谷氨酰胺对急性肺损伤小鼠MUC5AC的调节及其对肺脏的保护作用

旨在探讨谷氨酰胺(GLN)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤小鼠黏蛋白MUC5AC表达的调节作用及其对肺损伤的保护作用。选用雌性ICR小鼠32只随机分成4组:正常对照组(PBS组)、谷氨酰胺组(GLN)、内毒素组(LPS)、谷氨酰胺+内毒素组(GLN+LPS)。采用气管滴注LPS的方法刺激小鼠建立急性肺损伤(ALI)模型,在滴注LPS12 h后采集肺组织进行湿干重比值,IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8、HSP70、MUC5AC的mRNA水平,IL-6、TNF-α含量以及HSP70、MUC5AC蛋白含量的测定,通过HE染色观察肺组织形态学变化。结果显示:与对照组相比,LPS组MUC5AC、IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA表达量极显著升高,HSP70 mRNA表达量极显著降低;MUC5AC蛋白的表达量极显著增加,HSP70蛋白的表达量极显著降低;IL-6、TNF-α含量极显著升高,肺组织湿干比值极显著增加;肺泡破裂较严重,细支气管黏液分泌增加且可见杯状细胞部分脱落;与LPS组相比,GLN+LPS组IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA表达量极显著降低,MUC5AC、IL-8 mRNA表达量显著降低,HSP70 mRNA表达量显著升高;MUC5AC蛋白的表达量显著减少,HSP70蛋白的表达量显著升高,IL-6、TNF-α含量极显著降低;肺组织湿干比值显著减少;部分肺泡破裂,杯状细胞排列整齐,细支气管黏液分泌量减少。结果表明:静脉注射谷氨酰胺能减少LPS诱导的小鼠肺组织中MUC5AC、IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA和MUC5AC蛋白的表达,减少IL-6、TNF-α的含量,增加HSP70 mRNA和HSP70蛋白的表达,减轻肺组织损伤;谷氨酰胺可能通过增加HSP70的表达来对LPS诱导的急性肺损伤小鼠起到保护作用。     

饲粮中谷氨酰胺添加水平对断奶至3月龄獭兔毛皮品质和肠道屏障的影响

本试验旨在研究饲粮中谷氨酰胺添加水平对断奶至3月龄獭兔毛皮品质和肠道屏障的影响。选用体重相近的断奶獭兔180只,随机分为5组,每组36个重复,每个重复1只兔。各组分别饲喂谷氨酰胺添加水平为0(对照)、0.3%、0.6%、0.9%和1.2%的试验饲粮。预试期7 d,正试期56 d。结果表明:饲粮中谷氨酰胺添加水平对生长獭兔毛皮面积、毛皮重量、被毛长度和被毛厚度无显著影响(P0.05)。饲粮中谷氨酰胺添加水平对生长獭兔十二指肠绒毛高度/隐窝深度值有显著影响(P0.05)。与对照组相比,饲粮中添加0.9%谷氨酰胺显著升高了空肠中闭合小环蛋白mRNA的表达量(P0.05),显著降低了空肠中丙酮酸激酶mRNA的表达量(P0.05);此外,饲粮中添加0.9%谷氨酰胺显著增加了十二指肠黏膜中分泌性免疫球蛋白A含量(P0.05)。综上所述,饲粮中谷氨酰胺添加水平没有影响到生长獭兔的毛皮品质,但改善了肠道机械屏障和免疫屏障功能。在本试验条件下,断奶至3月龄獭兔饲粮中谷氨酰胺适宜的添加水平为0.9%。     

