屎肠球菌的研究进展

屎肠球菌属于肠球菌科,肠球菌属,是人类和动物体内的正常肠道菌群之一。在饲料应用上,屎肠球菌可作为应用广泛的一类益生菌,在宿主体内可以产生多种益生功效。通常情况下该菌并不会引起宿主发病,但当宿主机体免疫力下降时,便可能引起宿主动物发病。由于其具有较强的耐药性,目前并没有可以用来治疗屎肠球菌感染的特效药。本文主要针对屎肠球菌的培养特性、耐药性以及致病性等进行综述,并就目前新型快速检测方法的应用作一简单的介绍和探讨。     

鸽源屎肠球菌的分离鉴定及药敏试验

屎肠球菌属于肠球菌属中的一类,肠球菌是一种重要的条件致病菌,目前已发现的肠球菌种已经增至近32种,常见的是粪肠球菌（E.faecalis）、屎肠球菌（E.faecium）、鸟肠球菌（E.avium）、坚韧肠球菌（E.durans）等,其中具有临床意义的主要是粪肠球菌与屎肠球菌.肠球菌在动物和人的肠道中属于正常存在的菌群,但是异位寄生于各器官时也会引起相应的感染.肠球菌属中的粪肠球菌（旧称粪链球菌）以及屎肠球菌（旧称屎链球菌）一般情况下没有致病性,并且多年来一直用于微生态制剂加以利用,主要配合益生菌制成,可以替代抗生素预防和治疗动物的一些消化道疾病.但是粪肠球菌和屎肠球菌的某些菌株以及肠球菌的某些成员与动物致病性有关,如禽肠球菌（E.avium）、粪肠球菌（E.facalis）、屎肠球菌（E.faecium）、鸡肠球菌（E.gallinarum）.肠球菌可以感染各种年龄阶段的禽,其中屎肠球菌临床上能引起禽的败血症.屎肠球菌在鸡的饲养环境中也普遍存在,能够引起各种日龄的鸡发病[5].本次屎肠球菌感染鸽主要表现为精神沉郁、食欲下降、机体消瘦、腹泻、零星死亡,可初步断定为慢性感染的表现形式.     

屎肠球菌的功能特性及其在养猪业中的应用

正屎肠球菌是人类和动物体内的正常菌群之一,也是仔猪生产中常用的益生菌之一,对维持猪肠道菌群平衡、调节小肠绒毛发育、促进养分吸收、增强抗病能力等有多种益生功效。目前,屎肠球菌和粪肠球菌是最常用的益生肠球菌,也是猪肠道中的主要肠球菌,粪便中以屎肠球菌为主。我国《饲料添加剂品种目录(2013)》允许使用的饲料级微生物菌种也包括这两种菌。本文主要对屎肠球菌功能特性及其在养猪生产上的应用进行综述。     

屎肠球菌及其微生态制剂的研究进展

屎肠球菌作为一种潜在的新型饲用抗生素替代品,具有耐热、耐胃酸、耐胆盐、粘附力强、抑菌性和抗生素耐受性等优良的生物学特性,还能提高饲料的转化效率,增强动物机体的免疫力,降低腹泻率及死亡率,从而改善动物产品品质,屎肠球菌微生态制剂在畜禽养殖业中应用已十分广泛。其中微囊化屎肠球菌活菌制剂更是近几年的研究热点,其抗逆性强、稳定性高,可以作为饲用高活性微生态制剂应用于实际生产。本文主要阐述屎肠球菌的生物学特性及其在饲用微生态制剂中的研究进展。     

屎肠球菌的特性及其在畜牧生产中的应用研究进展

随着对畜产品需求的增加,人们越来越重视畜产品的安全性.屎肠球菌为常见乳酸菌,是近年来研究较多的益生菌,其代谢产物对病原菌的抑制、肠道菌群稳定和家畜生长具有重要意义,已广泛应用于畜牧生产中,但耐药性和致病性屎肠球菌的相继发现,引发了公众的担忧.因此,如何合理、规范应用屎肠球菌是其在畜牧生产中应用的关键.本文综述了屎肠球菌...     

