数为30%的甲醇洗脱后进行LC-MS/MS分析.色谱柱采用Phenomenex Luna 5μC18(2),流动相采用体积比为3∶7的甲醇-体积分数为0.1%甲酸水溶液.质谱采用电喷雾离子源,正离子多重反应监测模式进行定量和定性分析.方法的最低检测限为25μg.kg-1,最低定量限为50μg.kg-1;在50、100、500μg.kg-13个水平的回收率为80.2%～99.4%,相对标准偏差为2.47%～9.47%.     

玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的测定能力验证

[目的]通过实验室能力验证活动分析了影响玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)检测结果的主要因素。[方法]依据GB 5009.111—2016第二法:免疫亲和层析净化HPLC法检验并优化前处理条件。[结果]采用5倍稀释浓度提取1 h和3 mL/min的净化速度,能力验证样品中DON含量为571μg/kg, RSD为0.25%。[结论]通过了中国食品药品检定研究院组织实施的NIFDC-PT-228《玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定》能力验证,与中国食品药品检定研究院统计Z比分值为0.70,能力验证结果为满意,细化完善了国标测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇的操作,为广大检验检测人员提供参考。     

小麦及小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 脱氧雪腐镰刀菌烯醇,是由产毒真菌产生的一种次级代谢产物,因易引起猪的呕吐,又称为呕吐毒素,其主要产毒真菌为禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌等,主要污染小麦、大麦、燕麦、玉米等谷物. 世界范围内谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染多发易发、相当广泛,主要原因是谷物在田间经常受到其产毒真菌禾谷镰刀菌(导致小麦赤霉病和...     

液相色谱-串联质谱法评估不同脱毒剂对脱氧雪腐镰刀菌烯醇的脱毒效果

评估市场上不同脱毒剂对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)的脱毒效果,为饲料厂家及养殖户选择优质脱毒剂提供参考依据。从市场上收集了7种不同的脱毒剂(1~7号),对DON进行体外脱毒试验,采用液相色谱-串联质谱法分别测定脱毒前后霉变玉米中DON的含量,并计算其相应毒素的下降率。结果表明,不同厂家生产的脱霉剂脱毒效果差异显著,7种脱毒剂对DON的脱毒效果从好到差依次为7号、5号、6号、4号、1号、3号和2号。属酵母细胞壁类脱毒剂的5~7号对DON的脱毒效果比属铝硅酸盐类脱毒剂的1~4号明显,差异显著。     

免疫组织化学法定位猪肾脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是目前全球污染谷物最严重的真菌毒素之一。在所有的易感动物中,以猪最为敏感。该研究采用DON标准品,通过静脉注射的途径,研究该毒素在猪体内肾脏的分布情况,为毒素的残留提供依据。选用10头健康阉公猪,随机分为2组,一组经乳静脉注射DON,注射剂量为75μg/kg体质量,另一组经乳静脉注射生理盐水。注射完成后开始计时,并观察记录猪的反应情况,待30min后放血宰杀,并迅速取肾脏,采用免疫组化法定位肾脏中DON的分布情况。研究结果显示,染毒剂量75μg/kg体质量组,静注后约5～10min开始出现明显的异常反应。具体表现为:狂躁不安,不停的磨牙,咀嚼,之后大量流涎,随之出现呕吐等症状,这一过程的持续时间对该组猪来说存在个体差异。免疫组化法定位结果显示,在肾小囊的壁层见有DON的分布。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的分离和鉴定

【目的】分离筛选能够降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的细菌,以期能在该毒素的生物解毒处理中得到应用。【方法】用高产毒禾谷镰刀菌F-25接种灭菌的小麦籽粒,培养后获得DON毒素;然后以DON毒素为唯一碳源进行DON毒素降解菌的驯化富集培养,得到能够降解DON毒素的混合菌群,逐一对分离到的细菌进行DON毒素降解能力检测,得到能够降解DON毒素的菌株。【结果】筛选得到的菌株DDS-1对液体培养基中的DON毒素的降解能力达95%以上,显著高于其它菌株;从形态、生理生化特性以及16S rDNA序列进行分析,DDS-1菌株初步鉴定为徳沃斯氏菌Devosia sp.;把DDS-1添加到小麦饲料中后,饲料中的DON毒素降解率达到75.47%。【结论】选出的DON高效降解菌株徳沃斯氏菌,不但对液体培养基中的DON毒素具有很好的降解作用,对饲料中DON毒素也有很好的降解效果。这为真菌毒素的生物脱毒处理提供了可行的方法。     