罗伊氏乳杆菌LR1对断奶仔猪血清生化指标和肠道营养物质转运载体mRNA表达的影响

本试验旨在研究罗伊氏乳杆菌LR1对断奶仔猪血清生化指标和肠道营养物质转运载体mRNA表达的影响。选取144头初始体重为(6.49±0.01) kg的21日龄杜×长×大断奶仔猪,随机分为3组,每组8个重复,每个重复6头。对照组饲喂基础饲粮,抗生素组饲喂基础饲粮+100 mg/kg喹乙醇+75 mg/kg金霉素,罗伊氏乳杆菌组饲喂基础饲粮+5×1010CFU/kg罗伊氏乳杆菌LR1。试验期为14 d。结果显示:1)与对照组相比,饲粮添加抗生素显著提高了血清葡萄糖(GLU)的含量(P0.05),且显著降低了血清尿素氮(UN)的含量(P0.05)。2)与对照组相比,饲粮添加罗伊氏乳杆菌LR1显著提高了十二指肠胃动素(MLN)和空肠胆囊收缩素(CCK)的mRNA表达量(P0.05);饲粮添加抗生素显著提高了十二指肠MLN的mRNA表达量(P0.05)。3)与对照组相比,饲粮添加罗伊氏乳杆菌LR1显著提高了十二指肠Na+依赖性谷氨酰胺载体2(ASCT2)、阳离子氨基酸运载体1(CAT1)、小肽转运体1(PepT1)和空肠中性和碱性氨基酸转运载体(rBAT)以及空肠与回肠y+L氨基酸转运体1 (y+LAT1)的mRNA表达量(P 0.05);饲粮添加抗生素显著提高了空肠y+LAT1、CAT1、PepT1和空肠与回肠哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的mRNA表达量(P0.05)。4)与对照组相比,饲粮添加罗伊氏乳杆菌LR1显著提高了十二指肠小肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、乙酰辅酶A羧化酶α(ACCα)、脂肪酸合成酶(FASN)和十二指肠与空肠脂肪酸结合蛋白3(FABP3)以及十二指肠、空肠与回肠过氧化物体增殖物激活受体γ(PPARγ)的mRNA表达量(P0.05);饲粮添加抗生素显著提高了空肠ACCα的mRNA表达量(P0.05)。5)与对照组相比,饲粮添加罗伊氏乳杆菌LR1显著提高了空肠和回肠钠-葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)的mRNA表达量(P0.05);饲粮添加抗生素显著提高了十二指肠SGLT1、钠-葡萄糖协同转运蛋白3(SGLT3)的mRNA表达量(P0.05)。综上所述,饲粮中添加5×1010CFU/kg罗伊氏乳杆菌LR1对断奶仔猪的肠道营养物质转运具有良好的促进作用,表现为促进断奶仔猪肠道物理消化和化学消化,促进小肽、氨基酸及脂肪酸吸收转运,增强脂肪酸的合成。罗伊氏乳杆菌LR1在替代猪饲用抗生素方面具有巨大潜力,可用于开发新型猪饲料抗生素替代物。     

维生素E对日本沼虾生长性能、抗氧化性能及抗氨氮胁迫能力的影响

本试验旨在研究饲料中维生素E水平对日本沼虾(Macrobrachium nipponense)幼虾生长性能、抗氧化性能和抗氨氮胁迫能力的影响。选择健壮、平均初始体重为(0.119±0.004)g的900只日本沼虾幼虾,随机分为6个组,每组3个重复,每个重复50只。以维生素E乙酯为添加形式,配制6组维生素E实际含量分别为18.31、37.94、66.07、120.25、212.68和388.96 mg/kg的半纯化饲料(分别记为VE1、VE2、VE3、VE4、VE5和VE6组),饲喂8周,随后进行24 h氨氮胁迫试验。结果显示:1)各组日本沼虾成活率(SR)无显著差异(P0.05);随饲料维生素E水平的增加,日本沼虾增重率(WGR)呈先增加后下降的变化趋势,VE4组最高,且显著高于VE1组(P0.05);饲料系数(FCR)变化趋势则与WGR相反,VE4组最低,且显著低于VE1组(P0.05)。2)氨氮胁迫前,各组日本沼虾肝胰腺中丙二醛(MDA)含量随饲料维生素E水平的增加呈先下降后上升的变化趋势,在VE3组达到最低,且显著低于VE1、VE5和VE6组(P0.05);各组日本沼虾肝胰腺总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和总抗氧化力(T-AOC)随饲料维生素E水平的增加呈先上升后下降的变化趋势。VE1和VE6组日本沼虾硫氧还蛋白(Trx)mRNA表达量较高,硫氧还蛋白还原酶(TrxR)mRNA表达量则较低。VE3组热休克蛋白60(HSP60)mRNA表达量显著低于其他各组(P0.05),VE1组热休克同源蛋白70(HSC70)mRNA表达量显著低于其他各组(P0.05),VE1和VE2组热休克蛋白90(HSP90)mRNA表达显著高于其他各组(P0.05)。3)氨氮胁迫后,各组日本沼虾肝胰腺SOD、CAT、GSH-Px活力,MDA含量,Trx、TrxR和HSC70 mRNA表达量的变化趋势与胁迫前相似,HSP60和HSP90 mRNA表达量变化与胁迫前相反。氨氮胁迫可降低日本沼虾肝胰腺GSH-Px活力、T-AOC及Trx、TrxR mRNA表达量,提高MDA含量及VE4、VE5和VE6组SOD活力。由此可见,饲料中添加120.25 mg/kg维生素E对日本沼虾的生长具有积极的促进作用,饲料中添加66.07、120.25和212.68 mg/kg的维生素E可提高日本沼虾抗氧化性能和抗氨氮胁迫能力。     

