自交亲和与自交不亲和日本梨中S4基因的研究进展

综述了近20年日本梨中与自交亲和和自交不亲和有关的S4基因的研究进展。这些结果包括：“二十世纪”(基因型为S2S4)为自交不亲和品种,其突变品种“奥嗄二十世纪”(基因型 为S2S4SM,SM=stylar part mutant;花柱部分突变)为自交亲和型。“奥嗄二十世纪”自交亲和的原因有三点：(1)S4SM基因被删除或者是低水平表达。(2)S4SM基因仅在柱头表达。(3)S4SM基因表达较迟。这主要是由于“二十世纪”S基因座上的S4等位基因发生了高度突变成为S4SM基因或者S4等位基因被删除,导致其基因产物花柱中的S4-RNase受到高度抑制或缺乏的缘故。S4基因由997bp组成,其中85~768bp为684bp的阅读框,925~931bp和943~950bp为多聚腺苷酸信号。S4基因的表达产物为S4蛋白,S4蛋白由228个氨基酸残基组成,其中N端的27个氨基酸残基为信号肽,成熟的S4蛋白由201个氨基酸残基组成。S4蛋白的生理功能是抑制花粉的萌发和花粉管的伸长。     

利用 DDRT-PCR 鉴定芸芥自交不亲和系与自交亲和系的差异表达 cDNA

芸芥与芸薹属植物具有亲缘关系,也是芸薹属植物的重要育种资源。自交亲和性是芸芥的一种重要变异性状。为了探明芸芥自交亲和基因的表达器官,并分离与自交亲和性有关的 cDNA 片段,以芸芥的一对近等基因系,自交亲和系（SC）与自交不亲和系（SI）为试材,利用差异显示 RT-PCR 技术分别对开花前和开花后的叶片、花药和柱头进行鉴定。结果表明,不论开花前还是开花后,芸芥自交亲和系与自交不亲和系的叶片或花药间的扩增带型是一样的,但在近等基因系的柱头间得到了差异表达条带。这证明芸芥自交亲和基因不是组成型表达,而是组织特异性表达,柱头是其唯一的表达器官。在开花前的自交亲和系中共得到了2条 cDNA 片段,一条小于100 bp,另一条为750～1000 bp,在开花后的自交亲和系中得到了1条300 bp 的 cDNA 片段。据分析这3条 cDNA 片段可能与芸芥的自交亲和性密切相关。在开花前的自交不亲和系中共得到了2条 cDNA 片段,一条为500 bp,另一条为750 bp,同时在开花后的自交不亲和系中得到了1条500～600 bp 的 cDNA 片段。这些 cDNA 片段可以用来区分芸芥的自交亲和系与自交不亲和系,还可用于克隆自交亲和基因。     

大白菜自交不亲和杂种的丰产制种技术

大白菜自交不亲和杂种的丰产制种技术赵大芹，王谋强（贵州省农科院园艺所５５０００６）“八·五”期间我所选育的几个大白菜中早熟自交不亲和杂种“杂１号”、“杂２号”、“杂３号”（暂名“黔菜２号”）、“杂４号”（暂名“黔菜１号”）等新组合，在贵州中海拔地区制...     

新疆野扁桃自交不亲和花粉SFB基因的克隆及生物信息学分析

旨在克隆获得新疆野扁桃自交不亲和花粉SFB新基因,以新疆野扁桃花药为试材,应用分子同源克隆及RT-PCR等技术,并进一步采用在线软件分析SFB基因的蛋白质理化性质,实验成功克隆到了PtSFB5与PtSFB6 2个新SFB基因的cDNA全长,2个基因的cDNA全长分别为1124 bp和1072 bp,分别编码了374和348个氨基酸,2个基因都具有F-Box基因结构,属于F-Box基因家族,预测的相对分子量分别为30787.26和44037.74,等电点为5.93和5.43,均属于水溶性不稳定蛋白。     

新疆野扁桃自交不亲和基因Cullin1的克隆及生物信息学分析

旨在为今后研究新疆野扁桃的分子调控奠定良好基础。通过利用Rt-PCR技术及生物测序等方法,从新疆野扁桃的幼嫩叶片中,克隆得到了一个全新的新疆野扁桃Cullin1基因全长c DNA,命名为Pet Cullin1。并进一步的利用在线软件分析发现:Petcullin1基因全长为2677 bp,其开放阅读框2217 bp,该基因的氨基酸共有738个编码,预测得出Petcullin1蛋白的分子式为C3887H6064N1028O1133S34,原子总数为12096,相对分子质量为85814.61,理论推导出其半衰期为30 h,带正负电荷的残留的总数分别是108和113,不稳定指数和平均疏水指数分别为40.19、-0.452,该蛋白属于水溶性不稳定蛋白。     

大白菜自交不亲和系小株高产采种技术

1 建好苗床,阳畦育苗 1.1 育苗地选择 选择背风向阳、土壤肥沃、便于管理,上茬没有种过白菜的地块育苗,为苗健壮生长创造条件.     