免疫组织化学法定位猪脾脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

利用免疫组织化学法研究了脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)在猪脾脏分布定位,为DON体内残留及DON对免疫系统影响进一步研究提供依据。选用10头健康阉公猪,随机分为二组,一组经乳静脉注射DON标准品,注射剂量为75μg/kg体重,另一组经乳静脉注射相当体积生理盐水。注射完成后开始计时,并观察记录猪的反应情况,待30min后放血宰杀,并迅速取脾脏,4%多聚甲醛固定,经脱水、包埋及切片后,采用免疫组化法定位脾脏中DON的分布情况。免疫组化法定位结果显示,在75μg/kg体重给药组中,脾组织中的血管壁周围见有DON阳性反应颗粒,而对照组未见阳性反应颗粒。     

小麦中镰刀菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染现状与防控研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）,又称呕吐毒素,是由小麦赤霉病菌禾谷镰刀菌复合群（Fusarium graminearum species complex）产生的单端孢霉烯族毒素,毒素在小麦籽粒中累积。作为B型单端孢霉烯族毒素,DON可以引起呕吐、拒食、腹泻、出血甚至死亡, 对猪的危害尤其严重。近年来,小麦赤霉病在世界各地高频率流行,尤其在中国长江中下游小麦生产区以及黄淮部分小麦产区、美国中西部小麦主产区,导致小麦中DON毒素严重超标,并引发了严重的食品安全问题。本文对国内外小麦中DON毒素的污染现状、产毒镰刀菌种类及其化学型的分布及其趋势、毒素产生的调控机制以及小麦中DON毒素的防控途径进行了论述,希望有助于镰刀菌毒素污染小麦质量安全的风险评估、监管以及科学处置。     

浅析脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量随玉米生霉粒的变化关系

为了了解玉米脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量与生霉粒含量之间的关系,本文通过对新收获玉米在特定的温湿度条件下保存,并产生生霉,通过对不同生霉含量的玉米的脱氧雪腐镰刀菌烯醇进行测定,并对测定结果进行分析,总结出在特定温度下,玉米脱氧雪腐镰刀菌烯醇随玉米生霉粒含量的增加而增加,为粮食企业仓储环节安全储存建言献策。     

浅析脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量随玉米生霉粒的变化关系

为了了解玉米脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量与生霉粒含量之间的关系,本文通过对新收获玉米在特定的温湿度条件下保存,并产生生霉,通过对不同生霉含量的玉米的脱氧雪腐镰刀菌烯醇进行测定,并对测定结果进行分析,总结出在特定温度下,玉米脱氧雪腐镰刀菌烯醇随玉米生霉粒含量的增加而增加,为粮食企业仓储环节安全储存建言献策。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对PC12细胞凋亡的影响

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导PC12细胞凋亡及对相关基因Bcl-2、Bax、Bid mRNA和蛋白cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9表达水平的影响。[方法]用不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng·m L~(-1))对PC12细胞染毒24 h,采用透射电镜观察、流式细胞术、荧光定量PCR、Western-blot等方法,研究DON对PC12细胞的超微结构、凋亡率、凋亡相关基因及蛋白表达的影响。[结果]不同浓度的DON均可诱导细胞凋亡,各试验组细胞凋亡率均极显著高于对照组(P0.01),并随着染毒剂量的增加而升高,在1 000 ng·m L~(-1)时达到峰值;与对照组相比,各试验组Bax mRNA表达水平和Bax/Bcl-2值均极显著增加(P0.01),Bcl-2 mRNA表达水平在DON浓度超过500 ng·m L~(-1)时极显著下降(P0.01),而Bid mRNA表达水平在DON浓度超过250 ng·m L~(-1)时极显著下降(P0.01);Western-blot检测结果显示,各试验组cleaved-Caspase 9蛋白表达量均极显著高于对照组(P0.01),而cleaved-Caspase 3蛋白表达量在DON浓度超过500 ng·m L~(-1)时极显著增加。[结论]DON能够诱导PC12细胞发生凋亡,凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bid及蛋白Caspase3、Caspase9等参与了DON诱导PC12细胞凋亡的调控。     