TNF-α对牦牛卵母细胞HIF-1α和HSP70的表达及后续胚胎发育能力的影响

旨在研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对牦牛卵母细胞体外成熟和对低氧诱导因子1α(HIF-1α)、热休克蛋白70(HSP70)的表达以及后续胚胎发育能力的影响。在牦牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的TNF-α(最终浓度分别为0、10、25、50 ng·mL^-1),牦牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)培养成熟后,统计其卵母细胞成熟率及体外受精后早期胚胎的发育率,采用RT-PCR扩增牦牛 HIF-1α、 HSP 70基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)和免疫荧光染色技术检测HIF-1α、HSP70在基因和蛋白水平的表达情况。结果发现:1)成熟液中加入TNF-α,卵母细胞的成熟率提高,且随着TNF-α浓度的升高,卵母细胞的成熟率、卵裂率和囊胚率逐渐升高,当TNF-α浓度为 25 ng·mL^-1 时,卵母细胞的成熟率和卵裂率达到最高,分别为84.98%和66.85%,而囊胚率也达到了21.48%,均显著高于对照组( P <0.05);2)随着TNF-α浓度的升高, HIF-1α的表达量逐渐降低,对照组 HIF-1α的表达量极显著高于其他组(P <0.01),50 ng·mL^-1 TNF-α组 HIF-1α的表达量极显著低于其他组(P <0.01),HIF-1α在卵丘细胞和卵母细胞上均有表达;3)25 ng·mL^-1 TNF-α组的HSP 70表达量最高,极显著高于其他组(P <0.01),而当TNF-α达到50 ng·mL^-1 时,HSP 70的表达量最低。综上表明,在牦牛卵母细胞体外成熟过程中,TNF-α明显提高了卵母细胞的发育能力,同时还诱导了HSP 70的表达,抑制了HIF-1α的表达,为今后探讨TNF-α、 HIF-1α和HSP70在牦牛生殖过程中发挥的作用以及对胚胎发育的影响提供理论依据。     

夏季高温条件下饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅生长性能、脂质代谢及肝脏中热休克蛋白70基因表达的影响

本试验旨在研究夏季高温条件下饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅生长性能、脂质代谢及肝脏中热应激蛋白70(HSP70)基因表达的影响。挑选28日龄、体重相近的健康皖西白鹅150只,随机分成3组,即对照组、试验1组和试验2组,每组5个重复,每个重复10只鹅。对照组试验鹅饲喂基础饲粮,试验1组和试验2组试验鹅分别饲喂在基础饲粮中添加100和200 mL/kg刺梨提取物的试验饲粮。预试期7 d,正试期14 d,试验期间最高气温37℃,最低气温24℃,日平均气温31.6℃。饲喂2周后,每个重复挑选1只鹅屠宰,采集血样,并分离出肝脏,测定血清脂质代谢指标和肝脏中HSP70基因的相对表达量。结果表明:饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅的平均日采食量和平均日增重均无显著影响(P0.05),但添加200 mL/kg刺梨提取物可显著降低料重比(P0.05);饲粮中添加100和200 mL/kg刺梨提取物均可显著提高血清高密度脂蛋白含量(P0.05),但对血清总胆固醇和甘油三酯含量无显著影响(P0.05);与对照组相比,试验1组和试验2组肝脏中HSP70基因的相对表达量均极显著提高(P0.01),同时试验1组肝脏中HSP70基因的相对表达量还极显著高于试验2组(P0.01)。由此得出,在夏季高温条件下,在皖西白鹅饲粮中添加刺梨提取物可提高饲料转化率、调节脂质代谢、上调肝脏中HSP70基因的表达,具有较明显的抗应激效果,且添加量为100 mL/kg时的抗应激效果优于添加量为200 mL/kg时。     

急性热应激鹅心和肝和肺及肾脏组织中HSP70 mRNA及蛋白的表达

选取1日龄健康雁鹅60只,随机分为6组,单笼饲养于环控仓内。6周龄时,A组置于(22±1)℃作为对照,B、C、D、E、F组分别施于2、4、6、8 h和10 h(40±1)℃的急性热应激处理,处理后立即剖杀,取心、肝、肺和肾脏组织,实时荧光定量PCR测定HSP70 mRNA表达量,免疫组织化学方法测定HSP70表达量。结果表明:急性热应激处理可显著提高各组织中HSP70 mRNA及HSP70蛋白的表达水平,但不同组织出现显著变化的时间以及随热应激时间延长的变化规律存在差异。心脏组织HSP70 mRNA和蛋白表达量均在热应激2 h后出现显著升高(P0.05),热应激4 h后达到最高值,8 h后降至对照组水平,遵循二次曲线回归模式;肝脏热应激4~10 h间HSP70及其mRNA均显著高于对照组(P0.05),但未表现出显著的线性与二次回归趋势;肺脏HSP70 mRNA表达水平在热应激2~10 h间显著高于对照组(P0.05),HSP70则从热应激4 h起才显著升高,但二者随热应激时间延长均呈显著的线性升高规律;与肺相似,肾脏HSP70及其mRNA表达量随热应激时间的变化趋势也遵循线性回归模式,两者均在热应激4~10 h显著升高(P0.05)。     