羊源肠球菌属与屎肠球菌双重PCR检测方法的建立

[目的]建立羊源肠球菌属与屎肠球菌的双重PCR检测方法,对临床分离的菌株进行快速检测。[方法 ]设计肠球菌属特异性和屎肠球菌种特异性引物,建立双重PCR反应体系;评价双重PCR反应的特异性和敏感性;利用混合菌液制备模拟感染样品,确定双重PCR反应对模拟感染样品检测的特异性和敏感性。[结果]建立的双重PCR反应能够特异性的扩增肠球菌属(294 bp)和屎肠球菌(557 bp)DNA片段;该方法对常见的动物源细菌无交叉反应,对肠球菌属的最低检测量为5.71×10-5 ng/μL,对屎肠球菌的最低检测量为5.71×10-4ng/μL;双重PCR反应能够特异性的检测模拟感染样品中的肠球菌属和屎肠球菌,对于模拟感染样品中的屎肠球菌检测量为1×101CFU/m L。[结论]建立的双重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高的特点,为快速鉴定屎肠球菌提供了快速、准确的方法。     

鲜蛋表面屎肠球菌耐药性及万古霉素vanA基因检测

为了研究新鲜鸡蛋表面屎肠球菌耐药性和万古霉素A(vanA)基因的携带情况,试验在养鸡场收集新鲜鸡蛋,分离蛋壳表面的屎肠球菌,用16S rDNA通用引物对分离的屎肠球菌进行种属鉴定,K-B纸片琼脂扩散法进行耐药性分析,并检测耐万古霉素屎肠球菌携带vanA基因的情况。结果表明:革兰氏染色镜检可见革兰氏阳性单个、成对或短链状排列的圆形菌体,符合屎肠球菌的染色和形态特征;从200枚鸡蛋样品中分离到38株屎肠球菌,分离率为19%;分离到的屎肠球菌对14种抗生素表现出不同程度的耐药性,耐药谱广,最多发现8重耐药菌;在5株耐万古霉素的菌株中检测到了vanA基因。说明新鲜鸡蛋蛋壳表面的屎肠球菌对抗生素耐受性较高,对屎肠球菌特别是耐万古霉素屎肠球菌的监测具有公共健康意义,需要进一步调查以评估食源性传播给人类带来的风险。     

猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR快速鉴定方法的建立

粪肠球菌和屎肠球菌是引起猪感染发病的优势肠球菌种,以肠球菌的16S rRNA基因设计属特异性引物,利用SodA基因多态性设计种特异性引物,同时优化反应条件,建立了能同时测定猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR方法。通过特异性和敏感性分析,该方法能扩增出肠球菌属特异性片段及粪肠球菌和屎肠球菌种特异性片段;对粪肠球菌敏感性为0...     

乌鲁木齐市宠物源粪肠球菌和屎肠球菌耐药性及耐药基因检测

为了解乌鲁木齐市宠物源粪肠球菌和屎肠球菌对临床常用抗菌药物的耐药性及其耐药基因携带情况,在乌鲁木齐市多家宠物医院、警犬基地、犬养殖基地采集宠物(犬和猫)直肠粪样449份进行粪肠球菌和屎肠球菌的分离鉴定,通过琼脂稀释法测定10种抗菌药物的最小抑菌浓度,利用PCR方法检测11种耐药基因。结果分离鉴定出宠物源粪肠球菌和屎肠球菌共计123株,其中粪肠球菌81株,屎肠球菌42株。宠物源粪肠球菌和屎肠球菌对四环素和庆大霉素的耐药率较高,对阿米卡星、恩诺沙星和环丙沙星呈不同程度耐药,对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林、万古霉素以及利奈唑胺高度敏感,仅部分屎肠球菌对亚胺培南表现耐药。检出aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、tetM、tetA和optrA耐药基因;其余被检耐药基因未检出。耐药粪肠球菌以同时携带aac(6′)/aph(2″)+aph(3′)-Ⅲ+tetM耐药基因为主;耐药屎肠球菌以携带tetM耐药基因为主。宠物源粪肠球菌与屎肠球菌对被检抗菌药物存在不同程度耐药,均对四环素类药物耐药最严重、对应耐药基因检出率也最高。建议临床治疗应根据细菌耐药性结果进行合理用药,并持续加强对宠物源肠球菌耐药性监测。     