大白菜自交不亲和系选育注意事项

大白菜是异花授粉作物,在大白菜自然群体中,产生自交不亲和性.自交不亲和系的选育实际上就是从杂合的群体中选出具有自交不亲和性较强的纯核自交系.为了确保自交不亲和系在生产上应用时达到95%以上的杂交率,在自交不亲和系的选育时应注意以下问题.     

大白菜自交不亲和系种子生长发育规律研究

以小麻叶自交不亲和系为试材,研究了大白菜种子生长发育规律。种荚长、直径授粉22天达最大,种子直径授粉29天达最大;授粉43天种荚、种子干重达最重。授粉47天,种子发芽率、活力指数最高。     

大白菜自交不亲和系小株采种高产技术

1建好苗床，阳畦育苗1.1育苗地选择选择背风向阳、土壤肥沃、便于管理、上茬没有种过白菜的地块育苗，为苗子健壮生长创造条件。1.2建标准阳畦，提高光能利用率阳畦一般在封冻前建好，东西向，后墙高70~75cm，墙厚40cm，畦前无墙，以减少遮光。畦两头为山墙，从后墙的高度向前倾斜于地面，以达到充分利用光能和保温的目的。阳畦内每10m2均匀撒施腐熟捣细的圈肥150~200kg，三元素复合肥0.5kg，松刨二三遍，充分拌匀，整细拉平踏实。为减轻寒风侵袭，确保苗子安全生长，在离后墙50cm处架设牢固致密风障，向前倾斜30度。在播前7d将阳畦浇透水，…     

甘蓝自交不亲和相关基因BoPUB9的克隆及表达分析

自交不亲和性(self-incompatibility,SI)是指植株的雌蕊对自身花粉和异体花粉进行识别从而抑制自身花粉萌发的特性, PUB (Plant U-Box)蛋白在植物抗逆及信号转导过程中起着重要的作用。本研究通过分析甘蓝自花授粉0～60min的柱头转录组数据,筛选到1个受自花授粉诱导上调表达的PUB蛋白编码基因BoPUB9。BoPUB9 cDNA序列长度为1368 bp, gDNA序列全长1720 bp,含有1个臂重复结构域和1个U-box结构域。荧光定量PCR结果显示, BoPUB9基因在甘蓝的不同组织中均有表达,在萼片中的表达量最高,花瓣、雄蕊、柱头表达量次之,在花粉花蕾中表达量相对较低,同GUS染色结果保持一致。BoPUB9基因在自花授粉0～30 min内快速上调表达, 15 min后为异花授粉后表达量的20多倍,在30min后达到差异最大,自花授粉后的表达量为异花授粉的40多倍。亚细胞定位结果显示,BoPUB9蛋白在细胞核和细胞质中均有表达,且BoPUB9蛋白在大肠杆菌中被成功诱导表达,相对分子质量为51 kD,与预测结果一致。酵母双杂交与poll-down结果显示...     

农杆菌介导FT基因转化嘎拉苹果的研究

用农杆菌介导法对苹果品种嘎拉转化FT基因进行了研究,建立了苹果离体叶片高效再生体系,在含BA 5mg／L＋IAA 0．5mg／L的MS培养基上,以离体叶片远轴面（叶背面）向上,经过14d的暗培养获得再生不定芽和再生植株,再生率达97％。在转基因再生体系中,以头孢噻肟钠500mg／L和卡那霉素5mg／L,作为脱菌培养和选择培养的条件,经过感染携带拟南芥FT基因的农杆菌,获得了一批转FT基因的植株,经PCR检测,目的基因已经整合到苹果基因组中。     

超声波处理对苹果花粉介导转基因的影响

为了探讨花粉介导转基因过程中附加超声波处理对苹果品种丹霞和嘎拉花粉的影响,对苹果花粉处理的缓冲液和超声波的各参数进行了选择,设置了不同的缓冲液pH值、蔗糖浓度;超声波处理功率、时间、次数等。结果表明：适合苹果花粉处理的缓冲液蔗糖浓度为10％,pH值为5．4;超声波处理功率、时间、次数等各参数对苹果花粉的萌发率和破碎率有显著影响。     

