鸡新城疫,传染性支气管炎二联油乳剂灭活疫苗试验研究报告（I报）：NDV,…

本研究根据ＮＤＶ、ＩＢＶ二种病毒能在鸡胚中繁殖的特点，通过筛选上述二种病毒的最适稀释比例，将混合毒种接种９～１０日龄鸡胚尿囊腔内（简称同胚培养）使接种鸡胚尿囊液９６ｈ二种病毒毒价同时达到高峰，每０．１ｍｌ尿素液含ＮＤＶ≥１０＾８ＥＩＤ５０，ＩＢＶ≥１０＾７ＥＩＤ５０。本试验用兔抗ＮＤＶ，ＩＢＶ血清抗体封闭相应病毒测定混合毒获得成功，本研究目的在于为制备鸡二联油乳灭活功时改进繁毒方法，降低疫苗成本。     

鸡新城疫／传染性支气管炎二联油乳剂灭活疫苗试验研究报告（Ⅱ）：疫苗…

根据ＮＤＶ、ＩＢＶ二各病毒混合毒种的最适稀释比例，将混合毒种接种９－１０龄鸡胚尿囊腔内（简称同胚培养），使接种鸡胚９６ｈ二种病毒毒价同时达到高峰，０．０１ｍｌ尿囊液含：ＮＤＶ≥１０＾８ＥＩＤ５０、ＩＢＶ≥１０＾７ＥＩＤ５０。收获同胚培养的胚毒，制备同胚培养的胚毒，制备油乳剂灭活疫苗。用三批疫苗分别免疫１８日龄雏鸡，免疫后４周二联疫苗的有效抗体分别为：ＮＤ血凝抑制抗体（ＨＩ）≥１：１６、ＩＢ中和抗体     

鸡胚接种NDV病毒后尿囊液量及血凝效价的研究

鸡胚接种ＮＤＶ病毒后尿囊液量及血凝效价的研究伍富尧，刘治西（莱阳农学院）王元彬，王洪本（临沂市畜牧局）试验Ｉ为了解不同来源的鸡胚接种ＮＤＶ后的尿囊液量及其血凝（ＨＡ）滴度的差异，进行本试验。１材料和方法１．１毒种新城疫毒种为ＬａＳｏｔａ弱毒株，由中监...     

不同毒株鸡传染性支气管炎病毒与鸡新城疫病毒接种鸡胚联合培养相互作用研究

本实验目的在于探讨不同毒株鸡传染性支气管炎病毒和鸡新城疫病毒混合接种同一鸡胚尿囊腔培养时二者之间的相互作用。分别将按２００倍、５００倍、１０００倍不同浓度稀释的鸡传染性支气管炎病毒Ｆ３株、肾型Ｊ株、Ｈ１２０２８／８６株,Ｈ５２和Ｈ１２０株和１００倍稀释的Ｌａｓｏｔａ鸡新城疫病毒联合接种到１０日龄鸡胚尿囊腔,同时设单独培养作对照,９６小时后收取尿囊液,用对流免疫电泳法检测鸡传染性支气管炎病毒效价,用血球凝集试验检测尿囊液鸡新城疫病毒效价。结果表明,鸡新城疫病毒对鸡传染性支气管炎病毒增殖无明显促进作用,但无抑制现象;鸡传染性支气管炎病毒浓度过大时,对鸡新城疫病毒有一定抑制作用,在适当浓度时二者之间无干扰作用。以ＮＤＶ１００倍ＩＢＶ１０００倍稀释混合作用后联合接种培养对二者效价均无明显干扰,ＮＤＶ血凝效价可达１１ｌｏｇ２,ＩＢＶ对流免疫电泳沉淀效价可达９ｌｏｇ２,效果最佳。联合培养省时、省力、节约鸡胚损耗。     

四种消毒剂对鸡新城疫病毒杀灭效果的比较

应用血凝试验检测中日合资爱丽丝畜牧有限公司送检的四种５％的消毒剂对鸡新城疫病毒的杀灭效果。经过消毒剂对鸡胚致死性实验和ＮＤＶ城鸡胚中使用浓度的选择实验,确定将消毒剂分别做１：２５０,１：５００,１：１０００,１：２０００稀释后,与１：５００的ＤＮＶ等量混合,在体外作用不同时间后,接种鸡胚尿囊腔内培养７２ｈ,以收取的鸡胚尿囊液血凝价为指标,判断四种消毒剂对ＮＤＶ的杀灭效果。结果表明Ⅲ,Ⅵ号消毒剂对Ｎ     