饲粮中添加屎肠球菌对断奶仔猪生长性能、肠道菌群和免疫功能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加屎肠球菌对断奶仔猪生长性能、肠道菌群和免疫功能的影响。选用255头(35±1)日龄断奶的"杜×长×大"三元杂交仔猪,随机分为5个组,每个组3个重复,每个重复17头仔猪。对照组饲喂基础饲粮(不添加抗生素和屎肠球菌);抗生素组在基础饲粮中添加8 mg/kg黄霉素和90 mg/kg阿散酸;屎肠球菌3个试验组在基础饲粮中分别添加100、300、500 mg/kg屎肠球菌。试验期为35 d。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加屎肠球菌对仔猪平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)、料重比(F/G)没有显著影响(P>0.05),但添加100、300 mg/kg的屎肠球菌有提高仔猪ADFI的趋势(P>0.05),添加500 mg/kg的屎肠球菌有降低仔猪F/G的趋势(P>0.05)。与抗生素组相比,饲粮中添加屎肠球菌对仔猪ADG、ADFI、F/G均无显著影响(P>0.05)。2)与对照组相比,饲粮中添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著增加仔猪盲肠中乳酸杆菌的数量(P<0.05);与抗生素组相比,饲粮中添加100、300、500 mg/kg的屎肠球菌对其数量没有显著影响(P>0.05)。与对照组相比,饲粮中添加500 mg/kg的屎肠球菌显著降低仔猪结肠中大肠杆菌的数量(P<0.05),添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著增加仔猪结肠中乳酸杆菌数量(P<0.05);与抗生素组相比,饲粮中添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著增加仔猪结肠中乳酸杆菌数量(P<0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加300 mg/kg的屎肠球菌显著提高仔猪脾脏重量和脾脏指数(P<0.05)。与抗生素组相比,饲粮中添加300、500 mg/kg的屎肠球菌可显著提高仔猪脾脏重量(P<0.05)。4)与对照组相比,饲粮中添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著提高仔猪血液中淋巴细胞数量及淋巴细胞比率(P<0.05),添加100、300、500 mg/kg的屎肠球菌显著提高血清中免疫球蛋白G(IgG)含量(P<0.05),添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著提高血清中免疫球蛋白M(IgM)含量(P<0.05)。与抗生素组相比,饲粮中添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著提高仔猪血液中淋巴细胞比率及血清中IgM含量(P<0.05),添加100、300、500 mg/kg的屎肠球菌显著提高血清中IgG含量(P<0.05)。综上所述,仔猪饲粮中添加屎肠球菌可以改善仔猪生长性能,维持仔猪肠道菌群平衡,有效增强仔猪免疫力,其中以添加500 mg/kg效果最好。     

2017-2021年上海市动物源粪肠球菌、屎肠球菌耐药性情况变迁分析

为了解上海地区动物源粪肠球菌、屎肠球菌对常见抗菌药物的耐药及其最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)变迁情况,采用微量肉汤稀释法对近五年采集的粪肠球菌、屎肠球菌进行10种常见抗菌药物敏感性测试。结果表明,458株粪肠球菌及283株屎肠球菌对头孢西丁、头孢噻呋及氧氟沙星耐药率较高(均高于60%),对青霉素、阿莫西林/克拉维酸及万古霉素的耐药率较低(均低于11%),粪肠球菌耐药率整体高于屎肠球菌,两者对氧氟沙星、头孢噻呋、氟苯尼考、庆大霉素、利奈唑胺、恩诺沙星的耐药率存在较大差异(耐药率差异为15%～44%)。五年间,粪肠球菌对阿莫西林/克拉维酸、氧氟沙星的MIC₅₀及MIC₉₀均呈下降趋势;屎肠球菌对阿莫西林/克拉维酸、头孢西丁及氟苯尼考的MIC₅₀及MIC₉₀均呈下降趋势。研究表明,近年来上海地区动物源粪肠球菌、屎肠球菌的耐药情况有好转趋势,仍需继续加强肠球菌耐药性监测。     

饲粮中添加屎肠球菌对肉鸡生长性能、血清生化指标、肠道形态和抗氧化功能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同剂量的屎肠球菌对肉鸡生长性能、血清生化指标、肠道形态和抗氧化功能的影响。试验选用150只1日龄健康罗斯308肉鸡，随机分为3个组，每组5个重复，每个重复10只鸡（公母各占1/2）。对照组饲喂基础饲粮，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组分别在基础饲粮中添加500和1 000 mg/kg屎肠球菌菌粉（活菌数为3.46×108CFU/g）。试验期28 d。结果表明：1）与对照组相比，饲粮中添加不同剂量的屎肠球菌对肉鸡各阶段生长性能均无显著影响（P>0.05）。2）与对照组相比，高剂量屎肠球菌组肉鸡血清总蛋白含量显著提高（P<0.05），血清磷含量有提高的趋势（P=0.054）；低剂量屎肠球菌组肉鸡血清钙含量显著降低（P<0.05）。3）与对照组相比，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组肉鸡十二指肠和空肠绒毛高度与隐窝深度比值显著提高（P<0.05），十二指肠隐窝深度显著降低（P<0.05）。4）与对照组相比，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组肉鸡血清和十二指肠过氧化氢含量显著降低（P<0.05），空肠过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶...     