玉米赤霉烯酮对后备母猪子宫和卵巢抗氧化和炎症指标及相关基因表达的影响

试验旨在研究玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEA)对后备母猪子宫和卵巢抗氧化和炎症指标及相关基因表达的影响。选择胎次和体重((23.20±0.68) kg)相近的长×大二元后备母猪48头,随机分为4组,每组设12个重复,每个重复1头母猪。对照组(CON组)饲喂基础饲粮,试验组(T1、T2、T3组)饲喂在基础饲粮中分别添加200、800、1600μg·kg~(-1)ZEA的试验饲粮。预试期7 d,正试期40 d。结果如下:1)与CON组相比,T3组血清T-AOC和SOD活性显著降低(P0.05),MDA水平显著升高(P0.05)。2)与CON组相比,子宫组织中,T2和T3组T-AOC活性显著降低(P0.05),T3组SOD活性极显著降低(P0.01),卵巢组织中,T3组T-AOC活性、T2组GSH-Px和SOD活性显著降低(P0.05),T3组MDA水平显著升高(P0.05)。3)与CON组相比,T2组血清TNF-α和IL-4水平显著升高(P0.05),T1～T3组血清IL-10水平显著降低(P0.05)。4)与CON组相比,子宫组织中,T2组IL-1β水平显著升高(P0.05),T1和T3组IL-10水平显著降低(P0.05)。卵巢组织中,T2组TNF-α水平显著升高(P0.05),T1～T3组IL-4水平显著升高(P0.05)。5)子宫组织中,T3组Cu/Zn-SOD mRNA的相对表达显著低于CON组(P0.05),T2组IL-1βmRNA的相对表达显著高于CON组(P0.05)。6)卵巢组织中,T3组GSH-Px mRNA的相对表达显著低于CON组(P0.05),T2组IL-1βmRNA的相对表达显著高于CON组(P0.05)。综上所述,ZEA能通过抑制SOD和GSH-Px的表达与合成,降低后备母猪子宫和卵巢的抗氧化性能,并引起氧化应激。ZEA能通过促进TNF-α和IL-1β表达与合成引起子宫和卵巢的炎症反应,抑制IL-10的表达与合成从而抑制两组织的抗炎反应。     

饲粮能量和蛋白质水平对滩羊小肠中小肽和氨基酸转运载体mRNA表达量的影响

本试验旨在研究饲粮能量和蛋白质水平对滩羊小肠中小肽和氨基酸转运载体mRNA表达量的影响。选取112只健康、体重相近的滩羊,随机分成4组,每组4个重复,每个重复7只羊。标准水平的饲粮能量和蛋白质水平参考《肉羊饲养标准》(NY/T 816—2004),各组试验滩羊分别饲喂不同能量和蛋白质水平饲粮:0.84×标准水平(Ⅰ组)、0.96×标准水平(Ⅱ组)、1.08×标准水平(Ⅲ组)和1.20×标准水平(Ⅳ组)。试验根据羊体重分2个阶段:29~35 kg和36~40 kg。于每个阶段末,每个重复屠宰1只试验羊,取其小肠组织样,运用实时荧光定量PCR技术,研究小肽转运载体1(Pep T1)、y+型氨基酸转运载体1(CAT1)、兴奋性氨基酸转运载体3(EAAT3)mRNA表达量的变化。结果表明:1)在29~35 kg阶段末,小肠中Pep T1 mRNA的表达量随着饲粮能量和蛋白质水平的提高呈先下降再上升的趋势,Ⅱ组显著低于其他3组(P0.05);Ⅳ组小肠中CAT1 mRNA的表达量显著高于其他3组(P0.05);Ⅲ组小肠中EAAT3mRNA的表达量显著高于其他3组(P0.05)。2)在36~40 kg阶段末,Ⅱ组小肠中Pep T1mRNA的表达量显著高于其他3组(P0.05);Ⅱ组小肠中CAT1 mRNA的表达量显著高于Ⅲ组(P0.05);小肠中EAAT3 mRNA的表达量随着饲粮能量和蛋白质水平的提高呈上升趋势,Ⅲ组和Ⅳ组小肠中EAAT3 mRNA的表达量显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P0.05)。由此可见,饲粮能量和蛋白质水平会影响滩羊小肠中Pep T1、CAT1、EAAT3 mRNA的表达量,使机体对小肽和氨基酸的吸收利用率随之改变,以适应滩羊的生长发育。     