鸡新城疫、产蛋下降综合征二联油佐剂灭活疫苗的研制

１　材料和方法　１１　抗原制备　分别将ＮＤＬａｓｏｔａ株和ＥＤＳ７６种毒接种９～１１日龄鸡胚、鸭胚增殖病毒,收获感染胚液,经检测血凝价（ＨＡ）ＮＤ为≥１∶６４０,ＥＤＳ７６≥１∶２０４８０,病毒含量以尿囊腔内注射的感染量≥１０６０ＥＩＤ５０／０１ｍｌ时,可用于制苗用毒,经甲醛溶液３７°Ｃ灭活备用。１２　油相制备　取１０号白油,司本８０按一定比例混合后加硬脂酸铝少量,随加随搅拌,煮沸至透明为止,高压灭菌后备用。１３　水相制备　将灭活的Ｌａｓｏｔａ．ＥＤＳ７６尿囊液按一定比例混匀后,加入吐…     

鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究──EDS_（76）—NE_（4）株病毒的培养与鉴

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚（ＣＥ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＣＥＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１∶２０４８０─１∶３２７６８０倍。     

鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究：EDS76—NE4株病毒的培养与鉴定

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＥＣＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１：２０４８０－１：３２７６８０倍。     

巢式PCR快速鉴定鸡传染性支气管炎病毒的研究

鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）经鸡胚增殖后,直接用尿囊液提取ＲＮＡ后反转录成ｃＤＮＡ,用ＩＢＶ基因３’端的ＵＴＲ１－／ＵＴＲ２＋和ＵＴＲ３－／ＵＴＲ４＋两对引物进行巢式ＰＣＲ,所检测的４个ＩＢＶ标准参考株和１６个ＩＢＶ野毒株均得到了预期的１７４ｂｐ大小的片段,而鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）,鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）及正常鸡胚尿囊液经同样处理没有可见片段出现。本试验不需纯化册毒只需０５ｍｌ病毒尿囊液即可在２４小时内得到准确的试验结果。这表明与其它ＩＢＶ鉴定方法相比,该法具有快速、灵敏、特异的优点。     

鸡减蛋综合症油乳剂灭活苗的试制与应用

采用鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）Ｋ－１１株细胞毒为种毒,通过鸭胚盲传５代,使其扩增,收获尿囊液作为基础种子毒。基础各 非免疫歪 增殖动态的试验表明,ＥＤＳ－７６病毒在羊水、尿囊膜（包含羊膜）、尿囊液中含量较高,增殖动态趋于一致;接种病毒后１２０ｈ为最佳收毒时间,突破了传统的只收集尿囊液作为病毒材料的做法,使收 病毒材料由原来的每胚５．２ｍＬ增加到每胚４９．４ｍＬ,显著降低了研究费用和制苗成本。确定     

禽流感RT-PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性,ＳＰＦ感染鸡粪便８７份,ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份,电镜检测了２３份样品,仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释,可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天,而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间（只需８小时左右）,可从分子水平上对ＡＩＶ进行早期快速诊断和流行病学调查     

鸡减蛋综合征的研究Ⅱ.鸡减蛋综合征病原的分离和鉴定

用某鸡场发生减蛋综合征病鸡的输卵管组织接种１０－１２日龄鸭胚盲传，分离到一株ＥＤＳ－７６·ＥＸＫ２病毒。自第３代起至第１０代，均从鸭胚尿囊液中检出血凝素，凝集鸡红细胞的特性可被ＥＤＳ－７６阳性血清所抑制。鸭胚分离毒不能凝集免红细胞。应用第３和第４代鸭胚尿囊液混合毒经口腔、鼻腔和眼途径人工感染健康产蛋鸡，成功地复制了ＥＤＳ－７６。攻毒后３５天内１１只试验鸡的总产蛋数无明显变化，产蛋率为８５～９４％，     

鸡减蛋综合征的研究──Ⅱ．鸡减蛋综合征病原的分离和鉴定

用某鸡场发生减蛋综合征病鸡的输卵管组织接种１０～１２日龄鸭胚盲传，分离到一株ＥＤＳ－７６·ＥＸＫ２病毒。自第３代起至第１０代，均从鸭胚尿囊液中检出血凝素．凝集鸡红细胞的特性可被ＥＤＳ－７６阳性血清所抑制。鸭胚分离毒不能凝集兔红细胞。应用第３和第４代鸭胚尿囊液混合毒经口腔、鼻腔和眼途径人工感染健康产蛋鸡．成功地复制了ＥＤＳ－７６。攻毒后３５天内１１只试验鸡的总产蛋数无明显变化．产蛋率为８５～９４％，但产各种异常蛋占总产蛋数的２９％。电镜下发现原囊液中病毒颗粒呈球形、大小为７０～８０ｎｍ、无囊膜。     

新城疫病毒在鸡胚不同组织增殖的研究

不同新城疫病毒Ｆ４８Ｅ８、Ｎ－７９、ＬａＳｏｔａ和分离株Ｘ以１∶１００００稀释接种９日龄ＳＰＦ鸡胚,每胚０．２ｍｌ,结果发现,Ｆ４８Ｅ８和分离株Ｘ毒力较强,可在５０小时左右致死鸡胚,ＬａＳｏｔａ和Ｎ－７９较弱。Ｆ４８Ｅ８和Ｘ株接种鸡胚的肌肉、肝脏、脑和尿囊液均有大量病毒存在,而Ｎ－７９和ＬａＳｏｔａ只在尿囊液中有大量病毒存在,胚体病毒极少。     

