改良热硼酸小量法提取番木瓜果肉总RNA

通过改良热硼酸小量法提取两个发育时期的番木瓜果实果肉总RNA.结果表明,这种方法能排除番木瓜果肉中多糖、木瓜蛋白酶、色素等物质的干扰,提取到高质量RNA,OD260/OD280在1.7～2.0之间,RNA完整,无DNA、蛋白质等污染.经检验,可以用于后续cDNA-AFLP等分子生物学实验.     

几种果实不同组织总RNA提取及质量分析

以菊水梨为试验材料,通过2种改良CTAB法对果实不同成熟阶段提取的总RNA质量和产量的变化的影响,研究果实不同成熟阶段果皮和果肉总RNA提取的质量和产量,并针对梨果实不同成熟阶段采用不同的改良CTAB法,以较低的成本从果实中提取完整性好、质量高的总RNA。同时提取近成熟的红富士葡萄、富士苹果和丰香草莓3种果实总RNA。总RNA的质量和产量分析结果表明,方法Ⅰ和Ⅱ分别适用于成熟度较低和较高梨果实总RNA的提取,方法Ⅰ也适用于其它3种近成熟果实总RNA提取。并通过RT-PCR验证,所提取的总RNA可以满足基因克隆和表达等分子生物学实验的要求。     

苹果属RNA高效快速提取新方法

研究开发了一种新的适用于苹果属组培苗总RNA快速、高效地提取方法。采用此方法可以在3~4 h内得到 质量高、产量大、完整性好、无DNA污染的苹果组培苗的总RNA。     

适合转录组测序的苹果果实RNA提取方法的筛选

为了筛选适用于转录组测序的苹果果实RNA提取方法,试验以苹果叶片、野生苹果未成熟和成熟果实、栽培种苹果成熟果实为材料,采用7种方法对4种材料进行RNA提取,并通过凝胶电泳、Agilent 2100 RNA芯片对提取的总RNA进行质量检测。结果表明,采用的7种方法中有2种方法可以成功提取4种材料的RNA,证实改良CTAB法是适合转录组测序的苹果果实RNA提取方法。     

田间苹果成熟组织RNA高效提取方法

针对田间苹果成熟组织富含多酚、多糖和大量次生代谢产物的特点,建立了适合田间苹果不同组织的高效RNA提取方法,以不同季节田间生长的苹果叶片和皮层为材料,用此方法均能在2 h左右完成超过10个样品的总RNA提取,质量高、完整性好的总RNA,可用于田间苹果病毒RT-PCR检测,获得良好效果.经反复大量试验证实,该方法适合田间...     

树莓果实总RNA提取方法的比较研究

比较了SDS法和Trizol法提取树莓果实总RNA的效果。结果表明:Trizol法提取的RNA经电泳检测,未见条带,说明Trizol法并不适合富含多糖多酚的树莓。SDS方法提取树莓果实总RNA完整性好,28S和18S条带清晰,OD260/OD280值为1.83,在1.7～2.0之间,OD260/OD230值为2.01。结果证明,SDS法提取的总RNA可直接用于分子克隆等分子生物学实验。     

叶面喷施硼酸对'凉香'苹果叶片功能和果实品质的影响

硼是果树生长发育的重要元素,研究生长季节叶面喷施硼酸对早熟富士品种'凉香'苹果叶片功能和果实品质的影响。结果表明:叶面喷施一定浓度的硼酸,能增加叶片百叶重、净光合速率、蒸腾速率;在0.05%～0.15%浓度范围内,随叶面喷施硼酸浓度的增加,果实中的可溶性固形物、可溶性糖和风味物质含量明显升高。表明叶面喷施硼酸,能显著改善'凉香'叶片功能,提高果实内在品质。     