饲粮中添加脂肪酸钙和烟酸铬对热应激奶牛产奶性能、生理指标及血清生化指标的影响

本试验旨在研究饲粮中添加脂肪酸钙和烟酸铬对热应激奶牛产奶性能、生理指标及血清生化指标的影响。采用随机区组试验设计,根据年龄、胎次(2～3胎)、产奶量、泌乳期相近的原则,将21头健康奶牛分为3组,每组7个重复,对照组、Ⅰ组和Ⅱ组分别饲喂基础饲粮、基础饲粮+250 g/d脂肪酸钙和基础饲粮+10 mg/kg烟酸铬。预试期10 d,正试期40 d。试验期内日平均温湿指数(THI)为79.99。结果表明:1)饲粮添加脂肪酸钙和烟酸铬分别使标准乳产量极显著提高了26.37%(P<0.01)、10.78%(P<0.01);饲粮添加脂肪酸钙使乳脂率极显著提高了31.61%(P<0.01)。2)饲粮添加脂肪酸钙和烟酸铬分别使呼吸频率显著降低了10.01%(P<0.05)、11.69%(P<0.01)。3)饲粮添加脂肪酸钙和烟酸铬分别使血清谷草转氨酶活性极显著降低了25.80%(P<0.01)、19.00%(P<0.01),血清肌酸激酶活性分别显著降低了9.88%(P<0.05)、8.89%(P<0.05);饲粮添加脂肪酸钙使血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)和丙二醛(MDA)浓度分别显著提高了14.47%(P<0.05)、23.12%(P<0.01)和38.89%(P<0.05);饲粮添加烟酸铬使血清T3、超氧化物歧化酶(SOD)浓度分别显著提高了11.84%(P<0.05)、32.61%(P<0.05);饲粮添加脂肪酸钙和烟酸铬分别使血清热休克蛋白70(HSP70)表达量显著提高了39.94%(P<0.01)、28.10%(P<0.05)。结果提示,饲粮添加脂肪酸钙和烟酸铬可提高产奶量,通过调节内分泌、增强抗氧化能力、调节HSP70表达等来增强奶牛耐热性。     

酵母铬和二氢吡啶对热应激奶牛营养物质消化率及血液生理生化指标的影响

本试验旨在研究酵母铬和二氢吡啶对热应激奶牛营养物质消化率及血液生理生化指标的影响。选取胎次、体况、泌乳期相近的荷斯坦奶牛24头,随机分成3组,即对照组(基础饲粮)、酵母铬组[基础饲粮中添加酵母铬80 mg/(头·d)]、二氢吡啶组[基础饲粮中添加二氢吡啶3.0 g/(头·d)],每组8头奶牛。预试期6 d,正试期48 d,整个试验期间温湿指数(THI)高于72。在试验第23～27天进行消化试验,用于测定营养物质消化率;在不同THI(76.7、77.5、78.0、81.0、88.1、85.7、78.9)下采集血样,分别测定血液热休克蛋白70(HSP70) mRNA的表达量,血清三碘甲状腺原氨酸(T3)与四碘甲状腺原氨酸(T4)含量、碱性磷酸酶(ALP)与肌酸激酶(CK)活性以及钠离子(Na+)、钾离子(K+)、氯离子(Cl-)浓度与电解质平衡值。结果显示:1)与对照组相比,酵母铬和二氢吡啶均能显著提高热应激奶牛的干物质采食量和粗蛋白质的消化率(P0.05),而且酵母铬还能显著提高干物质和中性洗涤纤维的消化率(P 0. 05)。2)与对照组相比,酵母铬有上调不同THI下血液中HSP70 mRNA表达量平均值的趋势(P=0.06),并在THI为81.0和88.1时显著提高HSP70 mRNA表达量(P0.05);二氢吡啶也有上调不同THI下血液中HSP70 mRNA表达量平均值的趋势(P=0.09),并在THI为81.0和85.7时显著提高HSP70mRNA表达量(P0.05)。3)酵母铬和二氢吡啶对热应激奶牛血清中T3、T4含量和ALP活性没有显著影响(P0.05)。与对照组相比,在THI为77.5和88.1时,二氢吡啶和酵母铬能显著降低血清中CK活性(P0.05)。4)与对照组相比,在THI为81.0时,酵母铬和二氢吡啶均能显著提高血清中K+浓度(P0.05);在THI为78.0时,酵母铬能显著提高血清中Na+浓度(P0.05);二氢吡啶对血清中Na+浓度无显著影响(P0.05);酵母铬和二氢吡啶对血清中Cl-浓度均无显著影响(P0.05);在THI为78.0时,酵母铬能显著提高血清中电解质平衡值(P0.05);二氢吡啶对血清中电解质平衡值无显著影响(P0.05)。综上所述,酵母铬和二氢吡啶能提高热应激奶牛的采食量及营养物质消化率,降低血清中CK活性,维持电解质平衡,缓解热应激。     