利用AFLP分子标记鉴定苹果砧木

利用AFLP分子标记技术,对30个苹果砧木进行研究。从64对引物组合中筛选出3对多态性高、分辨能力强的引物用于扩增,共获得199条带,其中多态性带176条,多态性率为88．4％。扩增结果显示,3对引物组合在12个砧木中扩增出特征带,且每对引物组合均能将所有砧木鉴别开,表明AFLP技术用于苹果砧木鉴定的效率很高。通过聚类,对供试砧木的遗传关系进行分析,为中国优良苹果砧木资源的进一步收集和利用提供科学依据。     

苹果主栽品种的SSR分子标记鉴别

为了探索方便快捷的苹果苗木监测方法，通过正交试验，建立了苹果的SSR反应体系（10×PCRBuffer2.0μl, 25mmol/MgCl21.2μl, 2mmol/LdNTPs2.0μl, 10μmol/L引物1μl，5U/μlTaq聚合酶0.2μl）。从33对引物中筛选出10对多态性高，分辨能力强的引物；仅三对引物（02b1,GD12,GD162）就能鉴别供试的45个品种。并对生产上应用SSR技术检测苹果品种真实性和纯度作了展望。     

红将军苹果的脱毒与检测技术研究

以中熟红富士品种红将军的继代培养4～5代试管苗为试材,进行脱毒处理,并利用ELISA和RT-PCR技术检测脱毒效果.结果表明:红将军苹果试管苗在38℃高温条件下恒定热处理20 d,再二次茎尖培养后,试管苗脱毒率达86.4%～100%,可以有效脱除ASSVd、ASGV、ASPV、ApMV和ACLSV等主要的苹果病毒.     

苹果白粉病抗性评价

苹果白粉病是危害苹果的重要病害之一。本试验通过人工喷雾接种苹果白粉病的方法,研究了10个不同苹果品种对白粉病的抗病性。抗性鉴定结果表明,‘鸡冠’、‘早嘎啦’、‘美国八号’、‘伏花皮’和‘华红’发病轻,属于抗病品种,‘信浓红’、‘富士’、‘秦阳’和‘国光’发病较重,属于感病品种,且幼嫩的叶子较成熟的叶片容易发病。本试验结果为抗白粉病的机制研究、培育抗病新品种等提供了重要依据。     

苹果采后软化研究进展

本文综述了近年有关苹果成熟软化方面的研究进展,介绍了苹果软化的特性、细胞学基础和影响苹果采后软化的主要原因 （采前、采收时和采收后）,并就苹果软化的进一步研究提出了设想。     

转CpTI基因苹果种植地外源基因残留及对土壤微生物的影响

为研究转Cp TI基因苹果对土壤生态系统的影响,本研究分别提取8年生转基因嘎拉苹果植株根际土、根围土和表层土的DNA,PCR扩增检测土样中的外源Cp TI基因。结果显示：采集的转基因苹果根围土和根际土中均检测到外源Cp TI基因,两个株系的表层土检测到了外源Cp TI基因;含有外源基因的土壤分离培养的微生物中未检测到Cp TI基因,表明外源Cp TI基因在苹果种植地有残留,但在本研究条件下未发生向根系土壤可培养微生物的水平转移。进一步利用灭菌基质均匀喷洒微生物菌剂后移栽嘎拉、富士、王林转基因苹果植株的方法,研究转基因植株对土壤微生物的影响。结果表明：转基因苹果对根际土中的放线菌无明显影响;移栽30~60 d根际土中的细菌和真菌数量显著多于对照;随着移栽时间延长,差异程度减小,移栽90 d时,3个品种转化植株与对照根际土细菌含量以及转基因嘎拉和王林根际土真菌数量均无显著差异,说明转基因苹果对土壤微生物的影响非常有限。     

乙醇酸氧化酶基因植物表达载体构建及转化苹果的研究

为了研究GO基因在植物中的功能,获得转基因植株,用限制性内切酶将乙醇酸氧化酶(GO)基因从克隆载体pBSSP5上切下,连接到植物双元表达载体pBin117的CaMV 35S启动子和NOS 终止子之间,成功构建了GO基因植物表达载体pBinGO.在此基础上以嘎拉苹果叶片为受体,通过根癌农杆菌介导法将GO基因导入苹果,获得了2个抗性芽,PCR检测初步表明GO基因已整合到嘎拉苹果基因组中.     

中国苹果农药残留研究初报

为评估中国苹果农药残留状况，2003—2004年从主产区采集样品153个（渤海湾地区65个，西北黄土高原地区88个），检测29种农药的残留量。96.08%的样品检出农药残留，13.07%的样品农药残留超标。14种农药检测到了残留，但只有多菌灵、敌敌畏、对硫磷和倍硫磷等4种农药出现残留超标，超标率分别为6.54%、4.58%、2.61%和0.65%。分析了残留超标原因，提出了降低农药残留对策。