苹果果实人工增色方法

由于采收过早、气候影响及结果部位遮光等原因,往往导致苹果果实着色不佳,影响外观品质,降低经济效益。现介绍几种人工使果实增色的方法。一、激素增色法1．在正常采收前10－30天,喷施750－1000倍乙烯利溶液,在乙烯利溶液中加入（40－60）×10（－6）的萘乙酸（或萘乙酸钠盐）,可防止落果,同时喷药后的果实全红和半红果明显增多,且含糖量增加。喷施乙烯利时应注意：处理树必须健壮,同时使果面充分着药。2．在果实膨大期和果实着色期两次喷布（500－600）×10（－6）的稀土溶液,对苹果着色和增产有明显作用,能使80％－96％的果实…     

三种提取酿酒葡萄不同组织总RNA的方法比较

通过对比改良SDS-酚法、改良CTAB法和改良Trizol法3种RNA提取方法,提取"赤霞珠"(‘Cabernet Sauvignon’)葡萄芽、叶片和果皮RNA的质量及浓度,并进一步分离、纯化得到较高质量的RNA。结果表明:改良SDS-酚法与改良CTAB法适用于芽和叶片的提取,可以获得较好质量、高浓度的总RNA,其28S与18S亮度极高,5S清晰可见,完整性较好;改良Trizol操作环节较少,省时,质量好,条带锐利,可清晰看出28S与18S亮度比为2∶1,虽提取的样品浓度较低,但足以供下一步研究使用。     

CTAB法高效提取苹果叶片DNA的研究

为研究CTAB法在正常条件和逆境条件下,从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的苹果树叶片中分离出高质量的基因组DNA,以抗旱能力较强的八棱海棠(Malus micromalusRehd. )和抗旱性较弱的平邑甜茶(Malus hupehensis pamp Reld.)幼苗为试验材料.用20%聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG6000)模拟干旱,采取CTAB提取缓冲液,按一定比例加入PVP和β-巯基乙醇,用Tris平衡酚-氯仿-异戊醇除去蛋白质及杂质,在粗提时用异丙醇沉淀DNA,并用DNA洗液(10 mmol/L醋酸铵,75%乙醇)洗涤DNA,在纯化时用乙醇沉淀DNA,且没有加入RNase去除RNA的方法,分别提取2个品种正常和干旱胁迫的苹果属叶片总DNA,并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测.结果表明:此方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,得到高质量、特征带形清晰的大量DNA.并就提取过程中遇到的问题,提出了相应的解决办法.     

Phenolic compounds and antioxidant activity of the apple flesh and peel of eleven cultivars grown in Brazil

The total phenolic, flavanol, monomeric anthocyanin contents and the antioxidant activity of flesh and peel of 11 apple cultivars from Brazil were investigated. Concentrations of the parameters measured differed significantly among the apple cultivars and were highest in the peel compared to the flesh. Total phenolic content (mg GAE/100 g fresh matter) ranged from 128.3 (Golden Delicious) to 212.0 (Epagri-F₅P₂₈₃) in the flesh and 304.6 (Golden Delicious) to 712.6 (Catarina) in the peel. Total flavanol content (mg CAE/100 g fm) varied from 11.7 (Epagri-SJ11) to 28.2 (Epagri-F₄₃P₂₃) and from 32.4 (Epagri-SJ11) to 147.7 (Catarina) in the flesh and peel, respectively. COOP-24 peel had the highest total anthocyanin content. The Epagri-F5P283 and Epagri-F43P23 flesh and Catarina peel had the highest antioxidant activity while Golden Delicious flesh and peel had the lowest. The total phenolic content and antioxidant activity were significantly correlated in both flesh (R² = 0.717) and peel (R² = 0.716). The contribution of phenolics to the antioxidant activity in peel suggests that their removal may induce a significant loss of antioxidants.     