热休克蛋白70上调表达对热应激猪小肠上皮细胞凋亡的影响

本试验以谷氨酰胺作为热休克蛋白70(HSP70)诱导剂,从细胞凋亡线粒体信号转导途径探讨HSP70对热应激猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡相关因子的影响。试验以体外培养的猪小肠上皮细胞为模型,分别加入不同浓度(1、2、4、6、8、10 mmol/L)谷氨酰胺的培养基中培养24 h,提取总RNA和总蛋白,用实时荧光定量PCR和Western blot检测HSP70 mRNA和蛋白的相对表达量,筛选出谷氨酰胺诱导HSP70表达的最佳浓度。取对数生长期的细胞分为3组,分别为对照组(Con组,37℃培养12 h)、热应激组(Hs组,42℃培养12 h)、谷氨酰胺组(Gln组,6 mmol/L谷氨酰胺、42℃培养12 h)。采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测HSP70、凋亡酶激活因子-1(Apaf-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA和蛋白的相对表达量。结果表明:谷氨酰胺对HSP70上调表达呈先上升后下降的趋势,6 mmol/L的谷氨酰胺诱导时HSP70 mRNA和蛋白相对表达量最高,显著高于其他浓度(P<0.05),作为后续试验中Gln组的诱导条件。与Con组相比,Hs组细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),HSP70、Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01),而Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达量极显著降低(P<0.01)。与Hs组相比,Gln组细胞凋亡率极显著降低(P<0.01),但仍极显著高于Con组(P<0.01);Gln组HSP70 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01);Gln组Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量极显著降低(P<0.01),但极显著高于Con组(P<0.01);Gln组Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01),但极显著低于Con组(P<0.01)。由此可见,上调HSP70的表达可有效缓解热应激导致的猪小肠上皮细胞凋亡。     

艾蒿水提物对肉仔鸡血清细胞因子含量及小肠诱导型一氧化氮合成酶mRNA表达量的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平的艾蒿水提物对肉仔鸡血清细胞因子含量及小肠诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)mRNA表达量的影响。选取192只健康的1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡,随机分为4个组,每组6个重复,每个重复8只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加500、1 000、2 000 mg/kg艾蒿水提物的试验饲粮。试验期42 d。结果表明:1)与对照组相比,21日龄时,2 000 mg/kg添加组的血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-4(IL-4)的含量显著升高(P0.05),500 mg/kg添加组的血清IL-4含量和1 000 mg/kg添加组的血清IL-2含量极显著升高(P0.01);42日龄时,500 mg/kg添加组的血清IL-2含量显著升高(P0.05)。2)与对照组相比,21日龄时,500 mg/kg添加组的血清一氧化氮(NO)含量和i NOS活性及十二指肠、空肠和回肠的i NOS mRNA表达量差异不显著(P0.05),1 000 mg/kg添加组的血清NO含量和回肠i NOS mRNA表达量显著升高(P0.05),2 000 mg/kg添加组的回肠i NOS mRNA表达量极显著升高(P0.01);42日龄时,500、1 000和2 000 mg/kg添加组血清NO含量和i NOS活性及空肠i NOS mRNA表达量显著或极显著升高(P0.05或P0.01)。由此可见,饲粮中添加艾蒿水提物可以促进肉仔鸡免疫细胞因子的分泌和NO的生成,且与i NOS mRNA的表达增强有关。     

低聚木糖对仔猪生长性能、肌肉组织营养成分含量及肌纤维类型组成的影响

本试验旨在研究饲粮添加不同水平低聚木糖(XOS)对仔猪生长性能、背最长肌营养成分含量及肌纤维类型组成的影响,探讨XOS在仔猪饲粮中的最佳添加量及其对肌肉营养成分和肌纤维类型组成的调控作用。试验选取健康的21日龄"杜×长×大"断奶仔猪120头,随机分为4组,每组6个重复,每个重复5头猪。对照组饲喂基础饲粮,试验组(Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组)分别饲喂在基础饲粮中添加100、250和500 mg/kg XOS的饲粮,试验期为56 d。试验结束后,每重复选取1头接近平均体重的仔猪进行屠宰取样。结果表明:1)与对照组相比,Ⅰ组仔猪的平均日增重和平均日采食量显著增加(P0.05),Ⅱ组和Ⅲ组平均日采食量显著增加(P0.05),但末重和料重比各组之间差异不显著(P0.05);2)各组之间背最长肌粗蛋白质、粗脂肪以及游离氨基酸包括亮氨酸、甘氨酸及天冬氨酸含量差异不显著(P0.05),其他氨基酸含量试验组与对照组相比均有不同程度地升高或降低;3)与对照组相比,Ⅰ组肌球蛋白重链(MyHC)Ⅱa和MyHCⅡx mRNA相对表达量显著增加(P0.05),Ⅱ组MyHCⅠmRNA相对表达量与Ⅲ组相比显著增加(P0.05);与对照组相比,Ⅰ组腺苷酸活化蛋白激酶α、沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1和解偶联蛋白3 mRNA相对表达量显著增加(P0.05),但过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1αmRNA相对表达量各组之间差异不显著(P0.05)。由此可知,仔猪饲粮中合理添加XOS能提高生长性能,促进慢肌纤维相关基因的表达,推荐添加水平为100~250 mg/kg。     