新城疫病毒在鸡胚不同组织增殖的研究

不同新城疫病毒Ｆ４８Ｅ８、Ｎ－７９、Ｌａ Ｓｏｔａ和分离株Ｘ以１：１００００稀释接种９日龄ＳＰＦ鸡胚,每胚０．２ｍｌ,结果发现,Ｆ４８Ｅ８和分离株Ｘ毒力较强,可在５０小时左右致死鸡胚,Ｌａ Ｓｏｔａ和Ｎ－７９较弱,Ｆ４８Ｅ８和Ｘ株接种鸡胚的肌肉,肝脏,脑和尿囊液均有大量病毒存在,而Ｎ－７９和Ｌａ Ｓｏｔａ只在尿囊液中有大量病毒存在,胚体病毒极少。     

鸽新城疫病毒野毒PB9601株的致病性研究

用不同方法测试了从新城疫患鸽分离到的新城疫病毒（ＮＤＶ）野毒ＰＢ９６０１株的致病性。结果,该毒株对１日龄ＳＰＦ雏鸡的脑内接种致病指数为２．００,对６周龄ＳＰＦ鸡静脉接种致病指数为０．００;该毒株对６周龄左右鸽有很强的致病性,有的血清中已有一定量的抗鸽ＮＤＶ抗体;经ＳＰＦ鸡胚传１３代的尿囊液病毒对鸽的半数致死量约为１２个ＴＣＩＤ５０。由此认为,ＰＢ９６０１株ＮＤＶ是对鸡致病性很弱但对鸽呈高度致病性的毒株,可作为国内鸽ＮＤＶ强毒的参考株。     

鸡新城疫、传染性支气管炎二联油乳剂灭活疫苗试验研究报告(Ⅰ报)——NDV、IBV同胚培养繁毒效果试验

本研究根据NDV、IBV二种病毒能在鸡胚中繁殖的特点,通过筛选上述二种病毒的最适稀释比例,将混合毒种接种9~10日龄鸡胚尿囊腔内(筒称同胚培养),使接种鸡胚尿囊液96h二种病毒毒价同时达到高峰,每0.1ml尿囊液含NDV≥10~8EID_(50)、IBV≥10~7EID_(50).本试验用兔抗NDV、IBV血清抗体封闭相应病毒测定混合毒获得成功.本研究目的在于为制备鸡二联油乳剂灭活苗时改进繁毒方法,降低疫苗成本.     

鸡新城疫,减蛋综合征,传染性支气管炎三联油佐剂灭活苗的研究…

用新城疫病毒克隆７９株，减蛋综合征病毒ＮＥ４株和传染支气管炎病毒Ｍ１株分别接种于鸡胚和鸭胚，并收取其鸡，鸭胚尿囊液毒，经甲醛灭活，按一定经例配比，以矿物油为佐剂制成三联油佐剂灭活苗。本苗接种于产蛋后备鸡，免疫后７天产生免疫应答，免疫后３０天保护率达９０％－１００％，免疫后六个月攻毒，ＮＤ和ＩＢ保护率１００％，ＥＤＳ７６为９５％。１９９２－１９９４上半年，本苗在江苏，安徽，山东等省的一些鸡场免疫十万     

环磷酰胺预处理制备兔抗Ⅰ型鸭肝炎病毒高免血清

以正常鸡胚尿囊液和环磷酰胺预处理试验兔, 再以Ⅰ型鸭肝炎病毒（Ｄｕｃｋ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ Ⅰ, ＤＨＶ Ⅰ） 标准强毒（ＡＴＣＣ, Ｃ９／Ｄ２） 接种后致死鸡胚的尿囊液, 经灭活、乳化制成油佐剂抗原多次免疫试验兔, 获得了鸡胚中和效价（ＥＰＤ５０） 达１∶３２ 以上的兔抗Ⅰ型鸭肝炎病毒高免血清（ＤＨＶ ⅠＳ） 。     

新城疫病毒Lastota株在鸡胚中的繁殖动态研究

用新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｌａｓｏｔａ株尿囊腔接种１０月龄非免疫鸡胚，以血凝（ＨＡ）试验检测接种后２４、４８、７２、９６、１２０、１４４和１６８小时所收集的鸡胚液（尿囊液和羊水）、胚体、尿囊膜的ＨＡ价。结果表明，在上述时间内，胚体、尿囊膜的含毒量很低，无收获价值；病毒在鸡胚液中自接种后２４小时繁殖呈线性上升，至１２０小时，胚液中含毒量最高，以后则下降，故此时是收获的最佳时间。