枇杷果实总RNA的提取及八氢番茄红素合成酶基因(PSY)片段的克隆

【目的】为从枇杷果实中提取高质量的RNA,【方法】以枇杷果实为材料,对6种总RNA提取方法进行分析和比较。【结果】结果表明,在裂解前先用70%丙酮和80%乙醇分别对枇杷果皮和果肉进行预处理,再结合CTAB-LiCl法,得到的总RNA质量较好,OD260/OD280在1.8～2.2,OD260/OD230超过2.0,得率分别为幼果果皮56.78μg.g-1,幼果果肉40.62μg.g-1,成熟果果皮40.86μg.g-1,成熟果果肉9.24μg.g-1;并根据其他植物的八氢番茄红素合成酶基因(PSY)保守区设计引物,用以上方法提取的RNA为模板进行RT-PCR,得到453 bp的基因片段,其推导的氨基酸序列与其他植物的同源性高达95%,推测该片段为PSY基因。【结论】先用70%丙酮和80%乙醇分别对枇杷果皮和果肉进行预处理,再结合CTAB-LiCl法,得到的RNA质量好,可用于后续的分子生物学研究。     

苹果叶片总蛋白提取及其双向电泳分析

蛋白质提取方法和电泳条件的建立是蛋白质组学研究中双向电泳分析的关键。通过比较不同提取方法,包括酚/SDS抽提、TCA-丙酮沉淀法、甲醇/醋酸铵沉淀法以及改良HB-酚抽提方法。此外,还优化了样品上样量、等电聚焦程序设置等条件。从所得2-D图谱分离效果来看,改良HB-酚抽提方法所得蛋白点数最多,2-D图谱背景清晰、分离效果好,明显优于其他3种方法。300μg上样量可作为苹果叶片总蛋白2-DE分析的理想的上样量,同时优化了等电聚焦程序,最终得到的2-D图谱分离效果较为理想。该研究的开展也为苹果叶片蛋白质组学后续研究奠定了基础。     

柑橘及近缘属总RNA的有效提取

采用改良的异硫氰酸胍法提取柑橘及其近缘属的总RNA,得到了较高纯度的RNA分子,实验简便、快速。用同位素标记的2个线粒体基因探针杂交国庆1号温州蜜柑的总RNA,分别检测到一条转录本,说明提取的总RNA适合于Northern分析等分子生物学操作。     

刺五加总RNA提取方法的比较

为了获取到高质量的刺五加总RNA,以叶片为试材,比较不同提取方法的提取效果。结果表明,改良的异硫氰酸胍法效果最优,方法简单、经济,通过该方法获得的总RNA能够很好的满足后续分子生物学实验的要求,试剂盒方法效果次之,CTAB法效果第三,Trizol法最差。     

山楂总DNA提取方法的比较

为选择一种快速、简单、有效的山楂总DNA的提取方法,分别应用改良CTAB法、改良SDS法和QIAGEN试剂盒法提取山楂幼嫩叶片的总DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RAPD对所提取的总DNA进行检测。QIAGEN试剂盒法简单省时,提取的山楂总DNA产量高、纯度高、杂质少、DNA碎片少。以该法提取的总DNA为模板进行RAPD扩增,谱带清晰,多态性、稳定性、重复性好。QIAGEN试剂盒法是较为理想的山楂总DNA提取方法,该法提取的总DNA适用于PCR扩增和其他分子生物学研究。     

不同着色期荔枝果皮总RNA的提取及mRNA差显分析

以妃子笑和糯米糍2个主栽荔枝品种不同着色期的果皮为试材,经过大量的对比和筛选,采用改良Bugos法提取果皮中的总RNA,经核酸蛋白测定仪测定和凝胶电泳显示提取的总RNA完整性强,质量好,产率高(最高可达318.7μg/g),可用于RT-PCR等分子生物学实验。进一步的DDRT-PCR分析表明:高分辨力的cDNA片段在500～2 000 bp之间,不同品种、不同着色期的荔枝果皮,基因表达有较大差异。     

苹果水心病无损检测与防治研究进展

苹果水心病是一种果实生理病害,在所有苹果的栽培生长区域均有发生。品种、果实成熟度、温度、栽培条件、果实大小、矿质营养、贮藏条件等因素影响苹果水心病的发生。目前其无损检测的主要方法有光密度法、X-射线法、质量密度法和磁共振影像法。补充钙素营养、增施有机肥、适时采收、合理修剪等是防治苹果水心病的关键措施。