谷氨酰胺诱导热休克蛋白70表达的研究

选取24只8周龄健康的雌性昆明小白鼠并随机分成4组,Ⅰ组为对照组.尾静脉注射生理盐水,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别注射不同剂量的Gln,注射后4h处死,取肝脏、子宫和卵巢.采用RT-PCR和Western Blot法检测HSP70 mRNA和HSP70的表达.试验结果表明.Gln注射组鼠组织中HSP70表达量均高于对照组,且HSP70表达量随着Gln注射量的增加而增加.Ⅱ组鼠肝脏、子宫和卵巢组织中HSP70蛋白表达量比对照组分别增加了9.49%、5.49%和4.84%(P>0.05);Ⅲ组鼠各组织中HSP70比对照组分别显著(P<0.05)增加了23.56%、21.10%和14.30%:Ⅳ组肝脏组织中HSP70比对照组显著增加了35.33%(P<0.05),子宫和卵巢比对照组分别极显著(P<0.01)增加了33.74%和33.77%.因此.Gln能诱导小鼠肝脏、子宫、卵巢组织细胞HSP70的表达,并且HSP70表达量随着Gln剂量的加大而增加.     

植物精油和柠檬酸复合物对肉鸡肠道屏障功能及炎症反应的影响

本试验通过研究饲粮中添加不同水平植物精油和柠檬酸复合物对肉鸡肠道屏障功能、血清细胞因子含量和关键免疫蛋白基因表达的影响,旨在探索植物精油和柠檬酸复合物在肉鸡生产上的适宜添加剂量。选用1日龄健康科宝肉鸡1 344只,随机分为4组（每组12个重复,每个重复28只鸡）,对照组饲喂基础饲粮,3个试验组（T1、T2、T3）分别饲喂添加0.8、1.0和1.5 kg/t的包被植物精油和柠檬酸复合物试验饲粮,试验期为42 d。试验结束当天,每个重复选取6只接近平均体重的肉鸡翅静脉采血,然后屠宰并取空肠、脾脏、肠系膜淋巴结（MLNs）。分别测定血清中D-乳酸（D-LA）、细胞因子的含量及二胺氧化酶（DAO）活性;并对空肠黏膜紧密连接蛋白以及脾脏和MLNs中Toll样受体（TLRs）的mRNA表达量进行测定。结果表明：与对照组相比,T2组肉鸡血清中D-LA含量和DAO活性均极显著降低（P<0.01）;T3组肉鸡血清中D-LA含量和DAO活性均显著降低（P<0.05）。T2和T3组肉鸡空肠封闭蛋白1（Claudin-1）的mRNA相对表达量均显著升高（P<0.05）,T2组闭合小环蛋白1（ZO-1）的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）。T1组血清中IL-1β含量显著降低（P<0.05）,MLNs中TLR4 mRNA表达量显著降低（P<0.05）;T2组血清中IL-1β含量极显著降低（P<0.01）,IL-2含量显著提高（P<0.05）,脾脏和MLNs中TLR4 mRNA相对表达量极显著或显著降低（P<0.01;P<0.05）;T3组血清中IL-1β含量极显著降低（P<0.01）,TNF-α含量显著降低（P<0.05）,IL-2含量显著升高（P<0.05）,脾脏和MLNs中TLR4 mRNA相对表达量极显著降低（P<0.01）。与T1组相比,T2组血清中D-LA含量和DAO活性均显著降低（P<0.05）,TNF-α含量显著降低（P<0.05）;T3组血清中IL-1β含量显著降低（P<0.05）。综上所述,饲粮中添加植物精油和柠檬酸复合物能够提高肉鸡肠道紧密连接蛋白的表达,降低肠道通透性,下调促炎细胞因子的表达,进而增强肠道屏障功能,缓解机体炎症。根据本试验结果,推荐科宝肉鸡饲粮植物精油和柠檬酸复合物适宜添加量为1.0 kg/t。     