饱和臭氧水对脱氧雪腐镰刀菌烯醇的降解研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是由禾谷镰刀菌产生的一种次生代谢物,其在粮谷类及其制品、饲料中污染较常见,对人畜有一定的急、慢性危害。因此,研究安全、有效降解食品和饲料中污染的脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法,对保证食品安全具有重要的意义。从充臭氧的时间、水的温度、以及p H等探讨了影响臭氧在水中饱和度的因素,以及采用饱和臭氧水对脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解的效果。实验结果表明:在50 mL超纯水中,以0.5 L/min的速度充臭氧5 min后,当温度为0℃,p H值为4.0时,臭氧浓度可以达到饱和,此时臭氧含量为73.2 mg/L。用1 mL该饱和臭氧水分别对5μg和10μg的DON标准品进行降解处理,其降解率分别达到99.0%和98.5%。然后采用该饱和臭氧水对面粉中加标的DON进行了降解试验,DON的降解率为82.6%。最后又对实际阳性的小麦、玉米、面粉3种样品中的DON进行了降解试验,经高效液相色谱测定其降解率在82.46%～83.70%。由此得出,饱和臭氧水能有效降解食品中的DON,降解后的DON含量均低于国家限量标准(1 mg/kg)。     

猪胃组织中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的液质联用检测

以脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素(Deoxynivalenol,DON)为检测对象,建立了一种检测猪胃组织中DON的液质联用分析方法。样品经乙腈:水(80:20,V/V)提取,varian Bond Elut Mycotoxin净化柱净化后,收集提取液并于45℃水浴氮气吹干,乙腈:水(20:80,V/V)溶解,经0.22μm微孔滤膜过滤后,以反相C18柱为色谱柱,甲醇、纯水溶液梯度洗脱为流动相,电离离子源电离后质谱检测。结果显示,DON在2～100 ng/mL范围内线性关系良好(r2>0.99);检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为2μg/g和5μg/g;低、中、高浓度(5、20、50μg/g)的回收率分别为71.8%、89.5%、87.4%,RSD分别为6.75%、9.82%、6.39%。表明该方法操作简单,灵敏度高,适用于猪胃组织中DON的检测。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对PC12细胞自噬的影响

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对PC12细胞自噬的影响。【方法】以不同质量浓度(0(CK),125,250,500,1 000和2 000ng/mL)的DON处理PC12细胞24h后,采用倒置显微镜、透射电镜、免疫荧光、荧光定量PCR、Western-blot等技术,研究DON对PC12细胞形态和超微结构、LC3聚点率及自噬相关基因classⅢPI3 K、Beclin-1、P62 mRNA和蛋白LC3Ⅱ、P62、classⅢPI3K表达的影响。【结果】不同质量浓度的DON均可诱导PC12细胞自噬,各试验组细胞自噬水平均高于对照组(CK),并随着DON质量浓度的增大而先增加后下降,在DON质量浓度为1 000ng/mL时达到峰值。与对照组相比,各试验组classⅢPI3 K mRNA和Beclin-1mRNA表达水平均极显著增高(P0.01),P62mRNA表达水平随着DON质量浓度的增加总体呈下降趋势,差异达显著(P0.05)或极显著(P0.01)水平。Western-blot结果显示,LC3Ⅱ蛋白表达量在DON质量浓度为1 000ng/mL时最高,与对照组相比,250~2 000ng/mL DON处理组的LC3Ⅱ蛋白表达量显著(P0.05)或极显著(P0.01)增加;500~2 000ng/mL DON处理组classⅢPI3K蛋白表达量较对照组显著(P0.05)或极显著(P0.01)增加,其中以1 000ng/mL DON处理组表达量最高;与对照组相比,不同质量浓度DON处理组P62蛋白表达量均极显著降低(P0.01),其中以1 000ng/mL DON处理组最低。【结论】DON能够诱导PC12细胞发生自噬,自噬相关基因classⅢPI3 K、Beclin-1、P62及蛋白LC3Ⅱ、P62、classⅢPI3K等参与了DON诱导PC12细胞自噬的调控。