湖南省猪源肠球菌的分离鉴定

为了从猪粪便中分离出肠球菌,采用6.5%NaCl pH 9.6 TSB和麦康凯血平板两种方法分别对80个健康猪源样品和53个流行性腹泻猪源样品进行检测。结果显示,共分离出115株肠球菌,其中健康猪源肠球菌72株,包括粪肠球菌2株,屎肠球菌30株,其他肠球菌40株,检测率为90%;从流行性腹泻中共分离到43株肠球菌,其中粪肠球菌9株,屎肠球菌29株,其他肠球菌5株,检出率为81.1%,前者方法中其他肠球菌的检出率比较高,后者方法屎肠球菌的检出率比较高。两种方法各有侧重,为分离不同菌种的肠球菌提供依据。     

高产细菌素屎肠球菌B_(13)在山羊体内的定植研究

为了研究屎肠球菌B13在动物体内定植的演变规律,试验选用日龄、体重相近的乐至黑山羊小羔羊12只,随机分为2组,对照组饲喂代乳料(不添加益生菌),试验组前2周饲喂代乳料+高产细菌素屎肠球菌B13培养物(1×1010cfu/d·只),第3周开始只饲喂代乳料,试验期间连续采集羔羊粪便5周,进一步应用荧光定量PCR的方法监测屎肠球菌B13在羔羊粪便中的数量变化。结果表明:试验组羔羊肠道内屎肠球菌数量在试验期间呈现先上升后下降的变化趋势,对照组变化不大。在停喂益生菌制剂2周后,屎肠球菌仍呈规律性变化,且始终显著高于对照组(P0.05)。与对照组相比,试验组羔羊腹泻率降低了47.40%(P0.05)。说明高产细菌素屎肠球菌B13能够在山羊体内稳定定植,并对维持羔羊消化道微生态环境发挥重要作用。     

MALDI-TOF MS对猪源肠球菌的快速检测

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)和MALDI-Biotype 3软件对河南分离株肠球菌进行快速鉴定及同源性分析。使用甲酸提取法按照MALDI-TOF-MS要求进行样品制备,点靶并获取样品质谱图;运用Biotyper分析软件对所获取的质谱图进行鉴定和同源性分析。同时用Vitek-2全自动微生物鉴定系统进行辅助分析鉴定。结果显示,应用MALDI-TOF-MS方法鉴定的33株肠球菌中粪肠球菌13株,屎肠球菌20株,且可信度分值大于2.300,能完全鉴定到种的水平。PCA聚类分析显示,与屎肠球菌相比,粪肠球菌的亲缘关系更近一些。而Vitek-2对屎肠球菌的鉴定结果差异较大。结果表明,MALDI-TOF MS对肠球菌的快速鉴定和同源性分析,操作快速简便,准确率高,有利于兽医临床快速诊断,将成为兽医微生物常用诊断工具。     

雏鸡屎肠球菌感染的病原学与分子生物学诊断

为了调查雏鸡屎肠球菌感染,从疑似病雏肝脏分离病菌,进行菌落和菌体形态学观察,16SrDNA序列比对,特异PCR分析和病理学观察。结果显示,分离株菌落较小圆形,菌体为圆形或椭圆形,革兰染色阳性。分离株与GenBank中屎肠球菌同源性为99.6%~98.7%,与其他菌株的同源性均小于97%。PCR扩增条带为特异屎肠球菌的目的片段。经分子生物学方法结合菌落及菌体的形态学,该菌被鉴定为屎肠球菌。病理学观察发现,肝脏肿大、出血,肝细胞质疏松并且致病力试验复制出与临床相似病例,这些提示该病雏为屎肠球菌感染。     

屎肠球菌(SF68)对小鼠免疫功能的影响

服用适宜剂量的益生菌有益于人体和动物的健康。本试验旨在观察屎肠球菌(SF68)对BALB/c小鼠肠道定植和免疫功能的影响。给6周龄雌性BALB/c小鼠经口罐服屎肠球菌(SF68)。试验结果表明,饲喂屎肠球菌小鼠粪中总厌氧菌和乳酸菌增加(P<0.05),而粪便肠杆菌数量降低(P<0.05)。饲喂屎肠球菌后,小鼠外周血液双阳性(DP)细胞比例,血浆IgG浓度和脾细胞培养上清液中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)及干扰素-γ(IFN-γ)水平显著增加(P<0.05)。通过本试验证明屎肠球菌SF68可影响小肠微生物菌群并可调节机体的免疫反应说明屎肠球菌具有存活的益生菌特性,可有效调节机体免疫功能。     