日粮脂肪来源对热应激条件下肉兔生产性能和HSP70基因表达的影响

试验旨在研究日粮不同脂肪来源对热应激条件下肉兔生产性能和肝组织中热应激蛋白HSP70表达的影响。选取600只30日龄断奶新西兰兔,随机分成5个处理组,即对照组、2%牛油组、2%猪油组、2%玉米油组和2%大豆油组,每处理6个重复,每重复20只兔。结果显示:从采食量来看,牛油组采食量最低,显著低于玉米油和大豆油组(P0.05),且低于对照组和猪油组,但差异不显著(P0.05);从日增质量来看,对照组最低,各脂肪添加组均显著高于对照组(P0.05);从料重比来看,对照组最高,各脂肪添加组均显著低于对照组(P0.05)。从基因表达来看,与对照组相比,玉米油组和大豆油组HSP70基因表达极显著升高(P0.01),猪油组HSP70基因表达显著升高(P0.05),牛油组HSP70基因表达有一定程度的升高,但是差异不显著(P0.05)。综合来看,在热应激条件下肉兔饲粮中添加脂肪能提高日增质量,降低料重比,有效缓解热应激效应,其中以添加玉米油为宜。     

短时高温处理对意大利蝗卵子发生期HSP70蛋白表达的影响

本研究采用免疫组织化学分析方法,测定了HSP70蛋白在意大利蝗卵子发生期的表达定位及33~42℃高温处理对其相对表达量的影响。结果表明,1)在卵黄发生前期,卵母细胞和滤泡细胞均表达HSP70蛋白,而在卵黄发生期和卵黄发生后期,HSP70蛋白阳性表达位于滤泡细胞;2)在33~42℃温度范围内,随着温度升高,意大利蝗卵子发生期HSP70蛋白相对表达量呈现先上升后下降的变化趋势;其中36℃处理组HSP70蛋白相对表达量最高,显著高于27℃对照组(P0.05);42℃处理组HSP70蛋白相对表达量最低,但与27℃对照组差异不显著(P0.05)。短时高温处理对意大利蝗卵子发生期HSP70蛋白相对表达量有显著影响,推测HSP70蛋白的表达在意大利蝗抵抗短时高温胁迫过程中具有重要作用。     

白藜芦醇对氧化应激仔猪肝脏抗氧化酶、细胞因子mRNA表达及核因子E2相关因子2相关因子信号通路的影响

本试验旨在研究白藜芦醇(RES)对敌草快(diquat)诱导的氧化应激仔猪肝脏抗氧化、抗炎性能的影响。选用健康断奶仔猪30头,随机分为5组,对照组(CON组)和diquat组(DIQ组)饲喂基础饲粮,试验组(RES-10组、RES-30组、RES-90组)饲喂在基础饲粮中分别添加10、30、90 mg/kg RES的试验饲粮。于试验第15天清晨给DIQ组、RES-10组、RES-30组、RES-90组仔猪按照10 mg/kg BW剂量腹腔注射diquat建立氧化应激模型,CON组注射相同剂量灭菌生理盐水。试验期21 d。结果表明：与CON组相比,DIQ组肝脏超氧化物歧化酶1(SOD1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶-1(GPX-1)的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05);肝脏白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),而白细胞介素-10(IL-10)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);肝脏Kelch样ECH关联蛋白1(...     

运输应激对肉牛肝脏和脾脏中应激相关蛋白的影响

选取15头体况相似的健康肉牛作为研究对象,随机分为运输0h组、运输3h组和运输6h组,每组5头肉牛,采用公路运输方式运输(平均速度为80km/h)。采集各组牛肝脏和脾脏组织样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(qRT-PCR)2种试验方法检测各组肝脏和脾脏组织中应激蛋白-热休克蛋白70(HSP70)和急性期蛋白-C反应蛋白(CRP)含量的变化。qRT-PCR检测结果显示:与运输0h组相比,运输3h和6h肝脏组织中HSP70mRNA的表达量极显著升高(P0.01);而脾脏组织中HSP70mRNA只在运输应激6h后表达量显著增加(P0.05)。与0h组相比,运输应激后肝脏组织中CRP mRNA的表达量极显著升高(P0.01),脾脏组织中CRP mRNA的表达量显著升高(P0.05)。ELISA检测结果显示:与0h组相比,运输应激3h和6h肝脏中的HSP70质量浓度极显著升高(P0.01),脾脏中HSP70的质量浓度在运输6h后显著升高(P0.05);肝脏和脾脏CRP的表达在运输应激6h后极显著升高(P0.01)。结果表明:不同运输时间的运输应激可导致肝脏和脾脏中HSP70和CRP的浓度和mRNA转录水平升高,且肝脏中HSP70和CRP的表达量高于脾脏。HSP70和CRP可作为肉牛运输应激候选诊断标志物。