屎肠球菌NCIMB11181对鼠伤寒沙门菌感染肉鸡生产性能、肠道微生物菌群和血液抗氧化功能的影响

本试验旨在研究饲粮添加屎肠球菌对鼠伤寒沙门菌感染肉鸡的生产性能、肠道微生物菌群和血液抗氧化功能的影响。试验选取432只1日龄罗斯308雄性肉鸡,随机分为4个试验组,每组6个重复,每个重复12只鸡。分别在各试验组基础饲粮中添加0、100、200、300 mg/kg屎肠球菌。在11,12日龄时,各个试验组口服鼠伤寒沙门菌(1×109CFU/m L,1 m L/只鸡)。结果:(1)与无添加组相比,饲粮中添加屎肠球菌可显著提高1~21 d,22~35 d和1~35 d日采食量和日增重(P<0.05);(2)与无添加组相比,添加屎肠球菌可显著降低感染前期有害菌大肠杆菌和沙门菌的数量(P<0.05),能显著提高感染前期和后期屎肠球菌的数量(P<0.05);(3)与无添加组相比,屎肠球菌的添加能显著降低感染前期GSH-Px和MDA含量(P<0.05);在感染后期,屎肠球菌组MDA含量显著降低(P<0.05)。表明饲粮中添加屎肠球菌可以缓解鼠伤寒沙门菌感染导致的肉鸡饲料转化效率下降、肠道菌群失调及机体的氧化应激损伤。肉鸡在沙门菌感染的情况下,饲粮中屎肠球菌的适宜添加剂量为200 mg/kg。     

热灭活屎肠球菌及其活菌对仔猪腹泻率、消化酶活性和脏器指数的影响

为了研究屎肠球菌对哺乳期仔猪的益生作用,试验选用健康的杜×长×大新生仔猪9窝,将其随机分为对照组、屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组,每组3窝。从出生开始至6日龄,对照组、屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组仔猪分别经口灌服无菌脱脂乳、含屎肠球菌热灭活菌(浓度为1×108cfu/m L)的脱脂乳和含屎肠球菌活菌(浓度为1×108cfu/m L)的脱脂乳,10 m L/(头·d)。仔猪于7日龄开始饲喂教槽料,21日龄断奶。分别于7日龄和21日龄时从每窝中选出1头接近平均体重的仔猪屠宰,取肝脏和脾脏,采集空肠黏膜,计算并分析仔猪腹泻率、消化酶活性和脏器指数。结果表明:与对照组相比,灭活菌和活菌都不影响哺乳期仔猪的体重和日增重(P0.05);屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组仔猪第3周的腹泻率都下降至0,整个哺乳期腹泻率分别下降77.44%(P=0.078)和92.03%(P0.05),两个益生菌组间差异不显著(P0.05);屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组的21日龄仔猪空肠麦芽糖酶活性分别增加9.67倍(P0.05)和11.29倍(P=0.01),活菌还显著提高脂肪酶含量1.09倍(P0.05),但两个益生菌组间差异不显著(P0.05);灭活菌不影响仔猪肝脏指数和脾脏指数,活菌也不影响肝脏指数及7日龄仔猪脾脏指数,但显著降低21日龄仔猪脾脏指数(P0.05)。说明热灭活益生屎肠球菌对哺乳期仔猪的生长、腹泻率、小肠消化酶活性以及肝脏和脾脏指数都没有负面影响,而且在很大程度上与活菌的作用相似,具有替代活菌的潜力。     

屎肠球菌和植物乳杆菌制剂对葡萄籽配合饲料发酵产物的影响

试验旨在研究屎肠球菌和植物乳杆菌对葡萄籽配合饲料发酵产物的影响。试验采用正交试验设计,分为屎肠球菌组、植物乳杆菌组、1∶1屎肠球菌和植物乳杆菌组、2∶1屎肠球菌和植物乳杆菌组和1∶2屎肠球菌和植物乳杆菌组;分别在20、25和30℃下发酵24、48、72和96 h,测定发酵产物常规养分、pH值和氨态氮/总氮（AN/TN）,确定适宜的发酵参数。结果表明：在相同条件下,48 h发酵产物常规养分含量明显高于发酵24、72、96 h;1∶2的屎肠球菌和植物乳杆菌组萄籽配合饲料酸性洗涤纤维（ADF）和中性洗涤纤维（NDF）含量显著低于其他试验组（P<0.05）;各试验组pH值差异不显著（P>0.05）;发酵温度为20℃时的粗蛋白质与粗脂肪含量高于25、30℃的发酵结果。研究表明,屎肠球菌与植物乳杆菌比为1∶2,在20℃发酵48 h,是葡萄籽配合饲料的适宜发酵参数。